Electroforesis

1. ELECTROFORESIS
QFB HERNANDEZ. QFB ZAMORANO. QFB RODRIGUEZ. | QFB DIEGO AGUILAR GOMEZ. | UNIPUEBLA, UNIVERSIDAD DE PUEBLA.

2. QUE ES ELECTROFORESIS?
Es una técnica para la separación de moléculas según la movilidad de estas en un campo
eléctrico.
La separación puede realizarse sobre la superficie hidratada de un soporte solido
(electroforesis en papel o en acetato de celulosa), a través de una matriz porosa (electroforesis
en gel) o bien en disolución (electroforesis libre).
Dependiendo de la técnica que se use, la separación obedece en distinta medida a la carga
eléctrica de las moléculas y su masa.
Invitrogen E-Gel Power Snap Electrophoresis System.

3. Electroforesis en acetato de celulosa
La electroforesis con acetato de celulosa juega en
la actualidad un papel muy importante en los
procedimientos rutinarios de diagnostico clínico,
pero también ayuda a investigar una amplia gama
de temas en ciencias de la vida.
Permiten separar las proteínas principalmente por
su carga.
Con las tiras de acetato de celulosa se pueden
separar fácilmente todos los materiales de las
muestras que migren ante un campo eléctrico.

4. Electroforesis en gel
La electroforesis en gel es un grupo de
técnicas empleadas por los científicos para
separar moléculas basándose en
propiedades como el tamaño, la forma o el
punto isoeléctrico.
La electroforesis en gel se utiliza
generalmente con propósitos analíticos,
pero puede ser una técnica preparativa
para purificar moléculas parcialmente
antes de aplicar espectrometrías de
masas, PCR, clonación o secuenciación de
ADN.

5. ELECTROFORESIS LIBRE O DE FRENTE MOVIL
Es aquella en la cual las partículas se mueven de forma libre en el
medio en el que se encuentran dispersas. Las sustancias a separar
se introducen en un tubo en forma de U, disueltas en un tampón de
pH y fuerza iónica adecuados. Se colocan los electrodos en sendos
brazos del dispositivo, entre los que se crea un campo eléctrico
provocando que las moléculas de la muestra (por ejemplo: proteínas)
cargadas emigren hacia los electrodos de polaridad opuesta.
El campo eléctrico se aplica a disoluciones o suspensiones.

6. Estando en área clínica (laboratorio) tenemos un paciente cuya solicitud es determinar la
cantidad de proteínas compuestas de proteína y grasa (lipoproteínas) como el colesterol
LDL…
Que método de electroforesis aplicarías?
APLICACIONES

7. La prueba de electroforesis de proteína
séricas, mide proteínas especificas en la
sangre para ayudar a identificar algunas
enfermedades. Los resultados de cada grupo
de proteínas se presentan como un
porcentaje de la cantidad total de proteínas
séricas.

8. Otras
Parentesco
humano
• Electroforesis en gel
puede determinar
paternidad, así como
establecer vínculos
genéticos entre
grandes grupos de
personas.
Prueba de
hemoglobina
• En la prueba de
electroforesis de
hemoglobina se aplica
una corriente eléctrica
a una muestra de
sangre. Esto separa
los tipos de
hemoglobina normales
y anormales.
• Cada tipo de
hemoglobina se puede
medir por separado.
Criminología
• Los científicos también
pueden utilizar este
procedimiento para
examinar muestras de
tejido que se
encuentran en
escenas del crimen.

9. Procedimiento general
Paso 1
• Preparar un
gel de agarosa
o acrilamida a
la
concentración
requerida.
Paso 2
• Mezclar las
muestras a
analizar con
un buffer de
carga
adecuado.
Paso 3
• Cargar las
muestras en el
gel.
Paso 4
• Realizar la
corrida
electroforética
al voltaje
pertinente.
• Entre 70 – 100
V por 1 hora.
Paso 5
• Visualizar los
ácidos
nucleicos.

10. Procedimiento de electroforesis.

11. Lectura e interpretación.

12. Factores que afectan a la electroforesis
En general la electroforesis depende directamente del campo eléctrico y este depende de
distintos parámetros. Basándose en la ley de Ohm se tiene que…
V = IR
Diferencia de potencial (V): define el campo eléctrico; la velocidad de avance es
directamente proporcional a ella.
Resistencia (R): la movilidad de las moléculas es inversamente proporcional a ella.
Intensidad (I): cuantifica el flujo de carga eléctrica, se relaciona directamente con la distancia
recorrida por las moléculas.
Por ultimo, otro factor que afecta la electroforesis es la temperatura, esta es importante puesto
que el paso de corriente eléctrica va a producir calor y este es directamente proporcional a la
diferencia de potencia y a la resistencia.

13. Conclusión
La gran mayoría de macromoléculas están cargadas eléctricamente y, al igual que los
electrolitos, se pueden clasificar en fuertes y débiles dependiendo de la constante de ionización
de grupos ácidos y básicos. Por ejemplo los ácidos nucleicos son poliácidos fuertes.
Por lo general, para caracterizar la molécula se determina la velocidad a la que esta se mueve
en un campo eléctrico y se utiliza para determinar, en el caso de proteínas, la masa molecular o
para detectar aminoácidos y separar cuantitativamente distintas especies moleculares; en el
caso de ácidos nucleicos se determina su tamaño, medio en pares de bases.

14. GRACIAS