1. EXTRACCIÓN E
IDENTIFICACIÓN DEL
DNA A PARTIR DE
CÉLULAS
Mg. Jorge E. Gonzalez Siccha
I. INTRODUCCIÓN
En la investigación básica se utilizan las
técnicas de ingeniería genética para estudiar
los mecanismos de replicación y expresión de
genes en los procariontes, eucariontes y virus.
Para la investigación aplicada, la ingeniería
genética permite el desarrollo de cultivos
celulares o bacterianos capaces de producir
productos valiosos como, la insulina humana,
hormona humana del crecimiento, interferón,
vacunas, enzimas industriales etc.
El Ácido desoxirribonucleico (ADN), material
genético de todos los organismos celulares y
casi todos los virus. El ADN lleva la
información necesaria para dirigir la síntesis de
proteínas y la replicación. El ADN es por lo
común el constituyente básico de la cromatina
(cromosoma) nuclear en las células
eucarióticas, pero también existe en pequeña
cantidad en las mitocondrias y cloroplastos. En
los procariontes forma el nucloide (que a
diferencia de los eucariontes no va asociado a
proteínas, es desnudo) y en los virus
(DNAvirus) que lo poseen constituyen el virión
o elemento infestante.
El ADN está formado por unos componentes
químicos básicos denominados nucleótidos.
Estos componentes básicos incluyen un grupo
fosfato, un grupo de azúcar y una de cuatro
tipos de bases nitrogenadas alternativas. Para
formar una hebra de ADN, los nucleótidos se
unen formando cadenas, alternando con los
grupos de fosfato y azúcar. Los cuatro tipos de
bases nitrogenadas encontradas en los
nucleótidos son: adenina (A), timina (T),
guanina (G) y citosina (C).
El orden, o secuencia, de estas bases
determina qué instrucciones biológicas están
contenidas en una hebra de ADN. Por ejemplo,
la secuencia ATCGTT pudiera dar
instrucciones para ojos azules, mientras que
ATCGCT pudiera indicar ojos de color café.
El ADN contiene las instrucciones que un
organismo necesita para desarrollarse,
sobrevivir y reproducirse. Para realizar estas
funciones, las secuencias de ADN deben ser
transcritas a mensajes que puedan traducirse
para la fabricación proteínas, que son las
moléculas complejas que hacen la mayor parte
del trabajo en nuestro cuerpo.
El objetivo fundamental de esta práctica es:
• Extraer el ADN de un tejido animal o vegetal
utilizando técnicas sencillas.
• Determinar por el aspecto la estructura fibrilar
del ADN.
II. MATERIAL Y MÉTODO
2.1 Material: Reactivos y equipos
- Una cebolla grande fresca, alverjas verdes,
hígado de pollo.
- Alcohol de 96º colocarlo en la refrigedora
- Zumo de piña y zumo de papaya
- Detergente lavavajillas
- Sal común, Arena y/ o trozo de tela yute
- Agua destilada
- Spectronic 20, Refrigeradora, Centrífuga,
Equipo de radiación ultravioleta.
2.2 Método
Extracción de DNA de una cebolla o
arvejas
• En primer lugar tienen que romperse la
pared celular y la membrana plasmática
para poder acceder al núcleo de la célula.
• Luego, se debe romper la membrana
nuclear para dejar libre el ADN.
• Por último hay que proteger al ADN de
enzimas que puedan degradarlo y para
aislarlo hay que hacer que precipite en
alcohol.
Procedimiento:
• Cortar la cebolla en cuadrados
• En un vaso de agua agregar 1 cucharada
sopera de detergente lavavajillas y
• Una cucharadita de sal y añade agua
destilada hasta llenar el vaso
• Mezclar esta solución con los trozos de
cebolla
• Licuar el conjunto con la batidora a
velocidad máxima durante 30 segundos
• Filtrar el líquido obtenido con un filtro de
tela muy fino
13
PRÁCTICA
2. 2
• Separar el filtrado obtenido en dos vasos
de ensayo (aproximadamente 100 ml cada
uno). En la misma proporción, a un filtrado
agregar zumo de piña y al otro jugo de
papaya. Mezclar y volver a filtrar.
• Separar los filtrados obtenidos en tubos de
ensayo (aproximadamente 5 ml).
• Añadir un volumen de alcohol muy frío
equivalente al del filtrado, cuidadosamente,
haciéndolo resbalar por las paredes del
vaso para que forme una capa sobre el
filtrado.
• Dejar reposar durante 2 a 3 minutos hasta
que se forme una zona turbia entre las dos
capas.
• Tomar una muestra de las fibras de ADN
que se van depositando sobre la varilla de
vidrio y colocarlas sobre un portaobjetos.
• Teñir durante unos minutos con un
colorante básico (Bromuro de etidio
coloroea exclusivamente al DNA).
• Observar al microscopio.
¿Qué ha ocurrido? :
• El detergente es un tensioactivo y la sal
produce un cambio osmótico capaz de
romper la pared celular y las membranas
plasmáticas nuclear, y es ayudado por la
agitación mecánica (licuadora)
• El zumo de piña contiene la enzima
bromelina y el jugo de papaya, la
papaína que contribuye a hidrolizar las
proteínas que pueden degradar a las
cadenas de ADN.
• El alcohol se utiliza para precipitar el ADN
que es soluble en agua, pero cuando se
encuentra en alcohol se desenrolla y
precipita en la interfase entre el alcohol y
el agua.
• Introducir una varilla de vidrio e ir
removiendo la mezcla
III. RESULTADOS
a)
b)
c)
d)
e) f)
g)
h)
i)
3. 3
IV. DISCUSIÓN
V. CONCLUSIONES
VI. BIBLIOGRAFÍA
Murray Rk, Bender D. y col. (2012):
bioquímica ilustrada de harper. 29avaed.
Editorial Mc Graw Hill- Lange. España.
Sánchez Enríquez S., Flores Alvarado LJ.,
Gurrola Díaz CM.,, Heredia Chávez P.
Manual de prácticas de laboratorio de
bioquímica, 3e. Editorial Mc Graw-Hill
Interamericana Editores, S.A. de C.V.2014.
México.
4. 4
▪ ACTIVIDADES EXTRA-AULA:
▪ Extracción del ADN
▪ Estructura de ADN
▪
Composición del ADN
Bases nitrogenadas purinas
Bases nitrogenadas pirimidinas
▪ Proceso en la cual participa el ADN, para la
transmisión de la información genética.
Importancia del ADN en el ser vivo.
Esquematizar ejemplos ADN
Plantas
Animales
Causas de mutaciones en el ADN
Ejemplos en plantas, animales y el hombre
▪ BIBLIOGRAFÍA DE LA ACTIVIDAD
