David Maya Guilombo Semestre III

1. David Maya Guilombo
Semestre 3 – Biología Molecular
Facultad de Medicina UPB

2. Introduction
Enterobacteria
Salmonella
Escherichia coli
Infections of the
intestinal tract
Urinary tract
infection
Klebsiella
pneumoniae
Sepsis
Intrahospital
pneumonia
Infections of the
intestinal tract
Beta lactamases
Enzyme produced
by microorganisms
It is determined by
pH drop test by
release of
penicilloic acid
Antibiotic
resistance
evaluation
BLEE
Extended-spectrum
beta-lactamases
produced by
enterobacteria
(ESBL-pE)
Enzymes produced
by gram-negative
bacilli
Function of
inactivating
penicillins,
cephalosporins and
other antibiotics.

3. Water
• Resource most used by living
beings for consumption and for
washing
• Presence of microorganisms of
the digestive tract due to poor
health conditions
• Contamination of water sources
due to poor handling and
hygiene at the time of human or
animal use

4. Objective
 Reveal a survey of
Enterobacteria producing
extended-spectrum β-
lactamase in environmental
waters in Okinawa
prefecture in Japan and its
relationship with indicator
organisms

5. Materiales y Métodos
PFGE
Fundamento:
Electroforesis en gel de campo pulsado
• Separacion de particulas por peso molecular y carga
• Presencia de polimorfismos geneticos
Utilidad:
Enzimas de restriccion cortan fragmentos
para analisis geneticos
• Caracterizar por cepas y determinar relacion con BLEEs
PCR
Fundamento:
Fabrica multiples copias de una secuencia
diana de ADN
• Proceso de amplificacion para obtener microgramos de
ADN
Utilidad: Deteccion de las variantes
genicas de las enterobacterias
• Rapidez y precision en detectar enterobacteria
• Evita el riesgo y posibles brotes contaminantes en la
comunidad

6. DDST
Fundamento:
Prueba de sinergia de doble disco
• Determinar presencia de Beta lactamasas de
espectro ampliado
• Utilizado para investigar sensibilidad antibiotica
Utilidad:
Confirmar la sospecha de produccion de
ESBL o serotopismo
• El agua corriente se recolecto dos veces de cada fuente en diferentes
meses en botellas esterilizadas de 500ml
• Se tomaron muestras de agua residuales sin tratar al mismo tiempo de las
de agua corriente

7. Resultados
Se aislaron por patron de escision PFGE a 7 E.coli produtores de BLEE de agua corriente y
aguas residuales
Fueron utilizados cebadores para detectar blaCTX-M-15 y blaCTX-M-14-like con
genes blaCTX-M-27
Los carriles 1 y 13 son estandares de tamaño utilizando DNA digerido con Xbal
de Salmonella
Diferentes puntos de muestreo en mismo distrito o diferentes tiempos de
muestreo en mismo punto
Los carriles del 2 al 12 son de manera adyacente el mismo clon de E.coli con un
gen aislado determinado en uno o dos lugares y en una misma o diferente fecha
segun lo que establecieron
Carril 6 se evaluo de manera conjunta con carriles 7 y 8 en diferentes fechas,
mismo lugar, mismo gen y clon
Los circulos blancos indican la diferencia en la posicion de las bandas de DNA en ambos
carriles adyacentes con cepas estrechamente relacionadas
FIGURA 2

8. Combinacion de antigeno serotipo O de E.coli productora de
BLEE
Se evaluo el numero de patrones de deteccion de los
genes TEM, SHV y/o CTX-M (diferentes tipos)
Los circulos dobles (⊚) muestran cada gen de B-
lactamase detectado
Muchos tipos de serotipos, los mas elevados:
•025 con 19 aislamientos (señalado) Genes TEM, CTX-M-I y CTX-M-IV
•086a con 5 aislamientos (señalado) Gen CTX-M-IV
Los numero de deteccion mas altos (20 y 14) son de
antigeno O no tipificable
Gen CTX-M-IV Mayor gen detectado
Gen TEM Segundo gen mas detectado
TABLA 2

9. TABLA
3
Detección de genes relacionados
con el tipo CTX-M-15 (grupo CTX-
M-I), tipo CTX-M-14 (grupo CTX-M-
IV) en diferentes especies de
microorganismos
•Ambos con clon 025b-ST131
•Aislados de tipo CTX-M-27 (E.coli 025)
En 29 cepas de ESBL-pE
pertenecientes al grupo CTX-M-I,
17 de las 22 de E.coli fueron
blaCTX-M-15 +
•Tanto en agua corriente como residual hubo
mas cepas blaCTX-M-15 positivas (21) que
negativas (8)
•K. pneumoniae, Citrobacter diversus y
Enterobacter cloacae poseian blaCTX-M-15,
Kledsiella ozaenae no (todo negativo)
En 78 ESBL-pE pertenecientes al
grupo CTX-M-IV, 72 de 73 E coli
fueron positivas para gen tipo
blaCTX-M-14

10. TABLA 5
Se agruparon por distritos para tomar una evaluacion de los experimentos
El distrito de medio oeste fue el lugar donde mas hubo expresion de especies
Enterobacteria mas expresada fue la E.coli
La fecha de mayor expresion en el distrito fue en octubre el 2014 con 9 E.coli y
2 K.pneumoniae

11. Discussion
Clermont
• "The most prevalent
E. coli isolated from
the environment in
this study was the
O25 type, which has
also been isolated
worldwide"
Chen
• “When ESBL-
producing E. coli
strains isolated from
chicken farms, pig
farms, and river
water in the same
area of Southern
Taiwan were
compared by MLST
analysis, the ST10
and ST58 types were
most frequently
isolated. However,
the ST131-type
strain, which has
been the most
isolated in other
communities around
the world, was not
found in those rivers
Guyomard-Rabenirina
• “Measured the
number of E. coli,
total coliforms, and
antibiotic-resistant
coliforms in samples
as an indicator when
detecting antibiotic-
resistant bacteria
from river water and
wastewater in
Guadeloupe, but the
detection level of
ESBL producing
bacteria by these
indicators could not
be determined”

12. Conclusions
Study focused on research in order to know
which enterobacteria are those that most
influence humans because of their
permanent contact
Evidence that depending on the place and
conditions of the environment there may
be some conformational changes in
microorganisms
Study very related to public health because
it allows to understand why some bacteria
are transported so easily by such an
accessible resource which must comply
with hygiene and sanitation standards

13. Mapa conceptual

14. Thank You