métodos y pruebas de laboratorio para el diagnostico de la toxoplasmosis

1. ~alutl l'übl. lIéx.
F.poea V. Volumen 11. Nlílll. 2.
Ahrtl-Junto. Méxíco, D. F.
METODOS Y'PRUEBAS DE LABORATORIO PARA EL
DIAGNOSTICO DE LA TOXOPLAMOSIS
Actualmente se considera a la toxoplasmo-
sis humanas, como una de las infecciones más
extendidas en el mundo. Según datos epide-
miológicos y estadísticos, dicha infección se
observa en todas las altitudes y latitudes d,:i
glJho, en lN' clímas más variados desde los
más Líos (Alasb), a lo" más cálidos (Bra-
sil, Ecuad .r, Congo Belgd). Se han registra-
do caos tanto en el hcmbre como en la mu-
j er desde el estado fetal hasta la edad de ·10...-
70 años o más. La infección natural en los
animales está también muy extendida; se he.
aislado el toxoplasma en mamíferos, aves, rep-
tiles y artrópodos. En México, en personas 'es-
tudiadas al azar en diversas entidades de la
República con la prueba del colorante, el 28.5 %
resultaron positivas; 'en enfermos con sospe-
chas clínicas de toxoplasmosis el 43.9 resulta-
ron positivas: en ratas del Distrito Federal el
36.3 % y en gatos el 54.0 %.
El desarrollo del toxoplasma en el orga-
nismo humano es generalizado, lesiona todos
los tejidos y órganos de la economía, es una
enfermedad sistémica. Se desarrolla en las cé-
lulas normales procedentes de las tres cepas
blastodérmícas y aun en las altamente dife-
renciadas, como las del miocardio, de la reti-
na, del cristalino, en las células reticulo en dote-
liales y en el tejido placentario; donde no se
reproduce es dentro de los eritrocitos.
* Instituto de SaTubril1ad y Enfermedades T'roplcales
Eustaquio ROCH*
La toxoplasmosis presenta un polímorfís-
m.o sintomático, dando cuadros clínicos diver-
sos de difícil interpretación. Hay síndromes
que pueden orientar al clínico fácilmente hacia
la sospecha de toxoplasmosis, tenernos el caso
de la "coriorretínitis". En 115 enfermos con
diagnóstico . clínico de ..coriorretinitis" estu-
diados en el Instituto de Salubridad y Enfer-
medades Tropicales, resultaron positivos a la
prueba del colorante de Sabín y Feldman 77
o sea el 67.0 %; en personas tomadas al azar
el porcentaje varíó del 16.0 al 37.4 %.
La toxoplasmosis es pues una infección im-
portante en salud pública y el objeto de este
trabajo es presentar los diversos métodos y
pruebas de laboratorio con que se -cuenta pa-
ra el diagnóstico de esta enfermedad.
METODOS DIRECTOS.
Primero.- Observación directa del pará-
sito en exudados orgánicos como líquido .ce-
falorraquídeo, exudado perítoneal, pleural, pla-
centario, bronquial; o bien de biopsias de gan-
glios, de lesiones papulosas cutáneas, humor
acuoso del ojo, de órganos después de inter-
venciones quirúrgicas o postmortem en impron-
tas de órganos o en estudios histopatolóqicos.
Segundo .. =-Aíslamiento del parásito por
inoculación en animales de laboratorio (ratón,
cobayo, conejo, harnster. etc), con los especí-
menes mencionados o siembra de los mismos
en cultivo de tejidos o en embrión de pollo,
361

2. EÜ:-5'l'AQUIO HOCH.
Estas pruebas consideradas como las de ma-
yor valor diagnóstico. no son fáciles de rea-
lizarse en todos los laboratorios por requerir
material y personal" especializado.
METO DOS INDIRECTOS.
Díaqnóstíco serolóqíco por medio de la
prueba de fijación del complemento (Warren
y Sabino 1942). con antígeno obtenido por
electroforesis del cultivo de toxoplasmas en
coríoalantoídes de embrión de pollo. técnica de
Westphal 1951. Esta reacción es poco sensi-
ble y de técnica complicada.
La hemoaplutinación (Jacobs y L u n d e.
1957); ha sido empleada para el diagnóstico
de esta enfermedad. pero presenta los incon-
venientes de la preparación: del antígeno. cuya
normalización es difícil de gobernar hasta la
fecha por no disponer de métodos que nos per-
mitan' tener el parásito exento de proteínas
extrañas.
La prueba 'alérgica o. iniiedetmo-reeccián
a la toxoplasmina (Fr.ankel 1948) usando li-
sados de toxoplasma, presenta nruchas reac-
ciones falsas de tipo alérgico .. por eso su im-
portancia como método diagnóstico se ha li-
mitado a encuestas epidemiológicas.
La reacción del colorante o modificación ci-
toplásmíca [Sabín. Enchenwal, Feldman y [a-
cobs, 1952) modificada en su fase final por
Pan galos y col. (1956) que consiste en teñir
los toxoplasmas con colorante de May-Grun-
wal-Giemsa, Esta prueba es una de las que
más se usan actualmente por considerársela
de gran valor clínico por su sensibilidad. y
comprobada su efectividad por una gran can-
tidad de investigadores. Esta prueba presenta
por ahora 'el inconveniente de que. se requiere
para el antígeno, conservar. el toxoplasma vi-
vo por pases sucesivos en ratones y ~n' buen
registro de factor. -accesorio.
La reacción V (Lr), p r u e b a biológica uti-
lizando el pez, Lebístes reticulatus (Guppy).
Varela y col. 1957. Esta prueba, .seqún los re-
sultados de sus autores. es muy sensible. su
técnica es muy sencilla y su costo muy bajo.
lo que permite practicarla en cualquier labo-
ratorio de análisis clínicos.
Por considerar hasta la fecha. estas dos
últimas pruebas como de mayor utilidad de
diagnóstico haremos una breve descripción de'
sus técnicas.
362
Prueba del colorente.:« Con' el suero san-
guíneo problema. sin desensibílizar, se hacen
diluciones con solución salina (CL Na al
0.9 %) del 1/8 al 1/4096 o más; a cada tu-
bo conteniendo 0.1 ml., de antígeno [toxo-
plasmas vivos obtenidos del exudado perito-
neal de ratones de tres días de inoculados. re-
cogidos en tubo con anticuagulante. heparina
o citrato de sodio al 3.8 % y agregándole por
cada 0.2 mI. de exudado. 0.8 ml de factor ac-
cesorio. (suero humano negativo a toxoplas-
mosis). Los tubos se agitan y se colocan a ba-
ño maría a 379 C. durante una hora. Luego
seguirnos:
10.-- La modificación de Pan galos y col.
que consiste. en tomar con asa de platino una
pequeña cantidad de cada tubo y hacer una
extensión en porta objetos. dejarla: secar. fi-
jarla y colorearla por May-Grunwal-Gíemsa.
20.- La técnica clásica. depositando en
cada tubo. 0.02 de azul de metileno (éste se
prepara poniendo 9.73 ml de sol. (Na2 C03)
al 0.53 % más 0.27 mI. de (N a2 B40. 7-10
H20) al 1.91 %. más 3 ml., de solución alco-
hólica saturada de azul de metileno).
Se coloca una gota sobre portaobjetos. se
cubre y se observa en el microscopio con ob-
jetivo seco fuerte.
La reacción se considera positiva. cuando
el protoplasma del parásito no se colorea. En
la práctica. en el campo del microscopio se
observan toxoplasmas coloreados y no co-
loreados. en este caso contarnos 100 a 200 pa-
rásitos y si en la suma hay mas de 50 % de
toxoplasmas sin colorear la consideramos po-
sitiva. en el caso contrario. la damos como
negativa. En la técnica de Pan galos y Col. la
observación se. hace con objetivo de inmersión.
lo cual nos permite apreciar. aparte de los
cambios de coloración. ciertas modificaciones
estructurales (cromatolísís}.
Prueba (Lr ) técnica Varela.- Se toman
dos o tres mI. de líquido cefalorraquídeo. se
colocan en un tubo de ensayo de 195 por 22
mrn., se' le añade 6 Ó 9 mI. de pírídína (C5
H 5 N). inmediatamente se coloca en baño
maria a 559C haciendo pasar al mismo tiem-
po una corriente de aire por el tubo a fin de
eliminar toda la pírídina. El residuo que que-
da se disuelve en 20 mI. de agua de la llave
y se introducen uno o dos peces hembras' (Le-
.bístes 'retículatus }. Estos peces que son de

3. D~6~05(O de 6 OjOPl~~~O~2>.
':¡)rueb
a
....r. 1ecoica jarea.
1.8 aleta dor~81,después de haber -
-1 J L-¡";f,+rl. ....' _,,//7 puesto el pez. en ey.tracl
o
del LCQ
Aleta dor/J81de ~ d fermo con fajoplasmo:;i:>.-
~ Cf)nlos :romaloforoSque aparecen. eL': e;a"cha§'n
egra
& cor
re5
pon-
cornope9uenas !¡neas.· den 8 los crorfl8lóforolf.
pez. normal.
peZ después de haber sido puesto
en ejtredo de LCQ de un enfermo -
con fOjoplasmosj~.

4. EU~TAQ} lO HOCH.
color gris verduzco, cuando la prueba es po-
sitiva se enegrecen poco a poco hasta obscu-
recerse, la prueba comienza a los lOa 15 mino
y se dá por terminada a las dos horas. (figu~
ra anexa ). El fenómeno de ennegrecimiento
es debido a la acción de determinadas subs-
tancias, tales como el ácido Iisérqíco o la díe-
tílamida., del ácido Iisérgico (LSD 25), que
obrando sobre los cromatóforos de las aletas
y de las escamas que están situados en finas
hileras. estallan y se aglutinan (figura anexa);
ésta observación se lleva a cabo con ayuda
del microscopio. cortando la aleta dorsal o
extrayendo las escamas y colocándolas sobre
pcrtaobjetos y viendo con objetivo seco fuerte.
SUMARIO
Revisión de los métodos de laboratorios ra el diagnóstico de fa toxoplasmosis.
directos e indirectos utilizados actualmente pa-
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