Seminario Biología Molecular III semestre- Medicina. Maria José Escudero Correa.

1. Legionella pneumophila recurrently isolated in a Spanish hospital:
Two years of antimicrobial resistance surveillance.
Tiscar Graellsa, Marta Hernández-García, Josefa Pérez-Jovéa, Lionel
Guyb, Emma Padillaa.
Presentado por: Maria José Escudero Correa.
Estudiante de medicina (III semestre).

2. Introduction
v Legionella pneumophilia is a rod-shaped bacterium which belongs to the genus
Legionella.
v Around 50 species of Legionella have been identified with L.pneumophilia responsible for
approx 90% of cases.
v It is naturally occurring in soil and water environments.
v At low temperatures (under 20oC) the bacteria survive but don’t multiply, over 60oC the
bacteria die.
v The bacteria multiply rapidly in nutritious environments created by biofilm and sediment.
v Legionella bacteria can only infect your body through inhalation of contaminated water
droplets.
LEGIONELLA.

3. BACTERIAL RESISTANCE.
Antimicrobial resistance in bacterial pathogens is a worldwide challenge associated with
high morbidity and mortality.
v Multidrug resistant patterns in Gram- positive and -negative bacteria have resulted in
difficult-to-treat or even untreatable infections with conventional antimicrobials.
v Because the early identification of causative microorganisms and their antimicrobial
susceptibility patterns in patients with bacteremia and other serious infections is
lacking in many healthcare settings, broad spectrum antibiotics are liberally and
mostly unnecessarily used.
v Dramatic increases in emerging resistance occurs and, when coupled with
poor infection control practices, resistant bacteria can easily be disseminated to the
other patients and the environment.

4. OBJECTIVE
The aim of this study was to monitor the spread,
persistence and antibiotic resistance patterns of
Legionella spp. strains found in a hospital water
distribution system. These environmental studies are
intended to help detect the presence of antibiotic resistant
strains before they infect patients.

5. MÉTODOS
MUESTREO.
vMuestras tomadas en hospital público a la periferia de Barcelona (capacidad total:
470 camas)
v54 muestras de agua entre febrero de 2015 a enero de 2017.
vSistema de agua caliente (46 de grifos, 3 de duchas, 2 de calentadores).
vTorres de refrigeración (2).
v27 puntos de muestreo en el hospital.
vAislamientos serológicos usando Kit de aglutinación de látex polivalente (OXOID).

6. MALDI-TOF.
vFundamento: La espectrometría de masas es una técnica analítica en la que los
átomos o moléculas de una muestra son ionizados, con mayor frecuencia
positivamente, separados por su relación masa/carga (m/z) y posteriormente
detectados y registrados. La importancia y proyección de la MS es debida a su
potencial analítico.
Las ventajas de esta técnica son: proporcionar una alta especificidad en la
determinación del peso molecular debido a la posibilidad de medir exactamente su
masa molecular así como obtener información a partir de los fragmentos iónicos de
un analito. Su sensibilidad es muy elevada y es muy versátil, ya que permite
determinar la estructura de tipos de compuestos muy diversos.
vPara qué: permitió identificar que todas las muestras eran los mismos serogrupos con
un porcentaje del 99.9%, confirmando así lo obtenido en el Kit de aglutinación de látex.

7. PFGE.
vFundamento: De manera general la PFGE es una técnica que permite la separación de
fragmentos de DNA de alto peso molecular. En este método, el DNA viaja a través de
un gel de agarosa concentrado, bajo la influencia de dos campos eléctricos. Los dos
ángulos de los campos eléctricos se encuentran cerca a la perpendicularidad, no son
uniformes en la intensidad de campo y cambian de manera alterna (pulsos). En
general se supone que en concentraciones altas de agarosa y con tensiones elevadas,
las moléculas grandes de DNA deben ser elongadas a lo largo de la dirección del
campo eléctrico con el fin de penetrar a través de los poros del gel. Cuanto más
grande sea la molécula de DNA, mayor será el tiempo para encontrar la nueva
orientación y la retención en el gel.
vPara qué: Mostró 5 patrones diferentes (pulsotipos) numerados de A a E según su
abundancia -> Tipificación molecular.

8. SECUENCIACIÓN.
v Fundamento: la secuenciación del ADN significa determinar el orden de los cuatro
componentes básicos químicos, llamados "bases", que forman la molécula de ADN. La
secuencia les informa a los científicos la clase de información genética que se transporta en
un segmento específico de ADN.
v Para qué: se encontró en todas las muestras una secuencia de tipo ST328.
MIC: Concentración Inhibitoria Mínima.
vFundamento: es la concentración más baja de un antimicrobiano que inhibe el crecimiento de
un microorganismo después de su incubación. La concentración mínima inhibitoria es
importante en diagnósticos de laboratorio para confirmar la resistencia de microorganismos a
un agente antimicrobiano y además para monitorizar la actividad de los nuevos agentes
antimicrobianos.
vPara qué: mostró que la diferencia de susceptibilidad a antibióticos es similar durante todo el
periodo de estudio, lo que indica que no hay una tendencia hacia el aumento de la resistencia a
antibióticos.

9. RESULTADOS

13. DISCUSSION
Author Affirmation Yes No
Bianchi.
This environmental strain has been isolated only a few times,
among others in a nursing facility in Italy, where several cases
of atypical pneumonia had been recorded.
X.
Khodr.
Legionella is naturally transforming, and horizontal gene
transfers allow high plasticity and dynamism in their genomes,
mediating adaptation to different environments and
conditions.
X.
Fu and Neu.
Even though it is known that Legionella pneumophila has a β-
lactamase in the periplasmic space, clavulanic acid can inhibit
this enzymes. This β-lactamase was characterized as a
cephalosporinase which partially affects cefotaxime.
X.

14. CONCLUSIONS
vResistance of important bacterial pathogens to common antimicrobial
therapies and emergence of multidrug-resistant bacteria are increasing at
an alarming rate. Because of this, performing this type of analysis is useful
in deciding on treatment strategies and designing an effective medication
administration program in clinics.
vLegionella as a disease of public health and intrahospital infection is a
topic of high relevance for its easy dissemination. The clinics are a
propitious means for its growth and its necessary to control it effectively,
therefore, it is very important to know that there are no strains very
resistant to the commonly used antimicrobials.

15. MAPA CONCEPTUAL