Tecnicas de Esterilización

1. ESTERILIZACIÓN Y DESINFECCIÓN
2023

2. ESTERILIZACION
DESINFECCIÓN
se destruyen o remueven
todas las formas de vida
microbiana mediante el uso
de agentes físicos o químicos
destrucción o inhibición de
los microorganismos mediante
el uso de agentes químicos
Cuál es la finalidad de
esterilizar y/o desinfectar
el laboratorio

3. ¿Desinfectantes y Antisépticos?
Actúan sobre
objetos inertes
Actúan sobre
tejidos vivos
Menos tóxicos
¿efecto Bactericida y Bacteriostático?
Destruye o mata
una bacteria
Inhibe o detiene
el crecimiento de
una bacteria

4. Métodos de Esterilización y Desinfección
Métodos FISICOS Métodos QUIMICOS
 Calor
 Filtración
 Radiación
 Agentes Esterilizantes
 Agentes Desinfectantes

5. Métodos de Esterilización y Desinfección
 Calor Húmedo (mayor poder de penetración)
Ebullición
Pasteurización
Vapor Fluente
Vapor Saturado a Presión
 Calor Seco (menor poder de penetración)
Flameado
Hornos o estufas
Desnaturalización de las biomoléculas (pierden su estructura y
función)
Métodos Físicos: CALOR

6. Calor Húmedo - Ebullición
• A 100°C durante 30 minutos
• Elimina formas vegetativas pero no las estructuras
de resistencia
Métodos Físicos: CALOR

7. • REDUCE poblaciones microbianas en alimentos (ej. leche)
• Destruye microorganismo patógenos presentes en los alimentos
• No elimina estructuras de resistencia ni microorganismos termófilos
• Diferentes métodos
- Clásico: calentamiento a 63°C durante 30 minutos
- HTST: calentamiento a 72°C durante 15 segundos
- UHT: calentamiento a 140-150°C durante 3 segundos
Calor Húmedo - Pasteurización
Enfriamiento rápido
Métodos Físicos: CALOR

8. • Esterilización fraccionada
• Se esterilizan medios cuyos componentes pueden alterarse a
temperaturas superiores a los 100°C. Ej: mosto de uva
1° calienta hasta 90°C durante 30 minutos
eliminan las formas vegetativas
2° Incuba a 37°C durante 24 horas
germinan esporas microbianas
3° Repite el ciclo 3 días consecutivos
eliminan todas las formas de vida microbiana
Calor Húmedo – Vapor fluente: Tindalización
Métodos Físicos: CALOR

9. Calor Húmedo – Vapor fluente: Tindalización
Métodos Físicos: CALOR

10. • Una de las técnicas mas utilizadas para la destrucción de todas
las formas de vida microbiana
• Medios de cultivo, agua, jeringas, material de vidrio, objetos de
goma y tela
• Produce la desnaturalización de proteínas, fusión y coagulación
de membranas celulares
• Parámetros de esterilización
Temperatura: 121°C
Presión: 2 atm. (1 atm. de sobre presión)
Tiempo: 15 – 20 minutos
Calor Húmedo – Vapor saturado a presión: Autoclave
Métodos Físicos: CALOR

11. Métodos Físicos: CALOR

12. Manómetro
Nivel de agua
Calentador
Vasija interna
Válvula de vacío
Válvula de seguridad principal
Válvula de salida de aire
Válvula de seguridad
Tornillo para ajustar la
tapa
Cierre manual
soporte
Métodos Físicos: CALOR

13. Calor Húmedo – Vapor saturado a presión: Autoclave
La sobre presión NO es lo que mata al microorganismo, sino la
temperatura elevada que se alcanza cuando el vapor de agua se
somete a presión
1. Colocar agua hasta la parrilla
2. Colocar los materiales
3. Cerrar la tapa
4. Abrir la válvula de desagote (espita)
5. Encender la fuente de calor
6. Desagotar el aire (purgado)
7. Cerrar la espita
8. Vigilar la presión, hasta llegar a 2 atm.
9. Mantener a fuego lento 20 min.
10.Apagar y esperar a que baje la presión
11.Abrir la espita, luego la tapa
12.Sacar el material
Métodos Físicos: CALOR

14. • Se emplea para esterilizar materiales metálicos o de vidrio
como ansas, espátulas, bocas de tubos, pinzas, etc.
• Consiste en someter en la llama de un mechero de Bunsen
durante unos segundos los utensilios a esterilizar
• Técnica rápida y eficaz
para materiales termo-resistentes
Calor Seco – Flameado
Métodos Físicos: CALOR

15. Calor Seco – Flameado
Métodos Físicos: CALOR

16. • Se esteriliza material de vidrio, porcelana y objetos
metálicos como pipetas, cajas de Peri, tubos, matraces, etc.
• Proceso lento con alto consumo de energía
• Produce la oxidación de componentes intracelulares
• Parámetros de esterilización
Temperatura: 160-180°C
Tiempo: 2 horas
Calor Seco – Hornos o Estufas
Métodos Físicos: CALOR

17. Calor Seco – Hornos o Estufas
Métodos Físicos: CALOR

18. • Se utiliza para esterilizar sustancias líquidas termosensibles
• Se hace pasar una solución a través de una membrana que
presenta poros de diferentes tamaños, reteniendo así los
microorganismos
• Filtros de acetato de celulosa con poros de 0,2 a 0,45 µm
• Ej. Vitaminas, antibióticos
• El sistema de filtración se esteriliza independientemente del
filtro y, en condiciones asépticas, se ensambla al momento de
realizar la filtración
Métodos Físicos: FILTRACION

19. Discos de membrana
Métodos Físicos: FILTRACION

20. Discos de membrana
Métodos Físicos: FILTRACION

21. • Cámaras de seguridad biológica
• Filtros HEPA (alta eficiencia de retención de partículas de aire)
• Partículas mayores a 0,3 µm
Cámara de flujo laminar
Métodos Físicos: FILTRACION

22. Cámara de flujo laminar
Cámara de flujo horizontal
Métodos Físicos: FILTRACION

23. • Afecta las moléculas de ADN,
inhibiendo su síntesis
• Tienen poco poder de
penetración
• Se utilizan para esterilizar
superficies y cabinas de
bioseguridad
Rayos Ultravioletas
Métodos Físicos: RADIACION

24. • Método de esterilización que se basa en la modificación irreversible
de la estructura funcional de ácidos nucleicos, proteínas y lípidos de
los microorganismos
• Se aplica a productos termolábiles a nivel industrial como
antibióticos, vacunas, materiales plásticos
• Alto poder de penetración
Rayos Gamma
Métodos Físicos: RADIACION

25. Métodos de Esterilización y Desinfección
Métodos FISICOS Métodos QUIMICOS
 Calor Húmedo
 Filtración
 Radiación
 Agentes Esterilizantes
 Agentes Desinfectantes

26. Métodos Químicos
Agentes Esterilizantes
• Formaldehído
Gas alquilante
Esteriliza materiales termolábiles
• Glutaraldehído
Líquido alquilante
Esteriliza material plástico y de goma
• Oxido de etileno
Gas alquilante con alto poder de penetración
Esteriliza jeringas, cajas de Petri descartables
Ventajas: no requieren altas temperaturas ni aparatos costosos
Desventajas: sustancias inflamables y muy tóxicas

27. Métodos Químicos
Agentes Desinfectantes
• Alcohol etílico
Desinfectante y antiséptico
Limpiar mesadas y manos antes de trabajar
• Detergentes catiónicos
Desinfectante y antiséptico
• Cloro
Desinfectante
Limpiar pisos y paredes del laboratorio
• Peróxido de hidrógeno
Desinfectante y antiséptico
Limpieza de heridas

28. Medidas de control de esterilización
Control Biológico
Cintas adhesivas impregnadas con
una sustancia química no tóxica que
cambia de color blanco a negro al ser
sometido a la técnica de esterilización
empleada (esterilización correcta)
Control Químico
Viales que contienen esporas de
bacterias resistentes a altas
temperaturas. Si la espora crece, el
medio de cultivo cambia de color
(esterilización incorrecta)

29. Preparación de materiales para esterilizar
• Las cajas de Petri de vidrio se envuelven en papel de a
pares, con la tapa hacia arriba y la base hacia abajo
• Los tubos y erlenmeyers se tapan con algodón y se cubren
con papel para evitar la entrada o salida de microorganismos
• En el caso de las pipetas de vidrio, se coloca en la boquilla
algodón que funciona como filtro de aire, evitando la
contaminación. Luego se introducen en un estuche metálico
• El material de plástico (tips, microtubos, racks, etc.) se
coloca en frascos de vidrio con la tapa semi-abierta
El material que se va a esterilizar debe prepararse de
tal manera que se conserve sin contaminar una vez
esterilizado

30. Preparación de materiales para esterilizar

31. Preparación de materiales para esterilizar
TAPA
BASE

32. Preparación de materiales para esterilizar