Presentation 21: Biosecurity risks for the shrimp industry and major challenges including SPF and SPR (Dr Victoria Alday-Sanz, Spain)

FAO TCP/INT/3502 “Reducing and managing the risk of
Acute Hepatopancreatic Necrosis Disease (AHPND) of Cultured Shrimp”
Riesgos y Desafios de
Bioseguridad de la
industria del camaron
Victoria Alday-Sanz
D.V.M., M.Sc, Ph.D
victoria_alday@yahoo.com
6/24/2015
International Technical Seminar/Workshop “EMS/AHPND: Government, Scientist and Farmer Responses”
22-24 June 2015, Tryp Hotel, Panama City 1

¿Qúe es Bioseguridad?
• Biosecuridad – Es la suma de actividades y medidadas tomadas en una
región, pais, grupo de productores o una sola instalación para proteger,
sus recursos acuaticos naturales, las pesquerías, la acuacultura, la
biodiversidad y/o los stocks de cultivo y las personas que dependen de
ellos del posible impacto negativo resultante de la introducción y
diseminación de enfermedades serias de animales acuaticos
(modificado de FAO, 2007).
Todas las medidas destinadas a reducir el impacto económico
de las enfermedades.
Productividad es unan medida de salud
La Biosecuridad es un instrumento de sostenibilidad
International Technical Seminar/Workshop “EMS/AHPND:
Government, Scientist and Farmer Responses”

Principales enfermedades del camaron
• EMS (AHPND): Enfermedad de la mortalidad temprana
• WSD: Enfermedad de la mancha blanca
• EHP: Enteritozooan hepatopenei (microsporidia del
hepatopancreas)
• CMNV: Mortalidad encubierta
• TSV: Enfermedad de Taura
• YHV: Enfermedad de la cabeza amarilla
• IMNV: Mionecrosis infecciosa
• IHHNV: infectious hypodermic and heamatopoietic
necrosis virus
• BP, MBV, HPV
• NHP: Necrotizing hepatopancreatitis
• ……White patch disease? International Technical Seminar/Workshop “EMS/AHPND:

Impacto economico de patogenos en camaron
Altoimpacto
economico
Medioimpacto
economico
Bajoimpacto
economico
WSSV CMNV MBV
EMS NHP IHHNV
TSV Streptococus BP
IMNV EHP HPV
YHV/GAV
La inversion en bioseguridad debe de ser proporcional
a la perdida que genera

Riesgos de bioseguridad:
• Introduccion de patogenos
– Bioseguridad externa
• Diseminacion de patogenos (transmision)
– Bioseguridad interna
Niveles de accion:
• Gubernamental
• Industrial
• Academico

Principales desafios de bioseguridad
Gobierno Industria Academia
Acciones de
bioseguridad
externa
1. Control de
importaciones
2. Cooperacion
regional/interna
cional
3. Tratamiento de
agua de lastre
1. Reproductores
SPF
2. Reproductores
tolerantes
3. Tratamiento de
agua
4. Alimentos
frescos de
maduracion
bioseguros
5. Mas control en
produccion
1. Dietas
maduracion
bioseguras
2. Desarrollo y
mantenimiento
de
tolerancia/resist
encia
3. Identificacion
de marcadores
de tolerancia
4. Parametros de
bienestar
Acciones de
bioseguridad
interna
1.
Zonacion/Comparti
mentalizacion
1. Reproductores
SPF
2. Reproductores
tolerantes

Acciones a nivel de gobierno
1. Control de importaciones:
• Camaron vivo y congelado
• Insumos
2. Cooperacion regional/internacional
• Corrientes
3. Tratamiento de agua de lastre
4. Zonacion/Compartimentalizacion
• Programa nacional de monitoreo

Restringir importaciones
• Acuerdo sanitario y fitosanitario de la OMC
WTO Agreement on the Application of Sanitary
and Phytosanitary Measures (SPS Agreement):
– Derecho a establecer medidas sanitarias para
proteger el estado sanitario de un pais
– Evidencia cientifica que lo justifique
• Demostrar que esta libre

Movimiento de patogenos
IHHNV IHHNV
WSSVWSSV
TSV
TSV
IMNV IMNV
EMS
EMS
HPVHPV

Informacion oficial:
-OIE: World Animal Health Information Database (WAHID)
(www.oie.int)
-NACA: Network of Aquaculture Centers in Asia (www.naca.org).
Joint reporting to NACA and FAO
Disease OIE NACA
Infectious hypodermal and
haematopoietic necrosis (IHHNV)
x x
Infectious myonecrosis (IMNV) x x
Necrotising hepatopancreatitis (NHP) x x
Taura syndrome (TSV) x x
White spot disease (WSSV) x x
Yellow head disease (YHV) x x
AHPND/EMS X (2016) X (2012)
Monodon slow growth virus (MSGV) x
EHP
Voluntary reporting
A country has the right to impose commercial barrier for sanitary reasons

Country OIE NACA Unofficial
Disease present in
the country
Disease never
reported
(surveillance
program)
Disease not
reported in
2014
No
information
provided
Thailand TSV, WSSV, YHV IMNV - NHP TSV, WSSD,
YHV, IHHNV,
EMS
TSV, WSSV, YHV,
IHHNV, EMS, EHP
Indonesia 2013 IHHNV, TSV, WSSV NHP - YHV TSV, WSSV,
IMNV
WSSV, TSV, IHHNV,
EHP
Vietnam WSSV, YHV IHHNV, IMNV NHP WSSV, EMS WSSV, YHV, IHHNV,
EMS, CMNV, EHP
India WSSV, IHHNV TSV - YHV WSSV WSSV, IHHNV. RMS
Malaysia 2013 WSSV, IHHNV IMNV, YHV - NHP WSSV, EMS IHHNV, TSV, WSSV,
EMS, EHP
China 2013 IHHNV, TSV, WSSV,
YHV
IMNV - - No report IHHNV, TSV, WSSV,
YHV, CMNV, EMS,
EHP
Bangladesh Only reports terrestrial animal diseases to OIE No report WSSV, IHHNV
Philippines IHHNV, WSSV IMNV, NHP, TSV YHV - WSSV, YHV
(99), IHHNV,
EMS?
IHHNV, WSSV
Pakistan Only reports terrestrial animal diseases to OIE none
Myanmar 2013 - - IHHNV,
TSV,
WSSV,
YHV
NHP No report IHHNV, WSSV,
EMS?
Comparative disease reporting from Asia

Minimizar el riesgo de
introduccion de patogenos a
traves de importaciones
• Autoridades sanitarias competentes y
Laboratorio Nacional de Referencia confiable
(en origen y destino)
• Control en origen:
– Historial sanitario del proveedor (>2 años)
– Inspeccion de bioseguridad de la instalacion del
proveedor
– Conocimiento del estado sanitario de la region
exportadora (oficial y no oficial)

Introduccion a traves de camaron
congelado
Sobrevivencia de patogenos a la congelacion

RESULTADO RESULTADO 2 RESULTADO
Ausencia <3 (3 - 100) (101 - 1000) > 1000 Total general
Años FECHA DE ENVÍO Ausencia
2011 ene 21 6 7 34
feb 5 1 6
may 73 2 75
jun 64 1 2 67
jul 73 6 4 83
ago 76 7 4 87
sep 52 2 54
oct 39 2 8 49
nov 16 5 21
dic 55 15 70
2012 ene 28 1 29
feb 8 1 2 11
mar 9 9
may 51 3 1 55
jun 80 1 16 1 1 99
jul 74 1 12 7 4 98
ago 108 5 10 11 4 138
sep 45 4 25 8 8 90
Total general 877 43 111 27 17 1075
V. parahemolitico sobrevive la congelacion

Medidas de mitigacion riesgo
atraves de producto congelado
• Para reproceso
– Tratamiento de efluentes y residuos solidos
• Si no existe: alto riesgo
• Para supermercados/consumo directo
– Riesgo insignificante

Cooperacion regional/internacional
• Conocimiento del estatus sanitario regional
– Transparencia!!!!
• Coordinacion regional no solo a nivel politico sino
geografico
– Corrientes

Cargo vessel traffic
densities based on
AMVER
Agua de lastre
Durante los ultimos 30
años, la industria ha crecido
3% al año (en millones de
toneladas)
En 22 años se espera que
duplique su magnitud

http://www.issg.org/database/species/search.asp?st=sss&sn=&rn=&hci=8&ei=-1&x=22&y=5
84species reportadas
Introduccion de Vibrio
cholerae y
V. parahaemolyticus into
new coastal regions
(McCarthy and Khambaty,
1994; Qulici et al., 2005;
Cabañillas-Beltran et al.,
2006; Nair et al., 2007;
Ansede-Bermejo et al.,
2010; Rivera et al., 2013)
Vibrio cholerae responsible
for the 7th and 8th cholera
pandemics in South America
was found in the ballast
tanks of ships arriving
in Brazilian ports (IMO,
2003).

Acuerdo para el tratamiento
• En el 2004 se adopto la Convencion Internacional para el Control y Manejo del
Agua y Sedimento de Lastre (http://
www.imo.org/About/Conventions/StatusOfConventions/Pages/ Default.aspx)
• Entrara en efecto un año despues de que al menos 30 paises representando el 35%
del tonelage mundial firme el acuerdo.
– Actualmente, lo han firmado 36 paises representando el 29% del tonelage mundial.
• Los estandares para calidad del agua de lastre acordados son
(indicadores):
• Organism group Concentration limit
Organisms >50 µm 10/m3
Organisms 10–50 µm 10/mL
• Indicator microbes:
Escherichia coli 250 cfu/100 mL
Intestinal enterococci 100 cfu/100 mL
Toxigenic Vibrio cholerae (O1 and O139) 1 cfu/100 mL

Tratamiento del agua de lastre
• Algunos utilizan clorinacion, ozono, o UV, la
mayoria usan filtracion (40-µm o 50-µm).
Principales obstaculos:
– No se pueden usar tanques de sedimentacion y
filtros de arena
– Recrecimiento de bacteria despues del
tratamiento (incubador)
• Evaluacion de uso de temperatura
• La Organizacion Maritima Internacional (IMO) ha
producido guias para evaluar la eficacia del
tratamiento.

Zonacion/Compartimentalizacion
• Zona/Compartimento: es un area geografica que
contiene una poblacion con un estado sanitario
diferente respecto a una enfermedad en
particular
• Require un monitoreo activo y especifico y unas
medidas de bioseguridad
• Sistema de notificacion nacional
• Medidas de gestion de zonas predefinidas
– Movimiento de animales (origen de la larva)
– Movimientos de producto

Prevencion de enfermedades a nivel de
industria
A traves de :
– Buen manejo-condiciones adecuadas de cultivo
– Buena nutricion (buena respuesta inmune)
– Animales con la genetica adecuada (alto
crecimiento/resistencia/tolerancia)
– Bioseguridad
Hay que olvidarse de los productos magicos!!

Deaths caused by tubercular
meningitis tuberculosas
(England and Wales)
19601950194019301920191019001900
0
50
100
150
200
0-1 years
1-4 years
Death/100,000
Streptomycin
introduced
De P. Smith 2009
195019401940
0
5
10
15
0
2
4
Deathsin1-4years/100,000
Deathsin5-9years/100,000
penicillin
available
Deaths caused by lobar
pneumonia (UK and Ireland)
1950193019101890187018501850
0
500
1000
1500
Column 1
Standardizeddeathrates(1950-52)
Streptomycin
BCG
Death caused by
tuberculosis (UK and
Ireland)
1197531-1-3-5
3500
4000
4500
5000
5500
6000
6500
7000
500
1000
1500
2000
2500
3000
3500
4000
4500
WW 1
WW 2
Years
WW1
WW2
end of war
Efect of the war in death
rate caused by
tuberculosis in Ireland

Principales riesgos infecciosos a nivel
de industria
1. Siembra de animales infectados
– Reproductores SPF
2. Siembra de animales altamente susceptibles a
enfermedades
– Reproductores tolerantes/resistentes
3. Introduccion de patogenos a traves de agua
– Tratamiento de agua segun estadio de ciclo
4. Introduccion de patogenos atraves de alimento fresco de
reproductores
• Alimentos frescos de maduracion bioseguros
5. Mas control en el sistema de produccion

Transmission Main Shrimp Pathogens
Virus Vertical
transmission
Economic impact Stage
impacted
Production
impact
Strategy
WSSV Intraovum High (highly
prevalent)
Grow out mortality Exclusion
TSV Perovum High (sporadic) Grow out mortality Exclusion
YHV Perovum High (sporadic) Grow out mortality Exclusion
IHHNV Intraovum Medium Grow out mortality Exclusion
IMNV Perovum High (localized) Grow out mortality Exclusion
BP, MBV, HPV Mouth open Low All Slow growth Exclusion
Bacteria
EMS (APHNS) ? High Grow out Mortality Management
NHP Mouth open Medium Grow out Slow growth Exclusion
Streptococus Perovum High Grow out Mortality Exclusion
Vibriosis - High All Mortality/slow
growth
Management
Parasites
Fouling - Low All Management
Microsporidia - Low Grow out Product quality Exclusion

Uso de reproductores silvestres o criados en
estanque
OWENS 1997
Infeccion versus enfermedad
Posible infeccion con patogenos endemicos o nuevos

Animales: susceptible, SPR, SPT y SPF
• Caracterizacion genetica:
– Susceptible: sensible a infeccion y enfermedad
– SPR: resistente a infeccion (cualitativo)
– SPT: tolerante a enfermedad (cuantitativo)
• SPF: Condiciones de cultivo (libre de
patogenos especificos):
– Susceptible+SPF
– SPR+SPF
– SPT+SPF

Animales: susceptible, SPR, SPT y SPF
• Caracterizacion genetica:
– Susceptible: sensible a infeccion y enfermedad
– SPR: resistente a infeccion (cualitativo)
– SPT: tolerante a enfermedad (cuantitativo)
• SPF: Condiciones de cultivo (libre de
patogenos specificos):
– Susceptible+SPF: Sistema alta bioseguridad
– SPR+SPF
– SPT+SPF Sistemas de baja bioseguridad

SPF
• Libre de patogenos especificos
• No necesariamente de todos los patogenos conocidos o
listados por la OIE
– Tailandia: WSSV, TSV, IMNV, YHV, HHNV
• Alta bioseguridad
– Se pierde el status SPF cuando una exposicion
potencial a patogenos

Tailand: exclusion Ecuador: coped with
Controlled ponds Extensive ponds
WSD

Over time Shrimp become more Tolerant
Ecuador
0
10
20
30
40
50
60
70
Ene Feb Mar Abr May Jun Jul Ago Sep Oct Nov Dic
Tendencias, %Spv vs Mes de Cosecha
2003
2004
2005
2006
%Survival

Selective breeding
0
5
10
15
20
25
30
30
44
58
72
86
100
114
2004
2005
2006
2007
2008
2009
2010
2011
2011-fam
Days of culture
grams

Asia America
WSSV IHHNV
EMS TSV
YHV IMNV
MBV NHP
EHP Streptococus
CMNV Espiroplasma
MSGV BP

Desarrollo de SPF tolerantes a WSSV
• Coste fisiológico de la infección
• Coste económico de la enfermedad
• Nivel de tolerancia aceptable a WSSV de las
poblaciones locales como punto de partida
• Paso previo a selección genetica
• Preparacion frente a una nueva epidemia
• Pescanova productor de camarón, el negocio es a
cosecha
– El coste de la selección natural es muy alto para el
camaronero

Monitoreo a nivel nacional de
patógenos primarios:
• Patógenos de la OIE y EHP
• Se encontró: WSSV, IHHNV y NHP
• No se encontró: TSV, IMNV, YHV/GAV, EHP, BP
ni PvNv

SCREENING EN CAMARONERA % IHHNV % WSSV % NHP %N
Fecha Camaronera Procedencia Zona Peso Prom (g) Crec. Sem (g) Sexo G M L N G M L N G M L N
18.02.11 Josefina Aqualab Exclusas-Guayas 24 1,14 H y M 83 15 2 0 1 0 0 99 0 0 0 100 0
23.02.11 Conchal Texcumar Progreso-Guayas 32 1,14 H y M 0 0 3 97 0 0 1 99 39 1 13 47 43
01.03.11 Aguamarina Promarisco Huaquillas-El Oro 26,2 0,84 H y M 63 0 32 5 0 0 0 100 5 0 3 92 5
01.03.11 Aguamarina Macrobio Huaquillas-El Oro 26,5 0,75 H y M 0 0 35 65 0 0 4 96 5 0 1 94 57
01.03.11 Aguamarina Macrobio Huaquillas-El Oro 24 1,14 H y M 23 0 77 0 0 0 0 100 5 0 1 94 0
03.03.11 Encamex Texcumar Tenguel-Guayas 26,9 1,07 H y M 0 0 19 81 0 0 0 100 0 0 0 100 81
03.03.11 Encamex Texcumar Tenguel-Guayas 29,1 1,26 H y M 3 0 21 76 0 0 0 100 0 0 0 100 75
03.03.11 Encamex Uninego Tenguel-Guayas 26,9 1,22 H y M 0 0 5 95 0 0 0 100 0 0 0 100 95
17.03.11 Macalencorp Macrobio
Sabana Grande-
Guayas 28 1,16 H y M 100 0 0 0 0 0 1 99 2 0 21 77 0
17.03.11 Macalencorp Texcumar
Sabana Grande-
Guayas 28,5 0,91 H y M 88 0 22 0 0 0 0 100 21 0 28 51 0
17.03.11 Macalencorp Aquatropical
Sabana Grande-
Guayas 28 1,14 H y M 14 0 79 7 0 0 0 100 1 0 8 91 5
17.03.11 Macalencorp Texcumar
Sabana Grande-
Guayas 27 1,17 H y M 96 3 1 0 0 0 0 100 5 0 15 80 0
23.03.11 Conchal Biogemar Progreso-Guayas 29 1,13 H y M 0 0 57 43 0 0 0 100 81 0 3 16 8
23.03.11 Conchal Aquatropical Progreso-Guayas 29,5 1,07 H y M 0 0 0 97 0 0 0 100 17 0 23 60 45
31.03.11 Marfrisco OTDCF10
Balao Chico-
Guayas 28 1,4 H y M 32 0 57 11 0 0 0 100 0 0 0 100 11
31.03.11 Marfrisco BTDEF10
Balao Chico-
Guayas 23,67 1,05 H y M 100 0 0 0 0 0 0 100 0 0 0 100 0
31.03.11 Marfrisco P3DEF2
Balao Chico-
Guayas 23 1 H y M 97 0 3 0 0 0 0 100 0 0 0 100 0
08.04.11 Encamex Texcumar
Tenguel-Guayas
21,5 1,5 H y M 72 0 25 3 0 0 0 100 0 0 0 100 3
Promedio 44,67 2 26 27 1 0 6 87 7 0 5 88 20

Detección de patógenos
• PCR anidado
• Kits IQ2000 (certificado por la OIE)
• Participación anual con éxito en ejercicios de
calibración con la Universidad de Arizona

Recolección de futuros reproductores
• Recolección de todo el país buscando diversidad
genética
• Animales >30gr
• Piscinas con buenos resultados productivos
• Piscinas de baja prevalencia:
– muestreos previos al azar 75 camarones por piscina
(IHHNV, WSSV y NHP)
• Animales con características fenotípicas de salud
(melanosis, opacidad muscular, etc…)

• Recepción de animales individualmente
• Análisis PCR post stress de temperatura (22-24oC
durante 48h)
– Individual: WSSV, IHHNV y NHP
– Individual de cada hembra despues de ablación y
desove: WSSV
– Pools: TSV, IMNV, YGV/GAV, PvNv
– Pools de PLs despues de stress de temperatura: WSSV
e IHHNV
• Tratamiento sistemático con eritromicina para
NHP: reproductores y baño de huevo/nauplio

• Cada individuo es analizado individualmente 2
veces (machos) o 3 veces (hembras) y a nivel
poblacional 2 veces más.
• Proceso realizado durante 3 generaciones
consecutivas negativas.
– Standard internacional: 2 años libres
Pruebas adicionales
• Distintos tejidos (hemolinfa, branquias y
órgano linfoide), distintos tipos de stress (pH,
salinidad y alcalinidad)
– No se detectó

Proceso auditado y aprobado-
revisión anual
No son
simplemente PCR-
son SPF

Años Ecuador Nicaragua
2010 7.000 26.500
2011 18.176 62.000
2012 39.434 13.831
2013
Total 64.610 102.331
Número de reacciones de PCR

47%
53%
Descartados
Negativos
30,000
reproductores
descartados
Nicaragua 2011 Ecuador
74%
reproductores
descartados:
7,435

Mejoras en larvicultura- Ecuador
No SPF SPF
Días a PL12 20-21 17-18
PLs/gr 350 200
Sobrevivencia 45-50% 70-75%
Coeficiente de
variación
>15% 10-12%

.
HISTORIAL DE MORTALIDADES EN SALA DE RECEPCIÓN DE REPRODUCTORES
27%
25% 24%
18%
0.9% 0.50%
0%
5%
10%
15%
20%
25%
30%
2008 2009 2010 2011 2012 2013
% de Mortalidad
MORTALIDADES SALAS DE RECEPCION
INICIO LOS ARCOS

.
MORTALIDAD DES PUES DE ABLACIÓN
18%
17%
15%
13%
1%
0.30%0%
2%
4%
6%
8%
10%
12%
14%
16%
18%
20%
2008 2009 2010 2011 2012 2013
% de Mortalidad
PORCENTAJE DE MORTALIDAD POST - ABLACIÓN
INICIO LOS ARCOS

.
5%
4%
3%
2%
0.4%
0.1%
3% 3%
2%
1%
0.1% 0%0%
1%
2%
3%
4%
5%
6%
2008 2009 2010 2011 2012 2013
HEMBRAS
MACHOS
MORTALIDAD EN SALAS DE MADURACION
INICIO LOS ARCOS

EVOLUCION SEMESTRAL LBA/HA

303
304
305
302
306
311 AVG CAM
AVG SIS
0%
10%
20%
30%
40%
50%
60%
70%
80%
90%
%SV
Ponds
% SV 91 Days culture - CAMANICA vs controls
74 % versus 82%
Comparación crecimiento entre
SPF y tolerante+SPF
0
2
4
6
8
10
12
14
16
0 7 14 21 28 35 42 49 56 63 70 77 84 91 98 105
Grams
Days
GROWTH - CAMANICA vs Control 80PL/m
303
304
305
302
306
311
PONDS

0
0.5
1
1.5
2
2.5
0%
10%
20%
30%
40%
50%
60%
70%
80%
Larva SPF selcc. Cto Larvanica
FCA
Supervivencia
0.0
1,000.0
2,000.0
3,000.0
4,000.0
5,000.0
6,000.0
7,000.0
8,000.0
0%
10%
20%
30%
40%
50%
60%
70%
80%
Larva SPF selcc. Cto Larvanica
Rendimiento (Kilos/ha)
Supervivencia
Comparison
SPF versus
SPF+toleran
ce under
WSSV
conditions
in intensive
system

Exportados a Arabia Saudita
ADMA 2015

Tratamiento de agua
• Desafio economico:
• Maduracion y hatcheries: ozono+UV
• Desafio legal
– Pocas alternativas para estanques (eliminar
portadores):
• Trichlorfon
• Teaseed cake
• Sulfato de cobre

Alimento fresco para reproductores
EHP
Mussels and poliquetes: PCR+
Suspect of all filter and detritus feeders

Fresh feeds for broodstock
• Known viruses and bacteria: PCR
– Artemia biomass: IHHNV and WSSV
• Parasites: frozen products (microsporidia)
– Squid (avoid organs)
– poliquete (farmed)
– Avoid mussles (avoid filter feeders)
– Certainly NO crustaceans
Need to move to BIOSECURELY PRODUCED FRESH FEEDS

Estrategias a nivel academico
1. Alimento de maduracion
2. Identificacion marcadores de
tolerancia/resistencia a nivel genetico
3. Desarrollo y mantenimiento de
tolerancia/resistencia manteniendo estatus
SPF
4. Desarrollo de parametros de bienestar
(welfare) International Technical Seminar/Workshop “EMS/AHPND:

Sostenibilidad de la industria:
Interdependencia de los 3 sectores
• Gobierno:
– Marco legal protector (ejecucion)
– Transparencia
– Desarrollo de competencia y un Laboratorio de Diagnostico Nacional de
Referencia confiable
– Actitud de apoyo, no fiscalizacion (complicidad)
– Financiacion del sector academico
• Investigacion basica a largo plazo
• Industria:
– Respeto de la legislacion
– Integrar la estrategia sanitaria en la produccion
• Prevenir
– Apoyo e interaccion al sector academico
– Proveer vision de la industria al gobierno
• Investigacion:
– Interaccion con la industria

Gracias a todos

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