Sindrome de la mortalidad temprana EMS

1. Sindrome de la mortalidad
temprana EMS
Enfermedad de la necrosis aguda del
hepatopancreas AHPND
Xenia Caraballo Ortiz, M.Sc.
Investigadora programa Salud Animal
CENIACUA
xcaraballo@ceniacua.org

2. QUE ES??
• Enfermedad bacteriana que ataca el sistema
digestivo del camarón, causando mortalidades que
pueden llegar al100% en los estanques afectados.
• Nueva Pandemia.
• Pérdidas aproximadas de 1 Billón de dólares por
año= 6 billones

4. Effects on Business:
obvious that farms are lost
Whole farming areas of Guongdong, China lost To Aphns (EMS)
2008

5. Thai Shrimp Production
0
100,000
200,000
300,000
400,000
500,000
600,000
700,000
1985 1987 1989 1991 1993 1995 1997 1999 2001 2003 2005 2007 2009 2011 2013
And then I learned:
Still much to learn about sustainability
2014
McIntosh R. Panama 2015

6. GOAL 2013
PRODUCCION DE CAMARON EN LATINOAMERICA 2008-
2015

7. Paises afectados
por EMS
• China (2009)
• Vietnam(2010)
• Malasia (2011)
• Tailandia (2012)
• Mexico (2013)
• India
• Filipinas
Lista de alerta
• Indonesia
• Singapur
• Mianmar
• Brunei
• Cambodia
• Latinoamerica
2013
Fuente: Lightner 2013
2015

8. Sonora Mediados de Mayo 2013
Nayarit April 2013
Sinaloa Principios de mayo 2013

9. QUE LA CAUSA?
INICIOS 2012
• Infección per os con tejidos congelados =
NO EMS
• Inyección intramuscular = NO EMS
• Toxicidad con alimentos = NO EMS
• Toxicidad con crusticidas = NO EMS
• Infección por agua o sedimentos = NO EMS
• Búsqueda de algas tóxicas = No diferencias
con estanques normales

10. JULIO 2012 - VIETNAM
• SPFs alimentados con tejidos NO
CONGELADOS de animales infectados
• Cohabitación de SPFs de P vannamei con P
monodon con síntomas de EMS
SouthChina2010:10-361B/2;P.vannamei#25,10x
26

11. 36+
0+
2+
4+
6+
8+
10+
12+
14+
16+
Day+0+ Day+1+ Day+2+ Day+3+ Day+4+
Numberofsurvivingshrimp
Day post challenge
Control+
Immersion+1+
Immersion+II+
Immersion+III+
Postulados de Koch
Lightner et al., 2013
Lightner 2013
Nunan et al 2014

12. • Solamente bacterias
del estómago de
animales sintomáticos
producían enfermedad
en animales sanos.
• Cual bacteria ?
Vibrio parahaemolyticus
No cualquier Vibrio.
Productor de toxinas

13. Han et al 2015. Photorhabdus insect related (Pir)
toxin-like genes in a plasmid of V
parahaemolyticus, the causative agent of acute
hepatopancreatic necrosis disease (AHPND) of
shrimp. Dis Aquat Organ. 113(1):33-40.
Sirikharin, R. et al. 2015. Characterization and
PCR detection of binary, Pir-like toxins from Vibrio
parahaemolyticus isolates that cause acute
hepatopancreatic necrosis disease (AHPND) in
shrimp. www. PlOSONE.org.
TOXINAS EN PLASMIDOS

14. V
parahamolyticus
Plásmidos
Genes
de
Toxinas
EMS
Plásmido molecula pequeña de ADN, localizada en una célula
y separada del AND cromosomal. Replicación independiente
Transferencia horizonal de genes
Bacteria -------------------Bacteria

15. Proteina similar a toxina
bacteriana que afecta insectos:
Centrifugado
y filtrado
Juvenile+Penaeus+vannamei++from+Vietnam.+++
Left+with+EMS+right+appears+normal.+
Se inyecto el
sobrenadante
EMS +++
Se han identificado 4 plásmidos en
VP causante de AHPND (Gomez Gil
2014)

16. 134 Vibrio spp.
117 Vibrio parahaemolyticus.
16 Vibrio parahaemolyticus
causantes de AHPND/EMS.
AP1, AP2; AP3, etc
Modificado de Huan et al 2014
No todos los vibrios son iguales

17. CUALES SON LOS SINTOMAS ?

18. Sintomatología piscinas
• Nado errático
• Animales muertos en las orillas y en el fondo
• Presencia de aves
• Bajo crecimiento
• La mortalidad generalmente aparece en las
primeras dos semanas y puede llegar a 100%
en el primer mes
• La mortalidad puede repetir a los 60 días.

19. Signos clínicos
• Disminución del tamaño
del hepatopáncreas
(Atrofia)
• Cambio en la
consistencia del
Hepatopáncreas
(cauchosa – dura)
• Tracto digestivo vacío Microc
on epic
Lumen o
EMS COLONIZESTHE STOMACH AND
TOXIN THAT DAMAGESTHE HEPATO

21. 10+
Juvenile+Penaeus+vannamei+
Left+with+normal+HP+right+with+EMS/AHPND+

23. Diagnóstico
Última actualización: Agosto de 2013 © 2013 Página 4 de 7
e. Infección secundaria severa en el HP
principalmente con especies de Vibrio
f. Destrucción masiva y completa del HP en la parte
terminal de la enfermedad
g. Agregación hemocítica en el HP, encapsulando
zonas con células muertas
h. Melanización de las áreas más afectadas en la fase
avanzada de la enfermedad, principalmente en las
porciones proximales de los túbulos de algunos
camarones
Fotos cortesía del Dr. D.V. Lightner y del Dr. C. Pantoja
(The University of Arizona, USA).
Toma de muestras para laboratorio
Histopatología. Este tipo de técnica requiere que los
camarones capturados se encuentren visiblemente enfermos
y con presencia de los signos clínicos mencionados
anteriormente. Los organismos para histología siempre
deben estar vivos (preferiblemente moribundos). Los
animales enfermos seleccionados para esta prueba, deben
ser entre 5 y 10 por población (estanque o cuerpo de agua)
y deben ser fijados mediante inyección con solución
fijadora de Davidson-AFA (etanol absoluto: 33%,
formaldehído: 22%, ácido acético glacial: 11.5% y agua
PCR
Plásmido
AP2
PCR
Gen de la Toxina A
AP3
PCR
AP4 PCR Anidada de la
secuencia de ambas
toxinas
WHY ISTHE EMSPATHOGEN DIFFERENT THAN A
VIRUS?
• Unlike viruses, it
does not require a
host organism to
replicate
• Once established in
the environment. It
colonizes quickly
• It can be displaced
by a mature microbial
community
37

24. Histopatologia
• Fase aguda
• Perdida de funciones de las celulas R; B; F
&E
• Desprendimiento de celulas epiteliales del
HP.
• Las bacterias no se observan fácilmente
• Fase terminal
• Destrucción del hepatopáncreas

25. AHPND Fase aguda
mal+hepatopancreas+(HP)+
14+
AHPND
terminal

26. AP3/AP4 comparison
AP3
AP4
Flegel TW. International Technical Seminar/Workshop “EMS/AHPND: Government, Scientist and Farmer
Responses”

27. • PCR:
• Contig 89: Es usado por el kit comercial IQ2000
• Nunan et al 2014. Plasmido
F. 5’-GTC GCT ACT GTC TAG CTG AA-3’
5’-ACG GCA AGA CTT AGT GTA CC-3’
Fragmento de 470 bp
for 3 min at 95°C followed by
40 cycles at 95, 67 and 72°C for 20, 20 and 30 s, respectively.
• Flegel et al 2014. Toxina
VP3
F:ATGAGTAACAATATAAAACATGAAAC
R: GTGGTAATAGATTGTACAGAA
Fragmento de 336 bp
For 5 min at 94°C followed by
30 cycles at 94, 53 and 72°C for 30, 30 and 40 s, respectively.

28. Muestra para Microbiologia
• Muestras
• Estomago
• HP
• Contenido intestinal
• Enriquecimiento preliminar en Caldo de
tripticasa de soya (TSA) al 1,5-2.0 % de NaCl
suplemento
• Incubar durante 4 horas a 28ºC- 30ºC con
agitación.
• Siembra en TCBS
• Repique en TSA
• Pruebas bioquimicas

30. DIAGNOSTICO DIFERENCIAL AHPND /EMS
SIGNOS
CLINICOS
TIPO DE MORTALIDAD
POSIBLES
CAUSAS
HISTOLOGIA
DIFERENCIAL
- Letargia
- Estomago
vacio
- HP atrofiado
- HP palido
- Melanizacion
tubulos del
HP
CRONICA
Vibriosis NO
CRONICA
NHP NO
AGUDA EMS/AHPNS YES

31. AHPND/ EMS
Factores de riesgo?
A.Larva /reproductor infectados
B.Camarón reprocesado procedente de
áreas infectadas
C.Corrientes marinas portando vectores
D.Alimento fresco: poliqueto, Artemia
E.Aves migratorias:

32. Especie
susceptible Medio
ambiente
propicio
Patógeno
V parahemolyticus
Plásmido
Genes de Toxinas
P vannamei
P monodon
Cual ??

33. Medio ambiente
Parámetro Propicio para EMS
Temperatura Superior a 30oC
pH >8.0
Salinidad Superior a 20 ppt
Oxígeno disuelto Inferior a 5
Materia órgánica Sedimentos en el fondo de los estanques
Agua Aguas eutroficadas
Alimento Sobrealimentación

34. R BLOOM /CRASH AND LOW

35. Medidas generales
AlimentoAlimento
Libre de la toxina Adecuada cantidad
Medio ambienteMedio ambiente
Calidad de agua y
fondos.
Melaza. Agua madura Adecuada oxigenación
SemillaSemilla
Larva PCR - Larva sana

36. LARVAS Y REPRODUCTORES SANOS
ntine
??
Live feed !!!!
• Testing
• Treating
• Cleaning
• Formulated feed ?
Washing egg/nauplii
Treatment ?
International Technical Seminar/Workshop “EMS/AHPND: Government, Scientist and Farmer Responses”
22-24 June 2015, Tryp Hotel, Panama City
DESINFECCION DE HUEVOS Y NAUPLIOS
ests
nce to EMS
oods
on
al
rove EMS
TED?
ae
p
re a
Bacterial plaque on eggPLACA BACTERIANA EN HUEVO
Chamberlain G. GAA meeting 2014
Testing and quarantine
• SPF
• Home grown ???
Live feed !!!!
• Testing
• Treating
Washing e
Treatmen
In maturation and spawning phase ; main
focus
ALIMENTO VIVO LIBRE

37. Medidas generales
Monitoreo y seguimientoMonitoreo y seguimiento
•Toma de muestras en casos
sospechosos
NotificaciónNotificación
•Aplicar planes de contingencia

38. Medidas de Bioseguridad
1. LARVA SANA
• No importar larvas (Ideal)
• originaria de países libres de
enfermedades exoticas
• originaria de países que no
presenten mortalidades
inusuales
• Certificados sanitarios: PCR
Negativo para AHPND/EMS,
WSSV ..

39. Medidas de Bioseguridad
2. Camarón reprocesado
• Plantas de reproceso deben tener
un tratamiento de aguas de
descarga
• originario de países libres de EMS,
WSSV etc
• originario de países que no
presenten mortalidades inusuales
• PCR Negativo para AHPND/EMS,
WSSV

40. Medidas de Bioseguridad
3. Alimento fresco
• Poliqueto
• Artemia
• Calamar
• Que provengan de zonas libres de
EMS, WSSV, etc

41. Medidas de Bioseguridad
• Evitar el estrés ambiental
• Mantener la salubridad del entorno de
los estanques
• Secar las piscinas entre ciclos puede
interrumpir ciclo de vida del patogeno

42. 4 Pandemias en 23 años
Patógeno (año) Impacto
IHHNV (1990) Mínimo
TSV (1995) Importante
WSSV (1992) Mayor
EMS 2011 Catástrofico
Otras EHP ? CMNV ?
6/24/2015
International Technical Seminar/Workshop “EMS/AHPND:
Government, Scientist and Farmer Responses”
6
“Man seems to insist on ignoring the lessons available from history.” – Norman Borlaug
5 PANDEMICS IN 23 YEARS
Minor Diseases
Microsporidians
Gregarinas
Streptococcus
Vibriosis
Rickettsia
1990 – IHHNV : Impact, Minimum
1995 – TSV : Impact, Important
1997 – NHP : Impact, Important
2001 – WSSV : Impact, Major
2013 – AHPNS : Impact, Catastrophic
20?? - Enterocytozoon hepatopenae (EHP)
Covert Mortality Noda Virus (CMNV)
Something New
Patógeno (año) Impacto
IHHNV (1990) Mínimo
TSV (1993) Importante
WSSV (1999) Mayor
EMS (2013) ???
Otras
EHP = Enterozytozon hepatopenae
CMNV = Covert Mortality Noda virus

43. COMENTARIOS
MUCHAS
GRACIAS