Transferencia de embriones

1. Nombre: Jennifer Benítez
Ciclo: IX “B”
UNIVERSIDAD NACIONALDE LOJA
FACULTAD AGROPECUARIA Y DE RECURSOS NATURALES
RENOVABLES
CARRERA DE MEDICINAVETERINARIA Y ZOOTECNIA
MATERIA DE BIOTECNOLOGÍAS REPRODUCTIVAS
TEMA:
TRANSFERENCIADE EMBRIONES

2. Primera TE en
bovinos
Umbaug obtuvo 4
gestaciones de
embriones transferidos,
pero las receptoras
abortaron antes de
llegar a término la
gestación.
Willet logró el
nacimiento de un
embrión bovino de 5
días de edad obtenido
del rastro y transferido
Seidel (1981) reportó
que se obtuvieron más
de 17,000 preñeces en
los Estados Unidos.
1949 1951 1979
Historia
TRANSFERENCIA DE EMBRIONES (TE)

3. Obtención de crías a partir de donadoras genéticamente superiores,
utilizando el útero de receptoras de menor valor económico para llevar
la gestación a término.
Definición
Los embriones recogidos pueden transferirse a
las receptoras de manera inmediata, o
conservarse a bajas temperaturas durante un
periodo prolongado, proceso denominado
criopreservación.

4. VENTAJAS
• Obtención de una descendencia
genéticamente superior.
• Disminución de contagio de
enfermedades infecciosas.
• Mejoramiento genético a corto plazo.
• Multiplicación de las características de
una hembra genéticamente superior.
• Rescate genético.
• Movimiento nacional e internacional de
animales de alto valor genético
DESVENTAJAS
• Requiere de técnicas avanzadas y
complejas
• Mayor costo, aunque el beneficio
económico es mayor
• Las donadoras y receptoras deben ser
reproductivamente sanos
• Las donadoras deben ser de calidad
superior

5. Selección de vacas donadoras y receptoras
Donadora Características clínicas adecuadas como un útero de buena
conformación, anatómica y morfológicamente, un cérvix penetrable
• Ciclos regulares desde temprana edad.
• No requerir más de 2 servicios/concepción
• Tener 3-10 años de edad
• Promedio de día entre calores, 17-24 días.
• No alteraciones en el aparato reproductor
• Bajos intervalos entre partos
• Alto valor genético
• Libres de parásitos internos y externos
• Buena condición corporal, 3-3,5
• Buen número de embriones en el lavado

6. Una vaca joven, habilidad materna. Tener un tamaño
adecuado para no presentar problemas al parto.
Receptora
• No presentar enfermedades hereditarias
• Excelente historial reproductivo y salud
• No tener enfermedades que afecten la
fertilidad
• No ser demasiado viejas.
El método más común de selección, la inspección general,
examen ginecológico y en los registros reproductivos.
La raza no es un factor importante, se acepta
vacas cruzadas que tienen mayor fertilidad

7. SUPEROVULACIÓN (vacas donadoras)
Mantiene altos niveles de FSH, para provocar la estimulación
de varios folículos en el mismo ciclo en los 2 ovarios.
Las respuestas son variables, con ningún folículo o con 15 o más folículos.
Prostaglandina (PG) aplicar el día 13 del ciclo de la vaca. Para que
produzca efectos de celo. FSH-P aplicar desde el día 10 del ciclo
hasta el día 14, en inyecciones cada 12 horas para mantener niveles
constantes de hormona.
FSH-P de origen porcino, entre 35-50 mg. Al día, aplicando
5mg en la mañana y 5 mg en la tarde durante 5 días.

8. ● Algunos métodos como el implante en la
oreja, retirar 48h antes de que la donadora
entre en calor.
● Al utilizar PG o sus análogos, a la receptora se
debe inyectar entre las 24h antes de las
donadoras, pues en las donadoras la
respuesta de celo es más rápida.
● La prostaglandina aplicar a las receptoras, el
día 12 del ciclo de la donadora.
SINCRONIZACIÓN DE CELOS EN VACAS RECEPTORAS
Lograr que las donadoras y las receptoras presenten
celo a la misma hora, entre de 10 a.m- 2p.m

9. TÉCNICA DE COLECCIÓN DE EMBRIONES
Donadora
5-10ml
Se introduce un estilete metálico, lubricante
estéril y se introduce a través de vagina y cérvix.
Es llevado directamente a uno de los cuernos y una vez lavado
pasar al otro. Colocado en el cuerno, el estilete es retirado 2 ó 3 cm
y el catéter es empujado suavemente. Esta maniobra se repite
hasta que la punta del catéter esté en la posición deseada.
Catéter

10. ● La sonda se coloca en el cuerno uterino, profundamente,
se calcula la cantidad de PBS que cabe en el extremo
distal del cuerno y se va introduciendo con una jeringa,
recuperándolo por gravedad.
Recuperación de embriones
Recuperación por gravedad con circuito cerrado flujo continuo
• Se masajea ligeramente el cuerno
y se procede a su extracción por
gravedad.
• Cuando no se usan válvulas anti-
reflujo, tener la mano introducida
en el recto para saber cuándo se
ha llenado el cuerno uterino.

11. Recuperación por aspiración interrumpida método de la jeringa
Algunos equipos introducen el PBS conectando
directamente la sonda a una jeringa y
aspirando con la misma jeringa, para una vez
extraído, pasarlo a un filtro, depositarlo en
frascos o directamente en placas de Petri.

12. El medio de colección se deja sedimentar en una probeta, después
de finalizada la colección.
Búsqueda y manipulación de los Embriones
500 ml por
20-30 min
El sobrenadante se extrae por aspiración hasta que el medio baje
hasta la marca de 50 ml. Lo que queda en la probeta se coloca dentro
de placas de Petri estériles y se busca con un aumento de 10X.
Se pasa el sobrenadante (450 ml) por un filtro
de plancton de 50 μm para recuperar
cualquier óvulo o embrión que haya quedado.

13. Cada placa repasar dos veces más.
• Finalizada cada búsqueda se realiza un movimiento rotativo con la
placa para despegar algún posible embrión adherido a los bordes.
• Se va colocando en una placa de Petri pequeña que contiene el
medio de mantenimiento (PBS + 10-20% FCS).
Se puede filtrar directamente todo el medio de colección utilizando filtros
descartables estériles. Se lava el filtro con PBS utilizando una jeringa y aguja
fina y el fluido de lavado es colectado en una placa de Petri estéril para la
búsqueda de los embriones.

14. • Posteriormente son lavados eliminando cualquier suciedad al menos tres veces,
siendo preferible realizarlo 10 veces en medio estéril.
• Una vez seleccionados los embriones a transferir se deben efectuar varios
lavados, con el fin de eliminar moco o células adheridas a la ZP.
Para el efecto se realiza la siguiente serie de lavados:
• 5 lavados con PBS (1/100 volumen de los embriones y no más de 10 embriones).
• 2 lavados con tripsina al 0.2% por 30 a 60 segundos
• Si los embriones se conservan por más de 6h deberán ser colocados en medios
de cultivo fresco dentro de un tubo de ensayo y almacenados en un termo.

15. ● Forma esferoide
● Simetría de los blastómeros
● Apariencia clara y neta de los blastómeros.
● Tonalidad oscura y uniforme
● Uniformidad de la membrana celular
● Proporcionalidad entre el embrión y el espacio perivitelino.
● Integridad de la zona pelúcida
● Ausencia de vacuolas en el embrión y bridas celulares en el espacio
perivitelino
● Ausencia de detritus celulares adheridos a la zona pelúcida
● Compactación de los blastómeros entre sí.
EVALUACIÓN Y SELECCIÓN DE EMBRIONES

17. 4. Malo (muerto o degenerado).- embrión, ovocito y
embriones de 1 célula degenerados, no viables
Los códigos de calidad embrionaria varían de 1 a 4.
1. Excelente.- Excelente, el desarrollo corresponde al día de la recolección. No
existen defectos visibles. Los blastómeros son claramente visibles, de color y
estructura uniformes, simétricos, de forma esferoide y la zona pelúcida está intacta
2. Bueno.- irregularidades moderadas en cuanto al aspecto, forma, tamaño,
color y densidad de las células. El 50% del material celular deberá
encontrarse intacto y corresponde a una masa embrionaria viable.
3. Regular.- irregularidades mayores en la forma y tamaño de la masa embrionaria,
así como en el tamaño, color y densidad de células individuales. El 25% del material
celular deberá encontrarse intacto y corresponde a una masa embrionaria viable.

18. PROCESO DE CONSERVACIÓN DE EMBRIONES
Refrigeración
• Se efectúa vehiculizando los embriones en PBS envasados en pajuelas de 0,25
ml y colocadas en un refrigerador.
• Se han obtenido porcentajes de preñez que oscilan entre el 44 y el 50%.
• La refrigeración de embriones puede ser considerada como una alternativa
interesante cuando no sea posible recurrir a la congelación.
• Puede emplearse esta técnica para conservar embriones hasta que las
receptoras asincrónicas alcancen la sincronización adecuada.
Mantiene embriones a temperaturas entre 0 y 4 ºC
durante 24 a 72 horas.

19. Congelación
Los embriones pueden ser mantenidos a -196ºC, sin afectar su
viabilidad y sin causarles cambios genéticos.
Es la técnica de elección para conservar
embriones in vitro.
Cuando se congelan embriones de calidades muy buena
y buena (grado I y II) se obtienen mejores resultados que
cuando se congelan de calidad regular (grado III).
• La viabilidad embrionaria disminuye
significativamente cuando dicho período es >3h.

20. Se los deshidrata nuevamente colocándolos en una solución mixta de glicerol y
sucrosa en PBSS, deja a los embriones en condiciones de ser enfriados rápidamente.
Método de congelación rápida
Los embriones son deshidratados parcialmente.
Las pajuelas son colocadas en el cuello del contenedor de
nitrógeno líquido, para que la cristalización ocurra
espontáneamente sin producirse la elevación de temperatura.
Las pajuelas, luego de permanecer 5min en el cuello del termo,
son sumergidas en el nitrógeno.

21. ● Se introduce la pajuela congelada en agua a 37° durante algunos minutos.
● Luego eliminar el crioprotector antes de la transferencia.
● El embrión ya puede ser transferido en el útero de la receptora mediante
catéter de implantación especial para embriones
DESCONGELADO DE EMBRIONES
Una congelación lenta hasta -30° debe estar asociada a una velocidad
de descongelación muy rápida, con el fin de evitar la recristalizacion.

22. TRANSFERENCIA DE EMBRIONES (receptoras)
El embrión será depositado en el
cuerpo ipsilateral al ovario donde
encontramos un cuerpo lúteo.
4-7 ml
Se toma suavemente el cuerno y presentarlo frente a la
punta del instrumento, algo más levantado que el cérvix.
Sosteniendo a éste en su segmento medio-ventral se fija
el cuerno uterino, estirándolo y empujando ligeramente
la vaina hacia craneal.