AUTORA: Alexandra Agreda Universidad Nacional de Loja BIOTECNOLOGIAS REPRODUCTIVAS IX "B"

1. DOCENTE: Dr. Manuel Quezada
UNIVERSIDAD NACIONAL DE LOJA
CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
IX B
BIOTECNOLOGIAS REPRODUCTIVAS
TRANSFERENCIA DE EMBRIONES
AUTORA : Alexandra Agreda

2. DEFINICIÓN
Técnica mediante la cual, los embriones son colectados
del cuerno uterino de una hembra donadora antes de la
nidación y transferidos al cuerno uterino de unas hembras
receptoras en las que se completara la gestación.

3. HISTORIA
En 1891: 1era transferencia exitosa de embriones utilizando
embriones de conejo por Heape.
En 1930: El 1er embrión bovino fue extraído por Hartman, Lewis,
Miller y Swett (Carnegie Laboratory of Embryology de Baltimore)
En 1950: Esta técnica en bovinos, dio un gran paso al efectuarse la
primera por Umbaugh.
En 1951: 1er nacimiento de un ternero, y esto se logró por un
esfuerzo combinado del Departamento de Agricultura de los
Estados Unidos y la Universidad de Wisconsin.
Hasta la década de 1970: el avance fue lento, con muchas ideas
que terminaron en el fracaso.
Con el surgimiento de métodos no quirúrgicos mediante los
esfuerzos de Elsden, Hasler, Seidel y otros, el uso comercial de la
transferencia de embriones tuvo auge
En el 2002: se registraron más de 25.000 terneros nacidos por esta
técnica en EEUU

4. VENTAJAS DESVENTAJAS
 Mejoramiento Genético
 Fomenta el número de partos gemelares
 Transporte de razas con facilidad
 Conservar especies.
 costos de transporte/material genético de alta
calidad.
 Obtención de crías de vacas con problemas de fertilidad.
 Disminuye enfermedades de transmisión sexual.
 Producción de crías selectas a mayor escala
 Costos operacionales
 Entrenamiento de los técnicos e instalaciones
 Costos de las receptoras
 Requiere de técnicas avanzadas y complejas
 Mayor costo comparado a la inseminación artificial; no
obstante el beneficio económico es mayor.
 Requiere sementales y hembras donantes de alta
genética
VENTAJAS Y
DESVENTAJAS
De 100 vacas transferidas en fresco el
% de preñez oscila entre el 50 y 60 %
y cuando son embriones congelados se
habla de 40-50 %

5. SELECCIÓN
DE DONANTES
Se determina por su valor genético y su
capacidad para lograr un alto nivel de
resultado.
LA APTITUD COMO
DONANTE
No requerir más de dos servicios por concepción.
Presentar ciclos regulares desde temprana edad
No presentar defectos de conformación o genéticos detectables.
Tener de 3- 10 años de edad.
Debe tener un promedio de día entre calores entre 17 y 24 días
No deben existir alteraciones en su aparato reproductor
Ser de alto valor genético.
Buena condición corporal de 3 – 3,5 en escala del 1 al 5.
Libres de parásitos internos y externos.

6. TRATAMIENTO DE
SUPEROVULACIÓN
eCG-Respuesta superovulatoria, dia 8 y 12 ciclo
UNA DOSIS
Vida media en la sangre (+ de 10días)
FSH
Vida media corta 5-12 horas
Múltiples aplicaciones IM para superovulación
6-8 aplicaciones con intervalos de 12 horas
PROCOLO DE SUPEROVULACIÓN CON
TRES INYECCIONES DE FSH CADA 36
HORAS.

7. SELECCIÓN DE VACAS
RECEPTORAS
Sin patologías reproductivas
o ginecológicas.
Ideal: animales jóvenes, bien
conformados, hembras multíparas o
lactantes energéticamente
equilibradas
Tamaño apropiado para parir con seguridad
al (feto).
Temperamento tranquilo para evitar lesiones
al personal y/o a las crías.
El instinto maternal y nivel de producción
de leche son importantes si la descendencia
va ha ser criada por la receptora.
Animal sano con las mayores posibilidades
de desarrollar su gestación
Novillas con buen desarrollo corporal (340-
350 kg) y Ciclos estrales regulares.

8. SINCRONIZACIÓN DE CELO DE RECEPTORAS
T.E. en fresco: las receptoras estar en celo el
mismo día que las donadoras, para en la
transferencia, coincida la misma secuencia de
ovulación y así favorecer la preñez para las vacas
receptoras, una vez haya sido transferido el
embrión.
Embrión es congelado: las vacas receptoras se
sincronizan solo para que entren en celo y esperar 7 días
para transferir el embrión.

9. COLECTA DE
EMBRIONES
Se hace al día 7 mediante un lavado uterino transcervical.
Se encuentra embriones en estadios de Mórula y blastocisto (+ estables
que los demás estadios), pueden ser transferidos directamente
(transferencia en fresco), pero también resisten a la congelación y
micromanipulación

10. PROCEDIMIENTO DE COLECTA DE EMBRIONES
Equipos y materiales: preparados una vez la
vaca esta en la prensa, estar esterilizados (en
caso de reutilizar materiales) y listos para poder
empezar a colectar.
Los medios que se utilizan para colectar deben estar en
baño María a una Tº de 37°C, similar a la Tº corporal
de la vaca, para evitar el choque térmico a los
embriones.
Área de trabajo debe estar a una temperatura ideal, tal
es el caso que hace mucho frío utilizar calentadores

13. Se aplica anestesia epidural Lidocaína al 2% con una dosis de 5 a 10
mL entre las articulaciones del sacro y la primera vértebra coccígea.
Para la colecta de embriones se necesita una sonda (catéter de Folley)
que servirá como un tubo donde pasará el medio y los embriones.
El balón se infla con aire de 15-25 mL en animales adultos y 10-15 mL en el
caso de novillas.
El estilete se introduce en el catéter de Folley para pasarlo por el cérvix hasta llegar al
cuerpo del útero, una vez pasado por el cérvix se infla el balón para sellar la unión del
cérvix con el cuerpo del útero y evitar que se salgan los embriones.

14. Una vez colocada la sonda, debe estar preparado el medio de lavado
(SFB 1% + albúmina) el cual debe estar en el baño María.
Ayudante conecta la bolsa del medio con la sonda y el filtro,
también el técnico debe de asegurar que el medio tenga un
reflujo hacia el filtro para comprobar que la sonda esta bien
colocada.
En el lavado el técnico debe hacer unos masajes en el útero de
la vaca para poder colectar los embriones a través de la sonda y
hacerlos llegar hasta el filtro.
La colecta de los embriones con el medio se hace 1 o 2 veces,
usando por lo menos un litro de medio por colecta.
Se realizan 2 lavados.

15. AISLAMIENTO DE LOS EMBRIONES
Una vez colectado los embriones son llevados al
laboratorio, para seleccionaros y los filtros
utilizados para el lavado son también llevados,
para luego trasladar los embriones atrapados a
las cajas Petri.
Para la selección de los embriones se utiliza un
microscopio y una placa de petri cuadriculada
(cuadros divididos del 1 al 5 en forma vertical y
de la A a la E en forma horizontal) para poder
hacer campo y buscar los embriones,

16. Se lava primero la parte donde está la redecilla y cada vez que se
lava el filtro se pone el medio en la caja petri.
Al tener todo el medio en el caja petri de búsqueda (cuadriculada)
se procede a buscar los embriones se realizan de 2 a 3 búsquedas
para encontrar el número máximos de embriones

17. Cuando se encuentra 1 embrión, se toma una micropipeta con
una punta nueva.
Cuando se hayan encontrado todos los embriones y pasaron
por la caja de mantenimiento se hará una limpieza del
embrión, eliminando cualquier suciedad.
Se lo extrae cuidadosamente y pasa de la placa de petri grande
a la caja petri pequeña (caja de mantenimiento) que tiene un
medio que almacena y mantiene el embrión y evita la
contaminación.

18. Los embriones tienen que pasar por 5 lavados con la solución de
mantenimiento (holding)
Seguido de 2 lavados en una solución de tripsina (proceso de
eliminación de agentes contaminantes cercanos al embrión) en la
cual los embriones deben estar de 30-40 segundos.

19. EVALUACIÓN DE EMBRIONES (CALIDAD DE EMBRIONES)
CÓDIGO ESTADO OBSERVACIONES
CALIDAD 1 EXCELENTE O BUENO Embriones uniformes en color tamaño y densidad
CALIDAD 2 REGULAR Moderadamente presenta irregularidades en los embriones
individuales en tamaño, color y densidad.
CALIDAD 3 POBRE Presenta mayores irregularidades en la masa del embrión
en el tamaño, color y densidad de las células individuales.
CALIDAD 4 DEGENERADO Embriones de una sola célula, estos embriones no son
viables.
EVALUACIÓN DE LOS EMBRIONES

22. LLENADO DE LA PAJILLA
DE EMBRIONES
Antes del llenado de las pajillas, los embriones deben estar en
una solución comercial llamada Vigro Holding ,para mantener
los embriones e implantarlos en fresco.
Primero se llena de solución de Vigro Holding Plus, luego un espacio de aire; en
el siguiente espacio deberá ir el embrión en la solución (porción media de la
pajilla), seguido de un espacio de aire y al final la solución.
Para llenar las pajillas se usa una jeringa de insulina, la que se
le adhiere la pajilla donde se ubicará al embrión.

23. Al finalizar el llenado, se debe sellar la pajilla al extremo
donde no se encuentra el algodón dentro de la pajilla, con la
máquina selladora por calor.
De esta manera el embrión queda situado en el segmento
central de la pajuela entre las dos burbujas de aire.
El aire que se le adhiere a la pajilla es para que en la
transferencia, el embrión no se quede en la pajilla y salga sin
ningún problema.
Una vez sellado se procede a la implantación.

24. Se utiliza alcohol etílico al 70% para el proceso de congelado ya que su punto de congelamiento es a -50°C.
PREPARACIÓN DE EQUIPO DE
CONGELACIÓN
Al preparar el equipo se debe tener un punto de partida donde se empieza a
congelar las pajillas y un punto final con un rango de descenso de -0.53°C por
minuto: Punto de partida -0.60°C Punto final -34.0°C.

25. Para cristalizar el medio que está dentro de las pajillas hay
que colocarlas en el equipo de congelamiento a -0.60°C de 2
a 3 minutos.
CRISTALIZACIÓN
Posteriormente se inicia el descenso de Tº de -0.53°C por min. Al
llegar al punto final de Tº (-34°C) las pajillas son llevadas al tanque
de congelamiento con nitrógeno líquido a -196°C.
Tener lista una barra de cobre (tanque de nitrógeno líquido)
para pasarla por las pajillas que están dentro del equipo
(cristalización)
Todo el proceso del congelamiento tarda alrededor de una
hora
Después de pasar la barra de cobre por las pajillas se dejan
reposando en el equipo en un tiempo de 10 min. a -0.60°C

26. ETIQUETADO DE PAJILLAS
 Número de la pajilla (1)
 Tipo de solución que se utilizó para el congelamiento. Por
ejemplo DT: si es en congelado en etilenglicol.
 Número del laboratorio que realiza T.E. (registro: 1279).
 Raza (AN: Angus).
 Número de registro de la vaca (14763076).
 Nombre de la vaca (N256).
 Raza de la vaca (AN: Angus).
 Número de registro del toro (14542822).
 Nombre del toro (opcional, por ejemplo SUM. PFRED
ON12).
 Número de embriones.
 Grado y calidad del embrión.
 Fecha de colecta y congelamiento.

27. DESCONGELACIÓN DE LOS EMBRIONES
Se debe hacer lo más rápido posible en agua a
37°C.
Embriones que son criopreservados en un mismo
medio, el agente crioprotector (glicerol) debe ser
removido de las células del embrión
Luego se hace una evaluación de los embriones, los que son
aptos para la transferencia se colocan en pajillas de 0.5 o
0.25 mL y se transfieren directamente
Esto se logra lavando 4 o 6 veces sucesivas en
soluciones de concentración decreciente del
crioprotector.

28. • .
•
PROCEDIMIENTO PARA LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONES
Traslado de vacas receptoras de las pasturas a la manga: no
debe ser sometidas a estrés para obtener mejores resultados, se
la lleva a la manga donde será sometida a este proceso
Evaluación de la receptora: mediante palpación vía rectal o
con un ecógrafo se ve el estado del CL. Si esta es apta para la
transferencia, se le pone una marca en la grupa donde se hará el
implante

29. Esta labor se la hace con un asistente para ayudar a aligerar el
trabajo, se descongela la pajuela y se prepara la pistola de T.E
Se toma la pajuela por el extremo del algodón, se la introduce por la
punta de la pistola y se introduce dentro de la funda para la T.E.
Y se coloca una camisa protectora estéril plástica para proteger de
cualquier suciedad una vez introducida en la vagina
ARMADO DE LA PISTOLA DE TRANSFERENCIA

30. Se inyecta anestesia epidural para bloquear los movimientos
rectales y el músculo del esfínter anal, pero antes se le hace una
limpieza en el lugar donde se va a inyectar para evitar cualquier
infección.
PREPARACIÓN DE LA VACA RECEPTORA UNA VEZ ESTÁ EN LA MANGA
Se aplica de 5 a 10 ml de Lidocaína al 2% entre las
articulaciones del sacro y la primera vértebra coccígea. Una vez
terminada la preparación de la pistola se procede a la
transferencia del embrión.

33. Después que finaliza la transferencia se coloca un arete en la oreja
derecha con la información correspondiente de que la vaca ha sido
transferida.
Un mes después de la transferencia se hace una palpación rectal
utilizando el ecógrafo para verificar si están preñadas.
Estas vacas se llevan a una pastura a parte de las demás receptoras
que no fueron transferidas con un embrión.
IDENTIFICACIÓN DE LA VACA TRANSFERIDA

34. Las que quedan preñadas se les deja el arete que se les puso en la oreja
derecha y las que no quedaron preñadas se les remueve el arete y se
vuelven a las pasturas con las demás receptoras vacías.