2. TRANSFERENCIA DE EMBRIONES
INTRODUCCIÓN
La primera TE en bovinos fue reportada por Umbaug en 1949.
Willet en 1951 logró el nacimiento de un embrión bovino de 5 días de edad
obtenido del rastro y transferido.
3. Obtención de crías a partir de donadoras genéticamente superiores,
utilizando el útero de receptoras de menor valor económico para llevar
la gestación a término.
Donadoras Receptoras
DEFINICIÓN
Los embriones recogidos pueden transferirse de manera inmediata, o
conservarse a bajas temperaturas durante un periodo prolongado
(criopreservación)
4. VENTAJAS Y DESVENTAJAS
Ventajas
Obtención de una descendencia
genéticamente superior.
Disminución del riesgo de contagio de
enfermedades infecciosas.
Mejoramiento genético de un grupo de
animales a corto plazo.
Rescate genético de animales
accidentados o enfermos.
Movimiento nacional e internacional de
animales de alto valor genético
(importación y exportación)
5. Desventajas
Requiere de técnicas avanzadas y complejas.
Mayor costo comparado a la inseminación artificial.
Es relativamente costosa y de baja eficiencia.
Las donadoras y receptoras deben ser animales
reproductivamente sanos.
Las donadoras deben ser de calidad superior (la TE por sí misma
no mejora la calidad genética)
6. SELECCIÓN DE VACAS DONADORAS Y
RECEPTORAS
Donadoras
Haber presentado ciclos regulares desde temprana edad.
No requerir más de dos servicios por concepción.
Tener de 3- 10 años de edad.
No deben existir alteraciones en su aparato reproductor.
Bajos intervalos entre partos
Buena condición corporal de 3 – 3,5 en escala del 1 al 5.
Buen número de embriones en el lavado
7. Receptoras
No presentar enfermedades hereditarias.
Tener excelente historial reproductivo y salud.
No tener enfermedades que afecten la fertilidad.
No ser demasiado viejas.
8. SUPEROVULACIÓN (vacas donadoras)
Mantener altos niveles de
hormona foliculoestimulante
(FSH)
Estimulación de varios folículos en
el mismo ciclo en los 2 ovarios
FSH-P de origen porcino
entre 35 y 50 mg. En dosis
decrecientes durante 5
días.
la Prostaglandina se debe aplicar el día 13 del ciclo
de la donadora. La (FSH-P) se comenzará aplicar
desde el día 10 del ciclo hasta el día 14, cada 12
horas para mantener niveles constantes de hormona
9. SINCRONIZACIÓN DE CELOS EN VACAS
RECEPTORAS
Al utilizar el método de implante en la oreja, lo debemos retirar 48
horas antes de que la donadora entre en calor. Es muy importante
recordar que al utilizar prostaglandinas, la dosis de la receptora se debe
inyectar más menos 24 horas antes de la dosis de las donadoras.
10. La inyección de prostaglandina debe ser puesta a las receptoras, el día
12 del ciclo de la donadora.
Entre las 10a.m - 2p.m, para así lograr que las donadoras y las
receptoras presenten celo a la misma hora, o por lo menos aproximar
lo máximo posible los celos
11. TÉCNICA DE COLECCIÓN DE EMBRIONES
Se coloca la donante en un potro de sujeción
y las heces son evacuadas del recto. El
número de cuerpos lúteos (CL)
Si es necesario colocar anestesia epidural
(Lidocaína al 2%) de 5-10ml.
Se lava la región perineal y labios vulvares
con agua y jabón desinfectante y se seca el
área.
La cola se amarra a un costado de la donante.
12. Al catéter se le introduce un estilete
metálico, se le coloca un lubricante
estéril soluble en agua y se introduce a
través de vagina y cérvix.
Una vez pasado el cérvix el catéter es
llevado directamente a uno de los
cuernos.
Es recomendable seguir siempre la
misma rutina, para evitar errores, por
lo que empezaremos siempre por el
mismo cuerno, y una vez lavado
pasaremos al otro.
13. Una vez colocado en el cuerno, el
estilete es retirado 2 ó 3 cm y el catéter
es empujado suavemente.
El balón es inflado inicialmente con 5 ml
de suero salino o aire, hasta que se
sienta sujeto en el lumen uterino.
El estilete es entonces removido
totalmente y se coloca una pinza en el
extremo posterior de la vía del balón del
catéter, para evitar que este se desinfle.
14. RECUPERACIÓN DE EMBRIONES
Recuperación por gravedad con
circuito cerrado flujo continuo
La sonda se coloca en el cuerno uterino que vamos a
lavar.
La cantidad de PBS que se ha de introducir cada vez
es diferente según la colocación que hemos realizado.
15. Hay que tener permanentemente la mano introducida en el recto para saber
cuándo se ha llenado el cuerno uterino e interrumpir la entrada de PBS.
Se calcula la cantidad de PBS que cabe en el extremo distal del cuerno y se va
introduciendo con una jeringa, recuperándolo por gravedad.
16. Búsqueda y manipulación de los Embriones
El medio de colección se deja sedimentar en una probeta de 500 ml por 20-30
minutos, después de finalizada la colección.
El sobrenadante se extrae por aspiración hasta que el medio baje hasta la marca
de 50 ml.
Lo que queda en la probeta se coloca dentro de placas de Petri estériles y
descartables (100 x 15mm) y se busca con un aumento de 10X.
Se pasa el sobrenadante (450 ml) por un filtro de plancton de 50 μm como paso
final para recuperar cualquier óvulo o embrión que haya quedado.
17. Se puede filtrar directamente todo el medio de colección utilizando filtros
descartables estériles.
Finalizado el filtrado se lava el filtro con PBS utilizando una jeringa y aguja fina (22
G) y el fluido de lavado es colectado en una placa de Petri estéril para proceder a
la búsqueda de los embriones.
Para mayor seguridad cada placa se repasa por dos veces más, después de
encontrado el último embrión.
18. EVALUACIÓN Y SELECCIÓN DE EMBRIONES
Forma esferoide
Simetría de los blastómeros
Apariencia clara y neta de los blastómeros.
Tonalidad oscura y uniforme
Uniformidad de la membrana celular
Proporcionalidad entre el embrión y el espacio perivitelino.
Integridad de la zona pelúcida
Ausencia de vacuolas en el embrión y bridas celulares en el espacio perivitelino
Ausencia de detritus celulares adheridos a la zona pelúcida
Compactación de los blastómeros entre sí.
19. Mórula temprana. Dia 5 Mórulas compactas. Dia 6
Blastocistos tempranos. Dia 7 Blastocistos. Dia 7
Blastocistos exp protuyendo.
Dia 8
Blastocistos expandidos. Dia 8-9
Blastocistos protruido. Dia 8-9
Blastocisto protruido, día 9-10 y embrión
degenerado
21. PROCESO DE CONSERVACIÓN DE
EMBRIONES
Refrigeración
La refrigeración es un método simple por
medio del cual pueden mantenerse
embriones a temperaturas entre 0 y 4 ºC
durante 24 a 72 horas.
La refrigeración se efectúa vehiculizando los
embriones en PBS envasados en pajuelas de
0,25 ml y colocadas en un refrigerador.
Se han obtenido porcentajes de preñez que
oscilan entre el 44 y el 50%.
22. Congelación
Es la técnica de elección para conservar
embriones in vitro.
Se considera que los embriones pueden ser
mantenidos a -196ºC, sin afectar su viabilidad y
sin causarles cambios genéticos.
Cuando se congelan embriones de calidades muy
buena y buena (grado I y II) se obtienen mejores
resultados que cuando se congelan aquellos de
calidad regular (grado III).
La viabilidad embrionaria disminuye
significativamente cuando dicho período es
mayor de 3 h.
23. DESCONGELADO DE EMBRIONES
El calentamiento se consigue introduciendo la
pajuela congelada en agua a 37° durante algunos
minutos.
Seguidamente vamos a eliminar el crioprotector
antes de la transferencia, que consiste en utilizar
las propiedades de un medio de sucrosa, que no
penetra en la célula, pero aumenta la presión
osmótica del medio.
El embrión ya puede ser transferido en el útero de
la receptora mediante catéter de implantación
especial para embriones.
24. TRANSFERENCIA DE EMBRIONES (receptoras)
Se recomienda realizar una anestesia epidural (Lidocaina 2%, 4-7 ml) en hembras
receptoras, si esta es muy nerviosa.
Realizar el vaciado del recto, lavar y secar la vulva y la zona perineal.
Se introduce la vaina con la pajuela que contiene el embrión deseado en la
vagina, sin tratar de topar los labios vulvares.
Una vez pasé el cérvix se llevará hasta el cuerno elegido para depositar la dosis
en la curvatura anatómica que este realiza.
25. Se deberá tomar suavemente el cuerno y presentarlo frente a la
punta del instrumento.
Se fija el cuerno uterino, estirándolo y empujando ligeramente la
vaina hacia craneal.
La operación debe repetirse introduciendo la vaina en el cuerno lo
necesario para superar la línea transversal que establece el ligamento
ancho y tan profundamente como sea posible sin resistencia alguna,
asegurando que el orificio de salida no quede obstruido por la pared
del cuerno.
