Comparación entre dos modelos y su regulación del calcio intracelular

1. MOTILIDAD Y VIABILIDAD DE ESPERMATOZOIDES,
COMPARACIÓN DE MODELOS DE MAMÍFEROS Y PECES
(Motility and viability of sperm, models of mammalian and
fish comparison)
Jorge Parodi
jparodi@uct.cl
http://nucleo-nipa.uct.cl/

2. Temas
• Viabilidad
• Motilidad y acrosoma
• Estamos explorando
Corrientes
Xenobioticos

3. Cuevas et al 2013
Ren & Xia 2010
Martínez et al 2014, enviado

4. Semen colection
Refrigeration
.AVI
Video conversion Video Capture
Activation of
sperm
Video Editing Analysis with CASA Results
Guerra et al 2014

5. D E
Control Activated
600
400
200
0
*
VCL
% of control
Control Activated
500
400
300
200
100
0
*
VSL
% of control
Martinez et al 2014, enviado

6. A
B
Control 3 days 20 days
2 μm
C
0 2 4 6 8 10 12
120
80
40
0
* * * * * *
Days
Live cells
% of control
* * * *
0 2 4 6 8 10 12
120
80
40
0
Days
Total Motility
normalized (%)
Martínez et al 2014, enviado

7. Fluorometria de Calcio
(Medicion no cuantitativa)
ROI
Intensidad
Promedio Intensidad

8. Day 1
A B
Day 20
5 μm
* * * * *
0 2 4 6 8 10 12
120
80
40
0
Days
Calcium Relative Fluorescence Unit
% of control
Martínez et al 2014, enviado

9. Control
Post activation
Aging
5
4
3
2
1
1.5
1.0
0.5
0.0
*
*
A B
Calcium Relative Fluorescence Unit
% of control
Activated
II Activated
Zero calcium
Activated
C D
Control
Activated
Activated II
0
*
Calcium Relative Fluorescence Unit
% of control
5 *
Control
zero calcium
Calcium add
4
3
2
1
0
*
Calcium Relative Fluorescence Unit
% of control
Martinez et al 2014, enviado

10. Parodi 2014
Ren & Xia 2010
Wennemuth et al 2000

11. Navarrete et al 2010

12. C D
Control
4 hrs
150 Calcium
Control
2 hrs
4 hrs
6 hrs
100
50
0
without Calcium
*
*
Viability
% of control
4 hrs/not calcium
Martínez et al 2014, enviado

13. A B
150
100
50
Calcium
Calcium recovery
*
*
*
-2 0 2 4 6 8
Total Motility
normalized (%)
150
100
50
Control Calcium add
100
80
60
40
20
0
Progresive Motility
normalized (%)
Control
4 hrs
Without Calcium
4 hrs calcium add
0
*
*
Total Motility
normalized (%)
C
Martinez et al 2014, enviado

14. 150 Calcium
Control
2 hrs
4 hrs
6 hrs
100
50
0
Without Calcium
* *
Intact Acrosomes
normalized (%)
Control Calcium add
150
100
50
0
VCL
% of control
Control Calcium add
100
80
60
40
20
0
VSL
% of control
Calcium W/Calcium
A
B
C D
Martínez et al 2014, enviado

15. Parodi &Martínez-Torres 2012

16. Parodi et al 2008

17. Didymo, como Xenobiotico

18. Escudero et al 2014, en preparación

19. Escudero et al 2014, en preparación

20. 400
300
200
100
0
Fresh
Dry
Fresh plus extend extraction
0,1gr 1gr 10gr
Didymo extract
Dry 168hrs
Pholyphenols (ppm)
Escudero et al 2014, en preparación

21. Discusión
Viabilidad
Motilidad
Calcio
Acrosoma
Onda de Calcio
No móvil
Alta Viabilidad
Regulación del Calcio
Función

22. Agradecimientos
Dr. Fernando Romero, UFRO
Dr. Ataulfo Martinez-Torres UNAM
Dr. Alfredo Ramirez, UACH
Fondo MECESUP 0804
Asistencias Técnicas 278-2450 AVIMEX
278-2532 Tonalli Ltda
278-2472 EcoHyd
Laboratorio de Fisiología de la Reproducción
Guillermo Guerra
M.V. Pamela Olivares
Colaboradores
Dr. Alexander Ortloff
Dr. Ivan Valdevenito, BIOACUI
http://www.facebook.com/LaboratorioDeFisiologiaDeLaReproduccionLfr

23. Medición Reposo Diluido Activado
Potencial M -7,6 mV 35 mV 21 mV
Peq Ion Reposo Diluido Activado
Sodio 36 mV 36 mV 35 mV
Potasio 4,8 mV 93 mV -160 mV
Cloruro -8 mV 16 mV 16 mV

24. Materiales y Métodos
Condiciones iniciales y valorización de los protocolos

25. Resultados

26. Resultados

27. Resultados

28. Resultados

29. Resultados
Author % Motile VCL (μm/s) VAP (μm/s) VSL (μm/s) Spices
Present study 68 ± 4 122 ± 7 107 ± 7 63 ± 6 Salmo salar
Dziewulska, A.
Rzemieniecki and J.
Domagala, 2011
178,4 ±
63,6
155,7 ±
58,6
114,8 ±
72,9
Salmo salar
Lahnsteiner F. et al 2005 91,4 ± 20,8
Onchorhynchus
mykiss
Wilson-Leedy J. and
Ingermann R. 2007
90 ± 6 104 ± 9 77 ± 15 66 ± 17 Danio rerio