El documento describe una maqueta del equipo Nanodrop 2000. El Nanodrop permite realizar medidas de espectrofotometría con solo 1-2 μl de muestra sin necesidad de cubetas. La maqueta incluye las partes principales del equipo como el pedestal inferior, el brazo, la pantalla con el software y una micropipeta.
Informe de la elaboracion de la maqueta delequipo nanodrop
1. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA AMBIENTAL
MAQUETA DEL EQUIPO NANODROP
ASIGNATURA : Biotecnologia Ambiental
DOCENTE : Dr. HEBERT HERNAN SOTO GONZALES
ESTUDIANTE Estrella Janet Platero Sosa
CICLO : VII
Noviembre, 2020
ILO-PERU
2. I. EQUIPO NANODROP 2000
1. FUNCIONAMIENTO
Este equipo permite realizar medidas de espectrofotometría en un amplio rango de longitudes de
onda (220-750 nm) con gran exactitud y reproducibilidad, sin necesidad de emplear cubetas. Tan
sólo requiere un volumen de muestra de 1-2 μl y gracias a su pequeño tamaño y fácil manejo
permite medir un gran número de muestras en poco tiempo.
Su funcionamiento se basa en el empleo de un sistema de retención de muestra que aprovecha la
tensión superficial para formar un puente de líquido entre el pedestal inferior y un pedestal
superior. En los espectrofotómetros NanoDrop el pedestal superior es el extremo de una fibra
óptica conectada a una fuente de emisión de Xenon.
Ambos pedestales definen un preciso y estrecho paso óptico cuya longitud varía automáticamente
con la concentración de la muestra, permitiendo hacer mediciones en un rango muy amplio de
concentraciones sin hacer diluciones. Esta característica lo hace idóneo para determinar la
concentración y pureza de los ácidos nucleicos.
2. SOFTWARE
El software asociado al equipo incorpora una serie de aplicaciones específicas para el tipo de
medidas que se desee realizar (concentración de ácidos nucleídos a 260 nm y su pureza usando la
relación 260/280, concentración de proteínas a 280 nm, muestras a las que se haya aplicado el
método de Bradford, Pierce, Lowrry, BCA, cuantificación de marcajes fluorescentes, etc).
- Seleccionar el tipo de ensayo (ADN, microarreglo, proteína, cultivo celular).
- El equipo hace una verificación de las corridas anteriores y realiza un checkeo del sistema
de medición de longitudes de onda
3. 3. MEDICION DE CONCENTRACION DE UNA MUESTRA
Para medir la concentración de una muestra se han de seguir los siguientes pasos:
1. Levantar el pedestal superior.
2. Depositar el volumen de muestra requerido en el pedestal inferior empleando una
micropipeta. Se recomienda emplear los siguientes volúmenes en función del tipo de
muestra:
Soluciones acuosas de ácidos nucleicos: 1μl
Proteínas purificadas: 2μl
Método de Bradford, BCA o Lowry: 2μl
Suspensiones celulares: 1-2 μl
3. Cerrar el pedestal superior e iniciar la medida espectral empleando el software asociado al
equipo.
4. Se debe leer un blanco que debe ser la misma mezcla en la que este disuelta la muestra
5. Indicar el nombre de la muestra y dar click en el botón de measure (lectura).
4. 6. Los valores leídos se almacenan en una hoja de datos que se muestra en la parte inferior
de la pantalla con el nombre de la muestra, los valores de las lecturas y la fecha.
4. LIMPIEZA Y DESINFECCIÓN
Limpieza de los pedestales superior e inferior con papel convencional de laboratorio entre
muestras para evitar contaminaciones cruzadas. No es necesario lavar entre muestras, ni siquiera
con diferencias de concentración de tres órdenes de magnitud.
Aunque no es necesario, se recomienda limpiar los pedestales con una alícuota de 2μl de agua
desionizada tras medir muestras muy concentradas.
Tras medir un gran número de muestras, se recomienda limpiar exhaustivamente las zonas
colindantes a la superficie donde se deposita la muestra para evitar posibles contaminaciones en
muestras muy diluidas.
5. II. ELABORACION DE LA MAQUETA
2.1.MATERIALES
- REGLA DE 30 CM
- SILICONA LIQUIDA
- LAPICERO
- TIJERA
- 3 FOLDER MANILLA
- 3 PIEZAS DE TECNOPOR
- 7 HOJAS USADAS.
- CINTA
- 1 CUCHILLO CON DIENTES
- TEMPERAS ROJO Y BLANCO
2.2.METODOLOGIA
ELABORACION DE LA MAQUETA
Primero se unió con cinta las hojas A4
usadas, y se trazó la medida 40x40 cm,
esto nos sirve para calcular nuestras
medidas de la maqueta y para no dañar
la mesa.
Se cortó con cuchillo el tecnopor del
tamaño del que era más pequeño, que
tenía una medida de 33 x 18 cm y de
altura 16.5 cm. Luego se unió con cinta
las tres piezas.
Se cortó el folder manilla en 4 piezas con
las medidas de 16.5 y de largo 33cm para
luego pegarlo a los costados del tecnopor
para tapar los huecos.
6. Luego se cortó una pieza de tecnopor
para dar forma al brazo del equipo, se
foro con folder manilla también.
Se realizó un soporte para el brazo para
darle forma y se dibujó un círculo, donde
estará pedestal inferior se utilizó
tecnopor y se pegó con silicona.
Luego se pintó con tempera blanca y se
usó lapicero para pintar el circulo o
plumón, también para trazar la palabra
NANODROP 2000 y se utilizó tempera
roja en las letras “Thermo”.
Se corto con el cuchillo 2 piezas de
Tecnopor uno para soporte y otro para la
pantalla y se foro con folder manilla, y se
pintó de color blanco.
7. Luego para la micropipeta se enrollo un
trozo de papel, y lo pegamos con silicona,
le damos la forma tiene dos partes, luego
en la otra se hizo un cilindro con papel,
para el soporte.
Se unen ambas partes de la micrpipeta,
también se etiqueta con su nombre y le
dibujamos algunos detalles con lapicero
como 0.5 a 1 ul.
También se imprimió el inicio del
programa para la pantalla y se realizó un
soporte donde se pegó con silicona.
Finalmente se etiqueta las partes del
equipo y el soporte de la pantalla se foro
con hojas blancas ya usadas.
9. IV. CONCLUSIONES
El NANODROP es eficaz y rápido en cuantificar los ácidos nucleicos DNA y ARN, como también
proteínas. Es importante en la investigación para diagnósticos por ejemplo para una vacuna,
también por ejemplo en cuantificar y clasificar cianobacterias por su clorofila-a.
Se cuantifica para realizar una técnica, lo cual necesitamos saber cuánto material tenemos, se
debe tener una cuantificación precisa.
La cuantificación de ácidos nucleicos por espectrofotometría ha sido ampliamente utilizada, pues
permite mediciones en un amplio rango de concentración, evitando la necesidad de realizar
diluciones. Sin embargo, no es un método completamente específico, pues puede medir
nucleótidos que se encuentren dispersos o incluso hebras de DNA.
Es importante saber su uso, y mantenimiento del equipo para que nos de las medidas exactas y sin
contaminantes.
V. BIBLIOGRAFIA
- IdiPaz.NanoDrop ND 1000.
https://www.idipaz.es/ficheros/files/Que%20es/2015/NANODROP(2).pdf
- Red de Apoyo a la investigación.(2015) Mnual de uso del espetrofotometro NanoDrop
2000c Thermo Scientific.http://rai.unam.mx/manuales/lgen_manual-de-
uso_Nanodrop.pdf
- LABINCO.S.A. Clorofila-a (cianobacteria) por NANODROP ONE.
https://www.pinterest.com/pin/693413673858281745/
- NanoDrop One. http://tools.thermofisher.com/content/sfs/manuals/3091-NanoDrop-
One-User-Guide-v1.3-sw-SPANISH.pdf