secuenciación automática de ADN

1. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA
ESCUELA PROFESIONAL
DE INGENIERIA AMBIENTAL
CURSO:BIOTECNOLOGÍA
INTEGRANTE:
 MORALES QUISPE,LETICIA INES
DOCENTE:
 Dr. SOTO GONZALES,HEBERT HERNAN
SECUENCIACION DE ADN AUTOMATICO
(METODO DE SANGER)

2. ¿Qué es ?
Secuenciación del ADN
Es un conjunto de técnicas bioquímicas cuya finalidad es
la determinación de nucleótidos de adenina, citosina
guanina y timina. En un Oligonucleótido de ADN, También
constituye la información genética heredable de los seres
vivos.
Existen varios métodos de secuenciación de ADN. Las
cuales cumplen diversas funciones, desde conocer cómo
ocurren los procesos biológicos fundamentales, Investigar
las mutaciones somáticas, hasta Identificar y cartografiar
hasta aproximadamente 20 a 25 mil genes que compone
el genoma humano.

3. Sistema integrado para generación automática de clusters de ADN por amplificación en puente, secuenciación y análisis primario y secundario de
secuencias. Posee un servidor para almacenamiento de datos, sistema con pantalla táctil y computadora integrada (para análisis de datos en el
equipo).
Capacidad de generación de datos hasta 15 Gb. Análisis de secuencias (on-instrument) en menos de 2 hs, excepto para la aplicación de
Metagenómica del 16S. Lectura paired end con calidad esperada de Q30 para más del 70% de las bases llamadas en la secuenciación de
fragmentos de 600pb, 75% para fragmentos de 250pb, 85% para fragmentos de 75 bp, 80 % para fragmentos de 150 bp, 90% para fragmentos
menores (25, 36 y 100 pb).
APLICACIONES:
 Secuenciación de genomas pequeños
 Secuenciación de novo. Re-secuenciación
 Plásmidos. Re-secuenciación dirigida: Secuenciación de amplicones
(centenas de blancos).
 Captura de regiones de interés Metagenómica del 16S Chequeo de
clones.
 Secuenciación de ARN: RNA-Seq Secuanciación de smRNA.
 Secuenciación de paneles prediseñados
 Control de calidad de bibliotecas genómicas: Control de calidad para
secuenciación en HiSeq Regulación: ChIP-Seq.
 Otras: Genotipificación por secuenciación (reducción de complejidad
de genomas de mayor tamaño)

4.  Cartones
 Plumones
 Temperas
 Laptop
 Cartulina
 Caja de metal
 Velitas de vidrio
 Tijeras
 Silicona
 Lapicero negro
 Cinta negra
 Cinta
 Cinta de agua
 Tecnopor

5.  Se realizó el molde del secuenciador automático (sistema Miseq-15 Gb)
de 40 cm de altura y 60 de ancho.
 Seguidamente se pegó los lados con silicona dándole forma al equipo
 Se le pega encima del molde con cartulina negra
 Se le coloca la pantalla del equipo y también la parte de abajo se le pone
un tecnopor pintado de plomo.
 Sus partes del equipo se isieron de una caja de reloj la cual se le pinto de
color negro y después de secar se le paso con blanco, pero de forma de
líneas.
 Utilicé lata de reloj de color negra puse dentro de ella tecnopor y di un
espacio para colocar el velero de recordatorios la cual se sacó todo lo
que contenía dentro para tomarlo para las muestras.
 Lugo diseñe el método de sanger mediante dibujos y paso a paso, así
mismos se pintó con temperas cada dibujo. Se pega todos los dibujos en
una cartulina para poder explicarlo y se enumera cada paso con hojas
celestes.
 Diseñe un cuadrado de 15 * 15 que será nuestra Pc que recibirá los
resultados del secuenciador.
 Se le pinto sus lados de color negro y seguidamente se dibujó secuencias
de ADN.

8. MAQUETA

9. Proceso biológico de la replicación del ADN junto
con el empleo de diodeoxi de nucleótidos.
Esta técnica emplea didesoxinucleótidos (ddATP,
ddGTP, ddCTP, ddTTP) que carecen del grupo
hidroxilode carbono 3, que al unirse una cadena
de DNA en crecimiento impiden que esta se
continúe elogando.
En la reacción normal se usan los
desoxinucleótidos dATP-dGTP- dCTP- dTTP.
En 1975, Frederick Sanger desarrolló el
método de secuención del ADN.
Esto ocurre por que la cadena polimerasa
necesita un grupo terminal 3 OH . Sin
embargo a la deslilición que se incorpora
carece de ese grupo.

10. Arroja secuencias de alta calidad para hacer menos
relativamente las secuencias de ADN. La técnica
suele usarse para secuenciar fragmentos de ADN
como los plásmidos o ADN copiados de un PCR.

14. Como conclusión es importante mencionar que el análisis de la
estructura del ADN y de su papel en la expresión genética se ha visto
facilitado por el desarrollo de poderosas técnicas para la secuenciación de
moléculas de ADN.
La clave para la secuenciación del ADN es la generación de
fragmentos de ADN cuya longitud depende de la última base de la
secuencia.

15. Este es un método que ha sido utilizado como método alternativo a otros
métodos debido a su utilil procedimiento el cual se lleva a cabo a través de 4
mezclas simultáneas. En cada mezcla se utiliza un ADN polimerasa para
sintetizar la hebra complementaria a una secuencia concreta perteneciente a una
molécula de ADN de hebra sencilla.
Se puede generar conjuntos de fragmentos de este tipo mediante la
interrupción controlada de replicación lo cual se lo conoce como método de
sanger, debido qué es un método desarrollado por el bioquímico Frederick
sanger y sus colaboradores este método se basa en el empleo de dióxido
nucleótidos que carecen del grupo hidroxilo del carbono 3 de manera que
cuando uno es nucleótidos se incorpora a una cadena de ADN en crecimiento,
la cadena ya no puede elongando.