El documento es un tutorial sobre el uso del espectrofotómetro Beckman-Coulter DU 800, incluyendo requisitos de sistema, encendido, acceso al software, y rutinas de diagnóstico. Se detallan los procedimientos para realizar diferentes tipos de análisis, como barridos y cinéticas, así como la lectura de ácidos nucleicos y opciones de guardado de datos. También se ofrecen indicaciones para la correcta preparación y limpieza de las celdas de lectura antes de realizar experimentos.

1. Universidad Nacional Autónoma de México.
Facultad de Estudios Superiores Cuautitlán.
Tutorial: Manejo de
espectrofotómetro BeckmanCoulter ® DU 800
Elaborado por: Q.F.B. Isboset Gabriel
Núñez Luna

2. Requerimientos
• El espectrofotómetro Beckman-Coulter ® DU
800 requiere del sistema operativo Windows
XP.

3. Encendido
• Encender el interruptor de la parte trasera del
equipo.
• Revisar el interior del espectrofotómetro.
• Remueva cualquier pelusa, polvo o partícula
extraña con microfibra o tela que no deje
residuos.
• El equipo debe encenderse por lo menos 5
minutos antes de utilizar el software
controlador.

4. Acceso al software
1. Dar clic en la barra de Inicio  Seleccionar
DU 800 Spectrophotometer Dar doble clic
con el mouse o pulsar la tecla “Enter”
2. Dar clic en el acceso directo que dice DU 800
Spectrophotometer.

7. Antes de realizar cualquier ensayo
• El software cuenta con una rutina de diagnóstico
previo del aparato.
• Esta rutina no dura más de 5 minutos.
• Se evalúa funcionamiento de los focos,
monocromador, detectores, etc.
• Una vez finalizado, dar clic en el botón
“Continuar/Continue”

8. Antes de realizar cualquier ensayo 2
• Encender las lámparas
UV/VIS dando clic sobre los
botones “Visible” y “UV”
• La lámpara UV tarda de 30 a
60 segundos en encender.
• Después del encendido, hay
que permitir un tiempo de
“espera” de no más de 5
minutos para que el
funcionamiento de los focos
sea óptimo.

9. PROCEDIMIENTO GENERAL DE
EJECUCIÓN

10. Funciones disponibles en el espectrofotómetro
Beckman-Coulter ® DU 800.
• Longitud de onda fija.
• Barrido (Escaneo/Sondeo
de longitud de onda)
• Cinética/Tiempo
• Análisis de un solo
componente.
• Análisis de ácidos nucleicos.
• Validación de desempeño

11. • Antes de realizar cualquier lectura en el
espectrofotómetro, se debe utilizar un
blanco.
• Este puede ser agua destilada, todas las
especies químicas de un sistema menos el
analito etc.
• Limpie su celda de lectura con sumo cuidado,
no dejando pelusas, grasa o similares sobre el
lado traslúcido.
• Coloque la celda, de manera que el lado opaco
quede orientado hacia Ud.
• Presione el botón BLK para iniciar el proceso.
• Durante la lectura del blanco, el botón de STOP
parpadeará hasta la finalización de la tarea.

12. • Después de haber realizado la lectura del
blanco, continúe
su experimento
oprimiendo el botón “GO Scan” y
midiendo los sistemas que tenga listos
para evaluar.

13. BARRIDO
Indicaciones generales

14. 1.
2.
3.
4.
Seleccionar
opción
“Wavelength Scan” de la barra
de opciones.
Enseguida,
aparecerá
una
pantalla
con
una
hoja
cuadriculada. En esta cuadricula
se observará el comportamiento
del barrido.
Para especificar las condiciones
del barrido, nos dirigimos a la
opción “Methods” que se hallar
en la barra de menú.
Aparece una serie de opciones y
damos clic en la opción
“Create/Edit Method”.

15. Rango de
lectura (nm)
Selección de
Absorbancia o
Transmitancia.
Velocidad de lectura
Otros

17. LONGITUD DE ONDA ÓPTIMA
Indicaciones generales

18. 1.
2.
3.
Seleccionar
opción
“Fixed
Wavelenght” (Longitud de onda
fija) de la barra de opciones.
Para especificar las condiciones
del barrido, nos dirigimos a la
opción “Methods” que se hallar
en la barra de menú.
Aparece una serie de opciones y
damos clic en la opción
“Create/Edit Method”.

19. •
Al igual que el barrido, cuenta
con la opción de selección de %
de
transmitancia
y/o
absorbancia. (1)
• También cuenta con ajuste de
cálculos, incluso pudiendo ya
efectuar
la
cuantificación
introduciendo una formula o
multiplicando
por
factores
numéricos. (2)
• Puede leer hasta en 12 longitud
de onda diferentes. Sin embargo
considere que a mayor cantidad
de longitud de onda, el tiempo de
lectura de muestra es mayor.(3)

21. CINÉTICAS
Indicaciones generales

22. 1.
2.
3.
4.
5.
Seleccionar
opción
“Kinetics/Time” (Longitud de
onda fija)
de la barra de
opciones.
Para especificar las condiciones
del barrido, nos dirigimos a la
opción “Methods” que se hallar
en la barra de menú.
Aparece una serie de opciones y
damos clic en la opción
“Create/Edit Method”.
Aquí se puede especificar la
longitud de onda analítica y la
de fondo. (1)
Número de muestras, intervalo
de tiempo entre cada lectura,
tiempo
total
y
factores/unidades. (2)

24. Análisis de ácidos nucleicos
• En técnicas de Biología molecular es importante
determinar la cantidad de material genético
(DNA/RNA).
• En caso de que no hallarse suficiente cantidad de
alguno, ciertos métodos podrían verse comprometidos
en su ejecución (PCR) e indicarían problemas de
preparación de muestra o adición de reactivos.
• La longitud de lectura óptima para cuantificar RNA es
de 280 nm y para DNA es de 260 nm. Valores
decrementandos nos pueden indicar baja pureza de
los materiales extraídos.

25. • Dado que se trata del análisis de analitos muy específicos, en realidad no hay que
hacer muchos ajustes.
• Se encuentra en la pantalla 5 columnas: la primera es el nombre y número de
muestra, la segunda es la absorbancia de DNA a 260 nm, la tercera es la
absorbancia de RNA a 280 nm, la cuarta es la proporción que existe entre
DNA/RNA y la última es la proporción entre RNA/DNA.

26. GUARDADO
• Existen dos modos de guardar el trabajo
(barridos, curvas, etc.) con el programa.
• Una de ellas es directa y la otra
exportando la información.

27. Exportando la información.
• El programa crea una
hoja de calculo con las
terminaciones .xls o .csv
(dependiendo
del
análisis efectuado).
• Esta hoja de calculo
puede ser consultada
sin necesidad de abrir el
programa directamente.

28. • De clic en barra de
menú
“Tools/Herramientas”.
• Seleccionar la opción
“Data Export”.
• En seguida, aparecerá
un cuadro de dialogo
para
que
especifiquemos
la
ubicación de guardado
del archivo.

29. Guardado directo
• Se genera un archivo de
terminación .dux que
sólo puede ser abierto
desde
el
mismo
programa
del
espectrofotómetro.
• En
ocasiones
este
almacenaje resulta más
ventajoso para algunas
tareas (Ej. Barridos)

30. • De clic en el botón “Save
file/Guardar archivo”. (1)
• Igualmente, aparecerá un
cuadro de dialogo para
especificar la carpeta de
almacenaje.
• Para abrir los archivos en
formato .dux, seleccione la
opción de “Open file/Abrir
archivo” (2)
• Emergerá un cuadro de
dialogo donde se puede
seleccionar el archivo a
abrir.