Informe de elaboración de una maqueta de electroporador

1. ELABORACIÓN DE LA
MAQUETA DE UN
ELECTROPORADOR Y
CUBETAS PARA BACTERIAS
ELABORADO POR:
María Fernanda Lima Totocayo
CURSO:
Biotecnología
DOCENTE:
Dr. Heber Hernan Soto Gonzales
UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL

2. La electroporación consiste en provocar un aumento
significativo de la conductividad eléctrica y la permeabilidad
de la membrana plasmática celular mediante un campo
eléctrico aplicado externamente, como forma de introducción
de diferentes sustancias en células.
¿QUÉ ES LA
ELECTROPORACIÓN?

3. 19701960Siglo XVIII
Se observaron manchas
rojas en la piel de
humanos en las áreas
donde se aplicaron
campos eléctricos. Una
vez se entendió la causa y
se logró el control de los
parámetros que lo
producen, se observó una
rápida adopción del uso
de campos eléctricos para
matar microbios de
alimentos y agua.
Se sabía que aplicando un
campo eléctrico externo,
se podía crear un gran
potencial de membrana
en los dos polos de una
célula.
Se descubrió que cuando
un potencial de
membrana alcanzaba un
nivel crítico, la membrana
se rompería y podría
recuperarse.
1980
Esta apertura se estaba
utilizando para
introducir varios
materiales / moléculas
en las células. Empleado
para transformar células
vivas/transfectar con
ácidos nucleicos
circulares o lineales.
1982
Los primeros en acuñar el
término electroporación
fueron Neumann y sus
colaboradores.
Describieron la ruptura de
la membrana por el uso
de campos eléctricos
pulsados e introdujeron el
uso de electroporación
reversible para la inserción
de genes en las células.
EVOLUCIÓN

4. En este proceso las bacterias
ingieren ADN extraño y luego lo
amplifican o clona. Emplean pulsos
de campo eléctrico de alta tensión
para crear poros en la membrana
celular bacteriana, a través del cual
puede pasar el ADN o plásmido.
FUNCIONAMIENTO DE UN ELECTROPORADOR

5. EL
PLÁSMIDO
Es un pequeño círculo, pieza
extracromosómica del ADN que actúa como
vector, es un portador de la secuencia
específica de ADN.

6. PRINCIPIOS DE LA
ELECTROPORACIÓN

7. La electroporación utiliza un
dispositivo especializado, llamado
electroporador. Normalmente las
celdas se colocan en una cubeta de
electroporación, que hacen contacto
con la máquina una vez insertada.
Las células bacterianas insertadas mezcladas con el
ADN se cargan en la cubeta y en un campo
eléctrico, del orden de los mil a diez mil voltios por
centímetro. Se aplica durante unos milisegundos.

8. Esto provoca que el voltaje, a través de
la membrana alcance de 0,5 a 1 voltios,
lo que se cree conduce a un
reordenamiento de la bicapa de
fosfolípidos que comprende la
membrana celular, como la que
formarán los poros.
En este estado, el ADN del plásmido pasará a través
de la membrana y cuando la pulsación se completa,
la bicapa se repara sola.
1 2
3 4

9. Una vez que la bacteria plásmida ha sido absorbida, puede
crecer en placas de agar que contienen antibióticos.

10. M
A
T
E
R
I
A
L
E
S

11. M
A
T
E
R
I
A
L
E
S
Nombre del
material
Imagen
Nombre del
material
Imagen
Cartón Goma en barra
Cinta adhesiva
Tubos de papel
higiénico
Tijera y cutter Botella de plático

12. M
A
T
E
R
I
A
L
E
S
Nombre del
material
Imagen
Nombre del
material
Imagen
Papel de regalo Pistola de silicona
Bolsa de plástico
(Gris)
Hojas recicladas
Espuma para
embalaje o
tecnopor
Regla graduada

13. PROCEDIMENTO
Equipo
Relleno
Soporte
Cubeta
Características
Resultados

14. Relleno
Soporte
Cubeta
Características
Resultados
RECORTAR 5 PIEZAS DE CARTÓN
• 26.7 cm x 12 cm (X2)
• 14.5 cm x 19.3 cm
• 10.5 cm x 19.3 cm
• 19.5 cm x 21.5 cm
TRAZAR EL MOLDE A CADA PIEZA
• A partir de la unión de
puntos a determinadas
distancias.
Equipo

15. Relleno
Soporte
Cubeta
Características
Resultados
UNIÓN DE LAS PIEZAS
• Con cinta adhesiva se
procedió pegar las 3
piezas, las de la misma
medida irán en los
laterales y la pieza de
14.5 x 19.3 cm irá
adelante.
TUBOS DE PAPEL HIGIÉNICO
• Se cortarán por la
mitad, y trazaremos 2
rectángulos de 10.5 x 3
cm. Posteriormente,
recortaremos.
Equipo

16. Equipo
Relleno
Soporte
Cubeta
Características
Resultados
UNION DE LA
CUARTA PIEZA
• Con las tiras de
carton del tubo de
papel higiénico,
uniremos la cuarta
pieza.
• Por ultimo, se
colocará la ultima
pieza recortada en
la parte superior,
sienda esta la tapa
del equipo.
* Este paso se
realizará despues de
colocar el relleno.

17. Equipo
Relleno
Soporte
Cubeta
Características
Resultados
ESPUMA DE EMBALAJE
• Deberá tener una
medida de 19.3 x 26.7
cm.
19.3 cm
26.7 cm

18. Equipo
Relleno
Soporte
Cubeta
Características
Resultados
• Luego, en un cartón
más grueso, se
recortará un rectángulo
con las medidas 12.8x7.8
cm.
12.8 cm
7.8 cm
• Se introducirá esta
pieza en el orificio que
se realizó, y se marcó la
curvatura de la parte
delantera.
• Posteriormente se
adecuará la forma, a la
de la pieza original del
equipo.

19. Equipo
Relleno
Soporte
Cubeta
Características
Resultados
• Se recortará esa pieza, así
como tiras de cartón
delgado de 2.5 cm de ancho.
Las tiras se pegaran al borde
de la pieza principal, dejando
un margen de espacio a cada
lado.
• Se cortará una tira con
8.5 cm de ancho y 2.5
cm de alto. Y se harán 3
divisiones, como se
observa en la imagen.
• Con la ayuda de dos
cuadrados de cartón delgado.
Uno de 4x4 cm y otro de
2.5x2.5 cm, se realizará un
cajoncito pequeño que irá
pegado en la parte inferior de
última pieza realizada.

20. Equipo
Relleno
Soporte
Cubeta
Características
Resultados
• Para la elaboración de las
cubetas para bacterias,
emplearemos una botella de
plástico. Para esto, se buscará la
parte mas lisa que tenga la
botella y a partir de esa, se
cortan 4 tiras de 2.3x6.5 cm.
• Estas pequeñas piezas, serán
pegadas con cinta adhesiva por
los bordes laterales, de manera
que quede con una forma de
ladrillo.
• Con lo que resta de la botella, se
cortará una pieza de 2.5x2.5 cm
para la base, y se hará una tapa
de 2.6x2.6 cm con un
semicírculo en la parte de arriba,
que ayudará a sostener la tapa
de la cubeta.

21. Equipo
Relleno
Soporte
Cubeta
Características
Resultados
• Para elaborar los electrodos, se
cortaron 4 piezas de cartón
grueso. Con un ancho de 2.4 cm,
y la altura, hasta la mitad de la
cubeta aproximadamente.
• Se pegará una pieza sobre otra,
por cada dos piezas. Y serán
colocados en los laterales
interiores de la cubeta.

22. Equipo
Relleno
Soporte
Cubeta
Características
Resultados
• Con un pliego de papel de
regalo usado, se forro la
maqueta, mostrando el color
blanco del papel.
• La parte inferior del equipo
original presenta un borde gris,
por lo que se empleó una bolsa
del plástico de ese color, y se
pegó adecuando las medidas.
• La parte de los botones, pantalla
y conexiones, fue impresa y se
hizo un orificio en la parte
donde entra la pieza que lleva la
cubeta.
• La pieza que lleva la cubeta se
forró con retazos de una hoja
color azul. La tapa de la cubeta
se pintó de color azul con
témpera, y los electrodos se
pintaron de color gris.

23. Equipo
Relleno
Soporte
Cubeta
Características
Resultados

24. 1
1 Tecla de inicio: Iniciar la electroporación.
Después de encender el dispositivo, siempre se
muestra el último voltaje configurado.
2
Uso intuitivo: la información del estado, en la
pantalla de color minimiza los errores.
2
3
Tecla de programa P1 y P2 con LED de control:
permiten almacenar y recuperar los parámetros
más utilizados.
3
4
4
Tecla de menú/enter: Abre el menú de
parámetros y el parámetro seleccionado
parpadea en la pantalla.
5
5 Tecla de flecha: Cambia el valor del parámetro.
Permite establecer un voltaje entre 200 v a 2500
v.
6
6 Tecla de salida: Salir del menú. Los parámetros
cambiados son automáticamente guardados.
7
7
Soporte de cubeta: Cuenta con una cámara de
electroporación integrada para eliminar las fugas
de voltaje y su mal uso.

27. 1110
98
8 Interfaz RS232: Solo para servicio técnica.
11
Hembrilla de conexión a la red
10 Interruptor principal
9 Interfaz USB: Para la conexión de una memoria
USB para transferencia de datos y
documentación

28. Fuente de alimentación de
pulso
Tapa
Electrododos
Cubeta
Contacto eléctrico
Células en suspensión

29. APLICACIÓN DE LA
ELECTROPORACIÓN

30. • Tratamiento y desinfección de agua: Este sistema utiliza campos eléctricos para la
eliminación de bacterias y a través del método de oxidación avanzada, elimina la materia
orgánica y el nitrógeno, además de crear cloro natural. Las ventajas que presenta, es que al
ser una técnica de ultima tecnología, se elimina los productos químicos, lo que conlleva a un
ahorro de agua y energía, además de proteger el medio ambiente.
• Eliminación de contaminación por Listeria de los alimentos: Este método permite identificar
las condiciones en las que la Listeria, en soluciones de proteína de suero de leche más
viscosas, puede eliminarse de forma segura mediante campos eléctricos pulsátiles, a la vez
que se conservan valiosos nutrientes.
• Biorrefinería de microalgas: La producción de biocombustible facilitada por la electroporación,
al mezclar, concentrar, y finalmente romper la pared celular de las microalgas para obtener su
producto, en una combinación de la optimización del uso de energía y la cosecha de
componentes de microalgas con un alto valor en el mercado, lo haría una alternativa
económicamente viable.

31. GRACIAS