Presentación de seminario de biología molecular, 2019-2.

1. By: María Camila Guisao Ospina.
Semester: III-02
University: Universidad Pontificia Bolivariana.

2. INTRODUCTION.
Carbon nanotubes: (CNTs) It is a tubular structure, this has different
properties. It has a cytotoxic effect on the bacterial membrane and has an
effect in the oxidative stress.
Phage shock protein: It is an extracytoplasmic stress response system,
which is responsible for repairing damage to the inner membrane. It can
control different expression by negative and positive regulator and a
transcriptional conditional.
E. Coli: It was used because it is frequently used to assess the impact go
CNTs on bacterium and we have a wealth of genetic information about
them.

3. INTRODUCTION.
The CNTs cause elevated levels
of some E. Coli´s genes, they are
regulators of responding to
oxidative stress, and at this
moment the Psp have to repair
the bacterial membrane.

4. The objective of this study was
to investigate the impact of
CNTs on the expressions of
genes and proteins in E. coli
Psp system.
GENERAL OBJECTIVE.

5. MATERIALES Y MÉTODOS.
Aislamiento de ARN y síntesis
de ADNc: Debemos realizar una
serie de pasos para la extracción
del ARN, para esto utilizaremos
una ADNasa y almacenaremos el
resultado en un TE.
Para la síntesis de ADNc
mezclaremos el ARN total con
diferentes cebadores.

6. MATERIALES Y MÉTODOS.
PCR cuantitativa: La PCRq se
utiliza para el análisis del ARNm
de los genes que nos interesan.
Luego el RT PCR se encarga de
amplificar el ARN por medio de
la síntesis previa de ADNc
usando una transcriptas reversa.

7. MATERIALES Y MÉTODOS.
SDS PAGE: es una técnica de
electroforesis en la que se usan
unos geles que permiten separar
las proteínas según el peso
molecular y las cargas. Este es un
sistema de tampón discontinuo.

8. MATERIALES Y MÉTODOS.
Western blot: en esta tecnica las
proteínas de los extractos
celulares son separadas por
medio de la electroforesis en el
gel según su tamaño por medio
de la SDS PAGE.

9. RESULTADOS.
Identificación de proteínas de
choque de fagos relacionada con
la exposición a SWCNTs por
western blot:
En este estudio se demuestran las
expresiones de la pspA, pspB y la
pspC. En dos paneles, el primero
tine 10 microgramos/dl y el
segundo tiene 100 microgramos/dl
En la muestra de pspB se ve como
esta proteína no respondió ante el
estimulo de los SWCNT.

10. En la pspA se puede observar en
el primer panel podemos
observar que es muy similar la
coloración con respecto al
control, pero cambia en las letras
C y D.
En la pspC se evidenció que hay
una variable en la muestra, pues
se logra ver como hay mayor
expresión de las proteínas con
ciertos SWNCTs que con otros y
esto es según la cantidad de
estrés que produce en la célula.

11. RESULTADOS.
Identificación de la respuesta
de transcripción de las
proteínas de choque de Fago
A,B y C alteradas a la
exposición de SWCNTs:
Se evaluaron las expresiones de
los genes pspA, pspB y pspC por
medio de RT PCR.
La expresión de la pspB fue muy
baja en comparación con las
otras proteínas.

12. La pspA tiene una función mas
elevada cuando se usa SWCNT-
COOH y es menor cuando se usa
SWCNT-OH.
La pspC de las células expuestas
a SWCNT-OH con la Western
Blot fue débil pero su expresión
a nivel de ARNm en esta prueba
fue muy elevada.

13. DISCUSSION.
Author. Contribution. ✅ or ❌
Flores-Kim and
Darwin.
While psp A is countering with the SCE
stress, PspB/ PspC are also required for
secretin stress tolerance.
✅
Hartono et al;
Kang et al.
The toxicity mechanisms of CNTs were
proposed including direct contact between
CNTs and cells, and the alteration of the
cell membrane integrity.
✅
Guo and
Grss; Stortz
and Hengee,
Unicellular organisms such E. Coli
ATCC 8739 need a quick
reprogramming of their activities to
survive under the stress.
✅

14. CONCLUSION.
The cytotoxicity of the CNTs
can destroy the bacterial
membrane, causing alterations
in genes and proteins, but the
unicellular organism try to
prevent this damage with the
psp system.
Molecular biology allows the study
of different proteins in organisms,
and investigate their functions
such as how this can help the cell
in many situations, in this case
protect the cell from the stress
caused by nanotubes