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Seminario Biologia molecular, Natalia Zuluaga Diaz
- 1. NATALIA ZULUAGA DIAZ TERCER SEMESTRE 2020-1
- 2. INTRODUCTION LEUKEMIA Acute myeloid leukemia (AML) is the most common type of leukemia. abnormal proliferation of immature myeloblasts GEN P53 Cell cycle arrest Activation of DNA repair enzymes Entry into senescence Apoptosis activation It is a tumor suppressor protein
- 3. Introduction AUTOPHAGY Programmed cell death Repair mechanism Is the natural regulated mechanism of the cell that removes unnecessary or dysfunctional components. MDM2 MDM2 it's a protein that inhibits autophagy and apoptosis in leukemic cells in a p53-independent manner. XIAP Negatively regulates p53
- 4. "Berberine (BBR) is reported to induce apoptosis and inhibit migration of leukemic cells, but the underlying pharmacological mechanisms have not been fully revealed. This study aims to investigate the possible mechanisms from the perspective of autophagy." AIMS
- 5. WESTERN BLOT MATERIALES Y METODOS Separar por tamaño Visualizar proteinas Es usado para identificarproteínas específicas en unamezcla compleja de estamacromolécula, Ayuda a: FUNDAMENTO Separar las proteinas por medio de electroforesis y su posterior transferencia a un filtro para poder visualizarlas mediante un marcaje con anticuerpos especificos a una proteina de interés. Se utilizaron ratones NOD machos de 6-8 semanas para evaluar el efecto de BBR sobre la sensibilidad de la quimiterapia in vivo
- 6. PCR-q MATERIALES Y METODOS FUNDAMENTO Es una tecnica que me ayuda para amplificar una secuencia especifica de ADN. Estudio de la expresión génica. Se uso el RNA de las celulasleucemicas, para medir elnivel de MDM2, con unfluoruro llamado SYBR(Reactivo verde)
- 7. FITC FUNDAMENTO El anticuerpo marcado con un fluorocromo reacciona con el antígeno específico cuya presencia se quiere determinar y se observa el resultado de la reacción MATERIALES Y METODOS Para el marcaje de diversasbiomoléculas como inmunoglobulinas,diversas proteínas, péptidos,ácidos nucleicos, polinucleótidos
- 8. INMUNOFLUORESCENCIA Para analizar la presencia ydistribución deproteínas, glúcidos ymoléculas pequeñas tanto deorigen biológico como no. cortes de tejidos, líneascelulares cultivadas, célulasindividuales y secreciones quecontengan células ensuspensión FUNDAMENTO Técnica de inmunomarcación que hace uso de anticuerpos unidos químicamente a una sustancia fluorescente. MATERIALES Y METODOS
- 9. RESULTADOS 3-MA: inhibe el proceso de BBR p62: Actua en division celular ATG5/ LC3 I- LC3II: Indica muerte celular autofagica.
- 10. Mayor control en MDM2 que XIAP p62: Actua en division celular ATG5/ LC3 I- LC3II: Indica muerte celular autofagica. BBR: Induce autofagia, sin necesidad de p53. Resultados B
- 11. REVENUE GROTH IN 2019 Resultados Mayor control en MDM2 que XIAP p62: Actua en division celular ATG5/ LC3 I- LC3II: Indica muerte celular autofagica. BBR: Induce autofagia, sin necesidad de p53.
- 12. Resultados Ubiquitinación: Degradación de proteínas, regulación del crecimiento celular Disminución de la funcionalidad, no de su ubicacion
- 13. Lack of autophagy in the hematopoietic system leads to loss of hematopoietic stem cell function and dysregulated myeloid proliferation DISCUSSION M. Mortensen, et al. or Berberine Induces Apoptosis in p53- Null Leukemia Cells by Down- Regulating XIAP at the Post- Transcriptional Level J. Liu, et al. Degradation of MDM2 by the Interaction between Berberine and DAXX Leads to Potent Apoptosis in MDM2-Overexpressing Cancer Cells X. Zhang,, et al.
- 14. CONCLUSIONS According to the studies, a BBR treatment can provide adequate autophagy because the MDM2 is downregulated that is active, promoting inappropriate myeloblastic cell proliferation. Although P53 is aregulatory process of autophagy, importantfor differentphysiological actions, in the case of leukemia and different types of cancer, there are othermechanisms ofautophagy that can be used for this function.