Por: Catalina González Arango

1. BY: CATALINA GONZÁLEZ ARANGO
III SEMESTER OF MEDICINE - UPB

2. INTRODUCTION

3. VITREOUSRETINOPATHY
•Rhegmatogenous retinal detachment (RRD)
occurs when a tear in the retina leads to fluid
accumulation with a separation of the
neurosensory retina from the underlying retinal
pigmented epithelium (RPE).
•This is the most common type of retinal
detachment, which can be treated with surgery.
•The major cause of failure in surgery to correct
RRD is proliferative vitreoretinopathy (PVR),
which is characterized with formation of fibrotic-
cellular epiretinal membranes (ERMs) composed
of extracellular matrix proteins and cells,
including RPE cells, retinal glial cells, fibroblasts,
and macrophages.

4. RETINA
•The retina is the most delicate
and inner layer of the eye. It
transforms the luminous
(optical) impulse into electrical
impulse.
•The alterations in the retina
may produce several visual
problems such as scotoma,
photopsia, among others. The
retina detachment is
extremely severe due to the
fact that it causes blindness
and there is no treatment.

5. MDM2
•MDM2 is a gene and a protein
that regulates the cell cycle. It
responds to p53 and it
regulates it as well. These two
have a feedback relation.
•If the p53 is too high it
stimulated the expression of
MDM2 which inhibits the
expression of p53, and
increases its degradation.

6. MDM2 VS
RETINA
•In normal circumstances, RPE is
going to regenerate. Meaning that
p53 will be active, inducing
apoptosis and inhibiting MDM2, in
old cells. On the other hand,
MDM2 will be stimulated inducing
degradation of p53 and therefor
cell survival, in young cells.
•In PVR, cells tend to form
membranes as said previously so
this might give a small hint that
MDM2 is going to be active.
Stimulating the degradation of
p53, this way, avoiding apoptosis
in cells and encouraging the
formation of membranes.

7. OBJECTIVE
The goal of this study was to determine
whether this MDM2 T309G contributes to the
development of experimental PVR.

8. METODOS

9. PCR
CUANTITATIVA
PCR: REACCIÓN EN CADENA DE
LA POLIMERASA
FUNDAMENTO: El PCR es un
método que se usa para
verificar la presencia y cantidad
de una secuencia especifica en
el ADN, por medio de su
amplificación.
¿PARA QUÉ SE USÓ?: En este
estudio se usó la PCR para ver
la presencia del gen hHPRT1
(housekeeping gen) y MDM2.

10. WESTERN BLOT
FUNDAMENTO: Separación de
moléculas (proteínas) por carga
y peso molecular. Se usa una
detección por medio de
anticuerpos (primario y
secundario)
¿PARA QUÉ SE USÓ?: En este
estudio se usó para detectar la
presencia y cantidad de p53,
MDM2 y -actina.

11. ENSAYO DE
PROLIFERACIÓN
CELULARFUNDAMENTO: Este es un
método que se usa para ver la
vida celular por medio de
adición de medios de cultivos
ricos en nutrientes y por
conteo de células.
¿PARA QUÉ SE USÓ?: En este
estudio se usó para contar
células y ver la consistencia del
experimento, es decir, para ver
como el medio y los cambios
genéticos afectaron las células
en su desarrollo y crecimiento.

12. ENSAYO DE
APOPTOSIS
FUNDAMENTO: Se usó FITC
conjugado con anexina V y PI,
una combinación de sustancias
fluorescentes y marcadores
específicos para células
muertas o en proceso de
apoptosis.
¿PARA QUÉ SE USÓ?: En este
estudio se usó para ver la
supervivencia celular teniendo
en cuenta el medio en el cual
se pusieron y su mutación.

13. PVR
EXPERIMENTAL
EN CONEJOSFUNDAMENTO: Inducción de
PVR con virectomía (ambiente)
y hematoxilina eosina en corte
histológico (hematoxilina es
morada y básica, con afinidad
por lo acido y la eosina es
rosada y acida con afinidad por
lo básico.
¿PARA QUÉ SE USÓ?: En este
estudio se usó para ver el
desarrollo de la enfermedad
con las nuevas variables en un
caso in vivo, no solo in vitro.

14. RESULTADOS

15. FIG.1A
•MDM2 T309T no se ve afectado
por el cambio del medio.
•Se ve como el medio HV cambia
la presencia de p53,
disminuyéndola en MDM2
T309G .

16. FIG.2B
Densitometría de flujo:
 Cuadrante inferior izquierdo: Negativo para ambos
marcadores
 Cuadrante inferior derecho: Positivo para 1
marcador
 Cuadrante superior izquierdo: Positivo para el
marcadores opuesto
 Cuadrante superior derecho: Positivo para ambos
marcadores
•Se ve como sin presencia de HV la apoptosis estuvo
muy aumentada mientras que el las células que
fueron tratadas con HV no. Dentro de las tratadas
con HV se ve como la mutación MDM2 T309G mejoró
la supervivencia celular.

17. FIG.3
•Se evidencia como sin HV hoy
poca área de colágeno, por ende,
poca contractilidad celular.
Mientras que en presencia de HV
específicamente con MDM2
T309G hay una disminución
aguda de área, así aumentando
contractibilidad.

18. FIG.4B
0 y 1: MDM2
T309T
2 y 3: MDM2
T309G
•Se puede ver
como hay células
adheridas a la
capa limitante
interna en 2 y 3.

19. DISCUSSION

20. AUTHOR CONCEPT AGREE OR DISAGREE
Wu W, Tang L, D’Amore PA, Lei
H.
The eye, an ideal target for gene
therapy, as it is easily accessible
and immune privileged.
Disagree
40. Swiech L, Heidenreich M,
Banerjee A, et al.
41. Tabebordbar M, Zhu K,
Cheng JK, et al.
CRISPR/Cas9 system is a
powerful tool for the targeted
introduction of mutations
Agree
Pennock S, Haddock LJ, Eliott D,
Mukai S, Kazlauskas A.
Growth factors increased in PVR,
such as platelet-derived growth
factor (PDGF)35 and TGF-b8 and
these vitreal growth factors and
cytokines may be essential
drivers of the PVR pathogenesis.
Agree
Pennock S, Rheaume MA, Mukai
S, Kazlauskas A.
Agents neutralizing EGF, TGF-a,
FGF-2, IL-8, TGF-bs, HGF, IGF-1,
and PDGFs blocks experimental
PVR induced by fibroblasts
Agree

21. CONCLUSIONS

22. GENERAL:
•HV increases MDM2 T309G expression and its expression results in a
reduction of p53, and enhanced cell proliferation, viability, and
contraction, leading to an increased potential of PVR.
•CRISPR/Cas9 system is a new powerful tool for the targeted introduction
of mutations into eukaryotic genomes for the generation of
reproducible disease models.
PERSONAL:
•This type of approach is very important, specially because vision is a
massive factor in someone's life quality, therefore, investigating in a
common disease and making advances that could improve the
treatment is extremely important.
•Finding treatment for these types of pathologies is crucial since the
treatment can save a large amount of money, nowadays invested in
ineffective surgery.

23. MAPA CONCEPTUAL

25. THANK YOU