Capacitaciones Laboratorio Cecolor

1. CROMATOGRAFÍA ASPECTOS
GENERALES
OBJETIVOS:
• LOS PRINCIPIOS BÁSICOS
DE LA CROMATOGRAFÍA.
• TIPOS DE CROMATOGRAFÍA.
• APLICACIONES

2. CROMATOGRAFÍA ASPECTOS
GENERALES
LA CROMATOGRAFÍA ES UN
PROCEDIMIENTO FÍSICO-QUÍMICO DE
SEPARACIÓN DE LOS CONSTITUYENTES
DE UN MEZCLA.
(DESTILACIÓN, LA FILTRACIÓN ETC.)
ANÁLISIS QUÍMICO. F. Rouessac, A. Rouessac, 2003, Mc Graw Hill.
QUÍMICA ANALÍTICA CONTEMPORANEA. J.F. Rubinson, K.A. Rubinson,2000, Pearson Education.

3. CONCEPTOS GENERALES
Fase móvil: consiste en un fluido (gas, líquido o
fluido supercrítico).
Fase estacionaria: se trata de un sólido o un
líquido fijado en un sólido.
Los componentes de la mezcla interaccionan en
forma diferente con la fase estacionaria y con la
fase móvil.
Los componentes atraviesan la fase estacionaria a
distintas velocidades y se van separando.
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QUÍMICA ANALÍTICA CONTEMPORANEA. J.F. Rubinson, K.A. Rubinson,2000, Pearson Education.

4. TIPOS DE CROMATOGRAFÍA
Cromatografía plana: La fase estacionaria se sitúa sobre
una placa plana o sobre un papel. Las principales técnicas
son:
Cromatografía en papel y Cromatografía en capa fina
Cromatografía en columna: La fase estacionaria se sitúa
dentro de una columna. Según el fluido empleado como fase
móvil se distinguen:
Cromatografía de líquidos.
Cromatografía de gases.
Cromatografía de fluidos supercríticos.
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QUÍMICA ANALÍTICA CONTEMPORANEA. J.F. Rubinson, K.A. Rubinson,2000, Pearson Education.

5. CROMATOGRAFÍA DE COLUMNA
Consiste en la aplicación de una muestra compleja a una
columna de cristal.
Contiene una matriz sólida porosa que está inmersa en
el solvente.
Se bombea una gran cantidad de solvente a través de la
columna.
Las diferentes mezclas se van retrasando de manera
distinta según sus interacciones con la matriz.
Se pueden separar de acuerdo a su carga, su
hidrofobicidad, su tamaño o su capacidad de unirse a
grupos químicos particulares.
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QUÍMICA ANALÍTICA CONTEMPORANEA. J.F. Rubinson, K.A. Rubinson,2000, Pearson Education.

6. CROMATOGRAFÍA DE COLUMNA
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QUÍMICA ANALÍTICA CONTEMPORANEA. J.F. Rubinson, K.A. Rubinson,2000, Pearson Education.

7. CROMATOGRAFÍA
INTERCAMBIO IÓNICO
Se realiza sobre matrices que tienen una carga neta.
Carga negativa: intercambio de cationes
Carga positiva: intercambio de aniones
La carga de la matriz de la columna así como la carga de la
muestra dependerá del pH del solvente y de su fuerza
iónica
Se usa en la separación de moléculas grandes (proteínas y
ácidos nucleicos).
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8. CROMATOGRAFÍA
INTERCAMBIO IÓNICO
Funcionamiento
En unas condiciones determinadas serán retenidas en la
columna las muestras que tengan una carga
complementaria a la de la matriz de la gel, siendo
eluidas las restantes.
Para eluir las muestras retenidas se puede variar la
carga iónica del solvente o su pH de forma que se
alcance el punto isoeléctrico de la muestra de interés
o el de la matriz, neutralizando de este modo la fuerza
que retiene a la muestra en la columna.
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9. CROMATOGRAFÍA
INTERCAMBIO IÓNICO
FASES
ESTACIONARIAS
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10. CROMATOGRAFÍA
INTERCAMBIO IÓNICO
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Rubinson,2000, Pearson Education.

11. CROMATOGRAFÍA DE
EXCLUSIÓN
La cromatografía de exclusión molecular o de filtración
en gel, separa las muestras en base a su tamaño.
La matriz de la columna esta formada por un polímero
entrecruzado con poros de tamaños determinados.
Las muestras de mayor tamaño migran a lo largo de la
columna con mayor velocidad que las de tamaño
pequeño.
Las muestras de menor tamaño, entran en los poros y se
mueven a lo largo de la columna lentamente porque
tienen que atravesar los laberintos que se encuentran en
el interior de las bolas de polímero en su marcha a lo
largo de la columna
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12. CROMATOGRAFIA DE
EXCLUSIÓN
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13. CROMATOGRAFÍA DE GASES
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14. CROMATOGRAFÍA DE GASES

15. CROMATOGRAFIA DE CAPA
FINA
MONTAJE
EXPERIMENTAL
FORENSIC EXAMINATION OF FIBRES. J.
Robertson,1999, Print ISBN: 978-0-7484-0816-0eBook
ISBN: 978-0-203-48451-7 CAP 11.

16. APLICACIONES EN
COLORANTES
REACTIVE REACTIVE
BLACK BO- BLACK WNN
R2907 I522-L106130
LOT
NO:0698/11
FASE FASE MOVIL:
ESTACIONARIA: 2PROPANOL-
TLC SILICA GEL 60 ETANOL-AMONIACO-
PIRIDINA
(4:1:3:2)
FORENSIC EXAMINATION
OF FIBRES. J.
Robertson,1999, Print ISBN:
978-0-7484-0816-0eBook
ISBN: 978-0-203-48451-7
CAP 11.

17. APLICACIONES EN
COLORANTES
REACTIVE BLACK REACTIVE BLACK
BO-R2907 WNN I522-
LOT NO:0698/11 L106130
FASE MOVIL:
FASE
2PROPANOL-ETANOL-
ESTACIONARIA: AMONIACO-PIRIDINA-
TLC SILICA GEL 60 AGUA
(8:3:4:4:3)
FORENSIC EXAMINATION OF
FIBRES. J. Robertson,1999, Print
ISBN: 978-0-7484-0816-0eBook
ISBN: 978-0-203-48451-7 CAP
11.

18. APLICACIONES EN
COLORANTES
FASE FASE MOVIL:
MOVIL: 2PROPANOL-
2PROPANOL- ETANOL-
ETANOL- AMONIACO-
AMONIACO- PIRIDINA-AGUA
PIRIDINA (8:3:4:4:3)
(4:1:3:2)
FORENSIC
EXAMINATION OF
FIBRES. J.
Robertson,1999,
Print ISBN: 978-0-
7484-0816-0eBook
ISBN: 978-0-203-
48451-7 CAP 11.

19. APLICACIONES EN
COLORANTES
FASE MOVIL: 2PROPANOL-ETANOL-AMONIACO-PIRIDINA (4:1:3:2)
FASE ESTACIONARIA: TLC SILICA GEL 60 (ACIDOS)

20. APLICACIONES EN
COLORANTES
ROJO ROJO
RAINOFIX CESPERSE
TED: MA R:
ICL12010 141210.08
FASES
MOVILES:
REACTIVE
RED ED
Xileno-Piridina
(4:1)
Xileno-metanol-
Ciclohexanona
(20:2:1)
Varsol-etil
acetato-
ciclohexanona
(5:4:1)
DISPERSOS

21. APLICACIONES EN
COLORANTES
ROJO MARINO
CESPERS CESPERS
E R: E EXSF
141210.08 300%:
141210.08

22. APLICACIONES EN
COLORANTES
PARDO PARDO
DIRECTEX CN DIRECTEX B
070911-03 240311-02
FASE FASE MOVIL: 2-
ESTACIONARIA: PROPANOL-
TLC SILICA GEL 60 ETANOL-
AMONIACO-
PIRIDINA-AGUA
DIRECTOS
FORENSIC EXAMINATION OF FIBRES. J. Robertson,1999, Print ISBN: 978-0-7484-0816-
0eBook ISBN: 978-0-203-48451-7 CAP 11.

23. APLICACIONES EN
SURFACTANTES
Surfactantes: Se visualizan como manchas de color azul con azul
de bromofenol (50 mg disueltos en 100 ml metanol más 0,4 ml de
ácido acético) sobre placas de sílice.
Al rociar las placas, despues del proceso cromatografico, con una
solución de amarillo de pinacryptol (100 mg en 100 mL de agua
caliente), se observan manchas naranjas bajo la influencia de la luz
ultraviloleta.
Pinacryptol
yellow
HANDBOOK OF DETERGENTS: PART C: ANALYSIS. U. ZOLLER, H.
WALDHOFF, 2004, Print ISBN: 978-0-8247-0351-6 eBook ISBN: 978-1-4200-
3033-4

24. APLICACIONES EN
SURFACTANTES
Matissek recomienda lo siguiente para la separación de surfactantes:
Fase estacionaria: silica gel 60, fase móvil: etanol / ácido acético (9:1 v /
v), distancia de separación: 10 cm. Pinacryptol como reactivo de
visualización.
Armstrong y Stine Recomiendan lo siguiente para la separación de
surfactantes: Fase estacionaria: Silica gel 60, Fase móvil:
diclorometano/metanol/acido acético (8:1:1 v/v)
Matissek Armstrong y Stine
HANDBOOK OF DETERGENTS:
PART C: ANALYSIS. U. ZOLLER,
H. WALDHOFF, 2004, Print ISBN:
978-0-8247-0351-6 eBook ISBN:
978-1-4200-3033-4

25. APLICACIONES EN
SURFACTANTES

26. RETROALIMENTACIÓN