Cromatografía separación componentes

CROMATOGRAFÍA
Andrea Cortés
Maestría Ciencias Biomédicas
Universidad del Norte

HISTORIA
1850 F.F. Runge
Descubrió que los cationes
orgánicos se separan por
migración cuando se
depositaba una disolución que
los contenía sobre un material
poroso (papel).
1906 Tswet
Con cromatografía en columna
separó extractos vegetales
coloreados, y le dio el nombre.
1930 Lederer
Separa colorantes de yema de
huevo
1940 Extensión mundial

La cromatografía se diseñó
originalmente para separa sustancias
de peso molecular bajo, como los
azúcares y los aminoácidos, y hoy es
una herramienta en la purificación
de proteínas.
Se pueden separar dependiente de
propiedades moleculares (tamaño,
forma y peso), o determinadas
afinidades de unión.
HISTORIA

Las separaciones se consiguen mediante la distribución de los
componentes de una mezcla entre la fase fija y la fase móvil.
Fase fija
Está inmovilizada sobre partículas de soporte, o en la pared interior
del tubo contenedor o columna.
Fase móvil
La muestra que está siendo separada/analizada y el disolvente, que se
mueven por el interior de la columna.
La separación entre dos sustancias empieza cuando una es retenida
más fuertemente por la fase estacionaria que la otra, que tiende a
desplazarse más rápidamente en la fase móvil.
FASES DE CROMATOGRAFÍA

PRINCIPIOS DE CROMATOGRAFÍA
1.-La adsorción
Es la retención de una especie química por parte de los puntos activos de la
superficie de un sólido quedando delimitado el fenómeno a la superficie que
separa las fases o superficie interfacial.
2.- La absorción
Es la retención de una especie química por parte de una masa, y debido a la
tendencia que esta tiene a formar mezcla con la primera, absorción pura, o a
reaccionar químicamente con la misma, absorción con reacción química,
considerando ambas como un fenómeno másico y no superficial.

“Método usado principalmente para la separación de los componentes de una
muestra, en el cual los componentes son distribuidos entre dos fases, una de
las cuales es estacionaria, mientras que la otra es móvil. La fase estacionaria
puede ser un sólido o un líquido soportado en un sólido o en un gel (matriz).
La fase estacionaria puede ser empaquetada en una columna, extendida en
una capa, distribuida como una película, entre otros.”
DEFINICIÓN DE CROMATOGRAFÍA

CROMATOGRAFÍA DE GASES
La Fase Móvil es un Gas (Gas Portador o Acarreador)
La Fase Estacionaria puede ser un sólido (Cromatografia Gas-Solido) o una
Pelicula de liquido de alto punto de ebullicion (Generalmente Polietilen-Glicol
o Silicon) recubriendo un solido inerte (Cromatografia Gas-Liquido).
Cromatografía de Gases. Tomado de: [http://www.datuopinion.com/cromatografo-de-gases] Marzo 2015

• Análisis cuantitativos y semicuantitativos.
• Exactitud relativamente buena.
• CGS vs CGL (+)
• Cromatografo debe:
1. Proporcionar un flujo constante del gas transportador (fase móvil).
2. Permitir la introducción de vapores de la muestra en la corriente de
gas.
3. Contener la longitud apropiada de fase estacionaria.
4. Mantener la columna a la (secuencia de) temperatura apropiada.
5. Detectar los componentes de la muestra.
6. Proveer un señal legible proporcional a la cantidad de cada
componente.
Universidad de Alicante. Cromatografía de gases. [Universidad de Alicante. Cromatografía de gases. [http://
rua.ua.es/dspace/bitstream/10045/8247/4/T3gascromat.pdf] Marzo 2015

- Inyector. Muestra líquida - > Gas
- Columna. Longitud <2 - 50m. Acero inoxidable, vidrio, silice fundido.

- Horno. Modular la temperatura de la columna. Punto de ebullición de
la muestra. 0.1C/min hasta 50C/min.
- Detectores.
- Adecuada sensibilidad.
- Buena estabilidad y
- reproducibilidad
- Respuesta lineal para los analitos
- Intervalo de temperatura amplio.
- Tiempo de respuesta corto
- Alta fiabilidad y manejo sencillo
- No destrucción de la muestra

CROMATOGRAFÍA DE AFINIDAD
Ideada por Porath en 1967, usando un péptido o proteína unida covalentemente a
un ligando y se utiliza para la separación de moléculas proteicas.
Universidad Javeriana. Cromatografía [http://www.javeriana.edu.co/Facultades/Ciencias/
neurobioquimica/libros/celular/cromatografia.htm] Marzo 2015.

Utiliza una afinidad de unión no
covalente entre la proteína y una
molécula especial (el ligando).
El ligando está unido de forma
covalente a una matriz insoluble,
que se coloca en una columna.
La proteína que interesa se separan
alterando las condiciones que
afectan a la unión (pH o
concentración salina).

Teknokroma. Cromatografía de afinidad. http://www.teknokroma.es/UserFiles/HPLC/603-606.pdf

Uribe Acevedo, R. Cromatografía. Universidad de Antioquia. 2013.
McKee, T. McKee, J. Bioquímica. 3a Edición. Mc GrawHill. 2003
Cromatografía. Tomado de: [http://www.textoscientificos.com/quimica/
cromatografia]. Marzo 2015.
Cromatografía de Gases. Tomado de: [http://www.datuopinion.com/cromatografo-de-
gases] Marzo 2015
Harper. Bioquímica. 28a Edición. Lange. 2009.
Universidad de Alicante. Cromatografía de gases. [http://rua.ua.es/dspace/bitstream/
10045/8247/4/T3gascromat.pdf] Marzo 2015
Universidad Javeriana. Cromatografía [http://www.javeriana.edu.co/Facultades/
Ciencias/neurobioquimica/libros/celular/cromatografia.htm] Marzo 2015.
BIBLIOGRAFÍA

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