Cromatografia

1. Definición
Cromatografía
Método de análisis químico para la
separación de los componentes de una
mezcla por distribución entre dos fases,
una estacionaria y otra móvil.
Del griego χρῶμα (chrōma) y γράφω (gráphō), que se
traducen en "color" y "escribir, registrar"
respectivamente. Puede interpretarse como “escritura
de color” o incluso “registro de color”.

2. Clasificación
Fase estacionaria (FE)
Material sólido o líquido sostenido
por un soporte inerte, con el cual
los componentes de la muestra a
analizar interactúan de diversas
maneras (a través de atracciones
electrostáticas, polaridad, entre
otros).
Sólo líquidos y sólidos pueden servir como fase estacionaria mientras que la fase móvil
puede estar representada por gases o líquidos. Aquellos métodos que emplean como
fase fija un sólido, se denominan de adsorción; mientras que los que utilizan un líquido
se denominan de partición.
Fase movil (FM)
Es un compuesto químico o mezcla de
sustancias líquidas, gaseosas o fluidos
supercríticos que fluye a través de la fase
estacionaria, favoreciendo a la separación
de los componentes de la mezcla a través
de la columna.

3. a

4. Definición de Absorción y Adsorción
Adsorción: es la retención de una
especie química en los sitios activos de
la superficie de un sólido, quedando
limitado el fenómeno a la superficie
que separa las fases o superficie
interfacial, esta retención superficial
puede ser física o química.
Absorción: Es la retención de una
especie química por parte de una
masa y depende de la tendencia
que tiene ésta a formar mezcla o
a reaccionar químicamente con la
misma.

5. CROMATOGRAFÍA DE ADSORCIÓN
La cromatografía de adsorción se
emplea fundamentalmente para la
separación de compuestos no
polares de bajo peso molecular.

6. CROMATOGRAFIA DE REPARTO

7. CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO

8. Tipos de adsorventes
Los adsorventes más ampliamente utilizados son la gel de sílice (SiO2) y la alúmina
(Al2O3), ambas de carácter polar.
Alúmina
La alúmina anhidra es el más
activo de los dos, puesto que es
el que retiene con más fuerza a
los compuestos; por ello se
utiliza para separar compuestos
relativamente apolares
(hidrocarburos, haluros de
alquilo, éteres, aldehidos y
cetonas).
Gel de sílice
La gel de sílice, por el
contrario,se utiliza para
separar sustancias más
polares (alcoholes, aminas,
ácidos carboxílicos).
Al2O3
SiO2

9. TABLA DE DISOLVENTES MÁS USADOS POR ORDEN DE
POLARIDAD

13. MATERIALES PARA CROMATOGRAFÍA
PAPEL CROMATOGRAFICO
CAPILARES
LAMINAS DE TLC
Cuba o camara cromatografica

14. Cromatografía en papel
La cromatografía en papel, desarrollada en 1941 por Archer Martin
y Richard Synge,
● Es una técnica simple.
● La separación de los componentes, se relaciona con las
diferentes solubilidades relativas de estos, entre las fases
móvil y estacionaria.

15. Cromatografía en papel
● Los componentes menos solubles en la fase estacionaria tienen una migración más
rápida a lo largo del papel, mientras que los más solubles en la fase estacionaria serán
selectivamente retenidos
● Se emplea en la separación se identificación de compuestos muy polares o
polifuncionales como ácidos orgánicos, antibióticos hidrosolubles, hidratos de carbono,
aminoácidos y pigmentos vegetales, entre otros.

16. Procedimiento
1.- Dibuje una línea de lápiz a 0,5 cm del borde del papel cromatográfico y marque los
lugares donde se aplicará la muestra con el capilar.
2.- Se siembra la muestra sobre la línea (línea de siembra), con micro pipetas Pasteur o
capilares, para que el volumen sembrado sea pequeño.
3.-Sumerja el capilar en la solución de muestra y transfiera el contenido a un punto
marcado en el papel.a una distancia no menor de 1 cm.
4.- Coloque el papel en el tanque y deje que el eluyente suba hasta la parte superior.
5.-Al finalizar la corrida cromatográfica, la identidad de los componentes de la muestra
problema se determina por comparación de la distancia recorrida por cada uno de ellos
con la distancia recorrida por cada patron.

17. Desarrollo: Movimiento de los componentes de una muestra, al ser arrastrados por
la fase móvil Esta técnica se lleva a cabo en tanque de elución o cámaras
cromatográficas Las mismas consisten en recipientes rectangulares de vidrio con
tapa hermética, con lo cual se evita el escape de la fase móvil

18. Cromatografía en Capa Fina (TLC)
La cromatografía en capa fina es la técnica de
separación e identificación de sustancias químicas
mediante un disolvente que se mueve sobre un
soporte sólido adsorbente.
Se pueden utilizar para separar mezclas de iones
inorgánicos, moléculas orgánicas y compuestos
biorgánicos tales como pigmentos, lípidos,
aminoácidos, nucleótidos y azúcares

19. Procedimiento
1.- Prepare una solución con una pequeña cantidad de muestra.
2.- Para láminas de TLC de 20 × 20 cm, corte con un cortador en placas de láminas de TLC
de 1/3 de alto y ancho en función del número de muestras que se vayan a aplicar.
3.- Dibuje una línea de lápiz a 0,5 cm del borde de la placa y marque los lugares donde se
aplicará la muestra con el capilar.
4.- Sumerja el capilar en la solución de muestra y transfiera el contenido a un punto
marcado en la placa. Seque si es necesario con un secador de aire para evitar que la
disolución se extienda por la superficie de la placa antes de ponerla en el tanque.
5.- Coloque la placa en el tanque y deje que el eluyente suba hasta la parte superior.
6.- Sácalo del tanque y revela.

20. Revelado: Si los compuestos de la mezcla son coloreados, las manchas son visibles
directamente. De lo contrario habrá que revelarlas.
Luz UV: si los compuestos absorben esta radiación las manchas se verán con fluorescencia.
Reactivos de color: especiales para cada compuesto. Se deberá tener en cuenta que no se pueden
usar reveladores que destruyan el papel como el ácido sulfúrico o el calor.
Vapores de yodo sublimado: es un revelador universal
Evaluación: La relación de migración de una sustancia (Rf), puede expresarse de acuerdo
con la siguiente fórmula:
Nota:La cromatografía de papel
utiliza un papel de celulosa como
fase estacionaria, la cromatografía
de capa fina utiliza alúmina o gel de
sílice como fase estacionaria

21. Rf
La retención se puede explicar en base a la competencia que se establece entre el soluto a separar y
la fase móvil por adsorberse a los centros activos polares de la fase estacionaria. Así, las moléculas
de soluto se encuentran adsorbidas en la fase estacionaria y a medida que se produce la elución van
siendo desplazadas por la fase móvil.
La retención dependen de los valores de las
constantes de los diferentes equilibrios químicos
que tienen lugar, que están en función de:
- La polaridad del compuesto, determinada por el número y
naturaleza de los grupos funcionales presentes. Los solutos
más polares quedarán más retenidos.
- Naturaleza del disolvente. Así, para un mismo compuesto,
un aumento en la polaridad del disolvente facilita su
desplazamiento en la placa.

22. La relación entre las distancias recorridas por el soluto y por el eluyente desde el origen de la
placa se conoce como Rf, y tiene un valor constante para cada compuesto en unas condiciones
cromatográficas determinadas
Para calcular el Rf se aplica la siguiente
expresión:
La distancia recorrida por el compuesto
se mide desde el centro de la mancha. Si
ésta es excesivamente grande se
obtendrá un valor erróneo del Rf.
Se recomienda elegir un eluyente con Rf medio
entorno a 0.3-0.5. Para compuestos poco
polares, se debe utilizar un disolvente apolar
como el hexano. En el caso de compuestos con
polaridad media, mezclas como hexano/acetato
de etilo en distintas proporciones.
Rf = distancia recorrida por el compuesto (X) / distancia recorrida
por el eluyente (Y)

23. CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA
Es un método de uso frecuente
para sustancias y mezclas a
preparativa. Se utiliza una
columna de cromatografía como
dispositivo principal.
Es quizás el método más utilizado
para la separación y purificación de
diferentes compuestos orgánicos
que se encuentren en estado sólido
o líquido.

24. CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA PROCEDIMIENTO:
Paso 1. Para elegir el
disolvente, se lleva a cabo
una cromatografía en capa
fina de la muestra a analizar.
Paso 2. Se coloca
la columna sobre un soporte
vertical, el tamaño de la
columna debe ser adecuado a
la cantidad de mezcla que se
desea separar.
Paso 3. La columna se
situará a una altura tal que
permita la colocación de un
matraz debajo de ella.
Paso 4.
Asegurarse que la llave de la
columna esté suficientemente
apretada para evitar fugas de
líquido una vez llena.

25. Paso 5. Se toma una pequeña
porción de algodón
desengrasado y se deja caer
en la columna, colocándola en
la parte estrecha con ayuda de
una varilla de vidrio larga.
Paso 6. La fase estacionaria o sea el
absorbente se coloca en el interior de la
columna y esta se impregna con la fase
movil.
Paso 7. Se deposita la mezcla que
nos interese separar por la parte
superior de la fase estacionaria y así
la fase móvil podrá ir atravesando el
sistema y por efecto de gravedad
hace mover la muestra a través de la
columna.
Paso 8. Los compuestos que se
encuentran disueltos en la fase
móvil, poco a poco irán saliendo de
la columna en pequeñas fracciones.
El tiempo que se necesita para hacer fluir el compuesto por la columna se le conoce como tiempo de retención y
este tiempo varía según varios factores como: El disolvente, la presion, el diámetro de la columna, etc.

26. Tratamiento de residuos químicos generados
en las diferentes técnicas cromatográficas
Los residuos generados en el laboratorio pueden
tener características muy diferentes y producirse en
cantidades variables, se consideran aspectos que
inciden directamente en la elección del
procedimiento para su eliminación.
Factores a considerar
para la eliminación de
residuos
● Volumen de residuos generados.
● Periodicidad de generación.
● Facilidad de neutralización.
● Posibilidad de recuperación, reciclado o reutilización.
● Coste del tratamiento y de otras alternativas.
● Valoración del tiempo disponible.
Factores a considerar

27. Tratamiento y vertido
H2O4/EtOH 50%
KMnO4/ MgCO3
Acido
Fosfomolibidico
Nihidrina/Acido Acetico/
Acetona
Yodo
Mezclar con un disolvente inflamable. Incinerar.
Absorber en vermiculita ó mezclar con un disolvente
inflamable. Incinerar
Hidrocarburos, alcoholes, cetonas, esteres,
aldehidos y minerales :
KmNo4
gregar disoluciones diluidas de bisulfito de sodio,
tiosulfato de sodio, sales ferrosas o mezclas sulfito-
sales ferrosas y ácido sulfúrico 2M para acelerar la
reducción (no usar carbón o azufre).

28. Precaución en el desarrollo Experimental
Derrame Liquido
● notificar lo sucedido a los
compañeros del área cercana al
derrame, con el objeto de que sean
tomadas las precauciones
necesarias, de ser posible, contener
el derrame si es pequeño.
● El personal involucrado en el
derrame deberá verificar la
posibilidad de contaminación
corporal, ropa o calzado.

29. ☼ La protección corporal se
logra utilizando bata, lentes de
seguridad y pinzas.
Derrame de solidos
se deberá recoger lo más
posible las partículas,
utilizando una pala,
recogedor, pinzas,

30. Primeros Auxilios
Inhalación: Transportar a la víctima a una zona
bien ventilada. Si se encuentra inconsciente,
proporcionar respiración artificial. Si se
encuentra consciente , sentarlo lentamente y
proporcionar oxígeno. Ojos: Lavarlos con agua
corriente asegurándose de
abrir bien los párpados, por lo
menos durante 15 minutos
Piel: Eliminar la ropa contaminada, si es
necesario, y lavar la zona afectada con agua
corriente. Ingestión: No induzca el vómito. Si
la víctima se encuentra consciente dar agua
a beber inmediatamente.