Este documento describe un experimento para extraer ADN de células de hígado de pollo y confirmar su estructura. El procedimiento involucra triturar el hígado, filtrarlo, romper las células con sal y detergente, precipitar el ADN con alcohol, y observarlo al microscopio para ver su estructura fibrilar. El objetivo es conocer técnicas para extraer ADN y confirmar su forma plegada y en doble hélice.
ACERTIJO DE POSICIÓN DE CORREDORES EN LA OLIMPIADA. Por JAVIER SOLIS NOYOLA
Actividad de laboratorio
1. EXPERIMENTO
TEMA: Extracción de ADN de las células
INVESTIGACION
El ADN está constituido por desoxirribonucleótidos formados por desoxirribosa, una base
nitrogenada y ácido fosfórico.
Se suele encontrar en forma de doble cadena muy replegada sobre sí misma.
A continuación, podremos confirmar algunas de estas características.
OJETIVO:
• Conocer y aplicar algunas técnicas sencillas para la extracción del ADN de las células.
• Confirmar la estructura fibrilar y plegada del ADN.
MATERIALES:
• 10 g de hígado de pollo
• una solución de NaCl 2M
• SDS al 20%, o bien, un detergente de lavavajillas
• un mortero y arena lavada
• un embudo
• una pipeta
• una varilla de vidrio
• alcohol etílico de 96°
• naranja de acridina
• dos vasos de precipitación de 250 cc
• un trozo de tela o de gasa gruesa para filtrar
• microscopio, portaobjetos y cubreobjetos
PROCEDIMIENTOS
• Trituren 10 g de hígado de pollo en 50 cc de agua, con un mortero con arena lavada,
para romper las células y liberar los núcleos.
• Filtren varias veces con un embudo recubierto por una tela, para separar los trozos de
tejido.
• Añadan 50 cc de solución de NaCl 2 M para romper los núcleos de manera que la
cromatina quede libre.
• Añadan 1 cc de SDS al 20%, o de detergente. Así se rompen los complejos formados
por el ADN y las proteínas, y se separan las fibras del ADN.
2. • Añadan, con una pipeta, 50 cc de alcohol de 96°, procurando que el alcohol se deslice
por las paredes del vaso y forme una capa superficial sobre la solución.En la interfase, el
ADN precipita.
• Introduzcan la varilla de vidrio y remuevan lentamente, siempre en el mismo sentido.
Durante este proceso, unas fibras blancas visibles a simple vista, que corresponden al
ADN, se adhieren a la varilla.
• Coloquen una parte de las fibras sobre un portaobjetos, tápenlo con un cubreobjetos y
obsérvenlo directamente al microscopio.
• Coloquen el resto de fibras en un portaobjetos y tíñanlo con naranja de acridina durante
unos minutos. Vuelvan a observar.
CUESTIONARIO
• Describan la relación entre los procesos que se utilizan para la separación del ADN y
los efectos que producen en la estructura del tejido, de las células y del ADN.
• Dibujen lo que se observa al microscopio y descríbelo.
• ¿Permite esta práctica confirmar las características del ADN descritas en el libro?