1. CULTIVO IN VITRO DE Comparentia falcuta CON FORMULA DE PLATANO
ADRIAN ARGOTE
JHON JAIRO MENECES
YAZMIN DIAZ OYOLA
YEISON BRAYAN MUÑOZ
ADRIANA PEÑA
Bióloga
FUNDACIÓN UNIVERSITARIA DE POPAYÁN
CIENCIAS NATURALES
ECOLOGÍA
POPAYÁN
2013

2. CULTIVO IN VITRO DE Comparentia falcuta CON FORMULA DE PLATANO
ADRIAN ARGOTE
JHON JAIRO MENECES
YAZMIN DIAZ OYOLA
YEISON BRAYAN MUÑOZ
ADRIANA PEÑA
Bióloga
Protocolo para realiar cultivo in vitro de orquídeas con formula de plátano. S. E.
Microorganismos, ecología IV.
FUNDACIÓN UNIVERSITARIA DE POPAYÁN
CIENCIAS NATURALES
ECOLOGÍA
POPAYÁN
2013

3. Materiales y métodos
El establecimiento del protocolo de germinación bajo condiciones in vitro
comparetia falcuta, se obtiene siguiendo los siguientes pasos,
a. Colección de capsulas. Se colectan capsulas maduras de comparetia
falcuta, resultantes de la polinización natural, en el jardín botánico de
Popayán, Cauca, durante el mes marzo 2014. (Pedroza 2009)
b. Desinfección de la capsula. Las capsulas fueron desinfectadas en solución
de detergente durante 10 minutos, y enseguida enjuagadas con agua
destilada estéril. Posteriormente, las capsulas se sumergieron en solución
de hipoclorito de sodio al 0,5% por min, y enjuagada tres veces con agua
destilada estéril. Bajo condiciones asépticas en el laboratorio. (Pedroza
2009)
c. Siembra de las semillas bajo condiciones in vitro asépticas las semillas
retiradas de la capsula y se colectaron en tarros de compota. Luego se
sembraron en los medios de cultivo MS enriquecidos con 3% de sacarosa,
0.1 Gl de myo-inostiol, 10,0 gL de platano y 3,0 Gl de agar. El pH de todos
los medios puede ser ajustado a una presión de 1,06 kg/ litro antes de ser
esterilizados a una presión de 1,06 kg/ cm2
por 20 min. (Pedroza 2009)
d. Incubación de las unidades experimentales. Los cultivos pueden ser
incubados en condiciones ambientales controladas (23, 2 o
C, fotoperiodo de
dieciséis horas de luz y ocho horas de oscuridad, con una intensidad de luz
de 25 µmol/ m por segundo provista por la luz fluorescente y 60% humedad
relativa ) (Pedroza 2009)

4. COTIZACION
DETALLE UNIDAD CANTIDAD VALOR UNITARIO VALOR TOTAL
Vitrina Un 1 40000 40000
Agar nutrivo Gr 10 gr 500 500
Platano Un 2 1500 3000
Agua destilada ml 90 2000 2000
Azucar gr 10 200 200
Vitamina B1 un 10 600 6000
Total 51700

5. PROTOCOLO PARA FUNCIONAMIENTO DE CABINA DE FLUJO LAMINAR
Para iniciar
Conectar a una fuente de 220 voltios.
Poner en marcha la cabina durante 5-10 minutos, a fin de purgar los filtros y lavar
la zona protegida.
Comprobar que el manómetro situado en la parte superior del frontal se estabiliza
e indica la presión adecuada.
Apagar la luz ultravioleta (si está encendida) y encender la luz fluorescente.
Limpiar la superficie de trabajo con un producto adecuado (ej. alcohol).
Antes y después de haber trabajado en una cabina se debe lavar con cuidado las
manos y brazos, prestando especial atención a las uñas.
Se aconseja emplear batas de manga larga y guantes.
Durante la manipulación
Todo el material a utilizar se sitúa en la zona de trabajo antes de empezar. De esta
forma se evita tener que estar metiendo y sacando material durante el tiempo de
operación.
Se recomienda haber descontaminado el exterior del material que se ha
introducido en la cabina.
Ese se coloca con orden lógico de manera que el material contaminado se situa
en un extremo de la superficie de trabajo y el no contaminado ocupa el extremo
opuesto de la misma.
En general se recomienda trabajar a unos 5-10cm por encima de la superficie y
alejado de los bordes de la misma.
Una vez el trabajo haya comenzado y sea imprescindible la imprescindible la
introducción de nuevo material e recomienda esperar 2-3 minutos antes de
reiniciar la tarea. Así se permite la estabilización del flujo del aire. Es conveniente
recordar que cuanto más material se introduzca a la cabina la probabilidad de
provocar turbulencias de aire se aumenta.
Mantener al mínimo la actividad del laboratorio en el que se localiza la cabina en
uso, a fin de evitar corrientes de aire que perturben el flujo. El flujo laminar se ve

6. fácilmente alterado por las corrientes de aire ambientales provenientes de puertas
o ventanas abiertas, movimientos de personas, sistema de ventilación del
laboratorio.
Evitar los movimientos bruscos dentro de la cabina. El movimiento de los brazos y
manos será lento, para así impedir la formación de corrientes de aire que alteren
el flujo laminar. 8. Al igual que en el resto del laboratorio, no debe utilizarse el
mechero Bunsen, cuya llama crea turbulencias en el flujo y además puede dañar
el filtro HEPA.
Cuando deban emplearse asas de platino es aconsejable el incinerador eléctrico
o, mejor aún, asas desechables.
Si se produce un vertido accidental de material biológico se recogerá
inmediatamente, descontaminado la superficie de trabajo y todo el material que en
ese momento exista dentro de la cabina.
No se utilizará nunca una cabina cuando esté sonando alguna de sus alarmas.
Para finalizar
Limpiar el exterior de todo el material que se haya contaminado.
Vaciar la cabina por completo de cualquier material.
Limpiar y descontaminar con alcohol etílico al 70% o producto similar la superficie
de trabajo.
Dejar en marcha la cabina durante al menos 15 minutos.
Conectar si fuera necesaria la luz ultravioleta (UV). Conviene saber que la luz UV
tiene poco poder de penetración por lo que su capacidad descontaminante es muy
limitada. (Universidad de Pamplona)

7. BIBLIOGRAFÍA
Universidad de Pamplona, Centro de Preparación de Medios Microbiología,
Manual de Funcionamiento Cabina de Flujo Laminar.
Pedroza, J. A. (2009). Efecto de carbón activado, acido indolactico (AIA) y
bencil animo purina (BAP) en el desarrollo de protocolo de Epidendrum
elongatum Jacq bajo condiciones in vitro.