Microbiología

1. INTRODUCCION
En Microbiología es importante recordar la necesidad de una pulcra y esmerada limpieza
del material. Así mismo, es muy importante la recuperación del material reciclable y la
eliminación del material desechable.
Todos los objetos sucios o contaminados deben recogerse en recipientes adecuados
provistos de tapa. El material de vidrio, tubos, matraces y pipetas, se separa del resto del
material recogiéndose en un contenedor vertical u horizontal lleno de una solución
desinfectante, como por ejemplo una solución diluida de lejía, en la que permanecerá
antes de su lavado durante 24 horas.
Como los objetos contaminados contienen, con frecuencia, cantidades importantes de
materia orgánica (procedente de los medios de cultivo) que protegen a los
microorganismos de los agentes físicos o químicos utilizados en la descontaminación de
los mismos, no pueden asegurarse la total destrucción de las formas vegetativas y mucho
menos de las esporas. Por ello se recomienda utilizar mayores concentraciones de
desinfectante y tiempos más largos de tratamiento que para la desinfección o la
esterilización de material limpio.
Generalmente se utiliza la autoclave para que la descontaminación de instrumentos,
equipos y material que sean estables al calor, así como de material desechable. A tal
objeto se coloca este material en recipientes adecuados y se introducen en la autoclave
sometiéndolos a la acción del vapor de agua a una atmosfera de sobrepresión de (121 °
C) en ciclos más prolongados de lo habitual (1 hora en lugar de 30 minutos).
Una vez efectuado este tratamiento se procede a su lavado para eliminar toda materia
extraña, sumergiendo el material en agua caliente jabonosa o utilizando detergentes,
mezcla crónica o cualquier otro procedimiento enérgico, tanto mecánico como químico.
Se aclara bien con abundante agua y se deja escurrir y secar a temperatura ambiente. En
el caso de las pipetas, y antes de ser lavadas, debe extraerse con ayuda de un alambre o
pinzas especiales, el trozo de algodón que tienen en la boquilla.
Algunos de los objetos sucios y contaminados (portaobjetos, pipetas, etc.), después de
lavados, se sumergen en una mezcla sulfocrómica donde se dejan 24 horas al cabo de las
cuales se lavan con y se dejan escurrir. Los portaobjetos y cubreobjetos se secan con un
paño de hilo limpio, procurando que no queden hilazas sobre la superficie.

2. El material que contiene (tubos de plástico, jeringas, etc.) se trata con distintas soluciones
desinfectantes como hipoclorito sódico, formol, etc., pero debe recordarse que se utilizan
a concentraciones superiores a las utilizadas con otros fines.
I. OBJETIVO:
Conocer la importancia de la esterilización y familiarizarse con el manejo de los
procedimientos más frecuentes utilizados para llevar a cabo
II. MATERIAL Y METODO:
Material.
 Mecheros, horno de aire caliente. Autoclaves, equipos de filtración y
materiales a tratar.
Método.
El método más comúnmente empleado para destruir los microorganismos es el calor,
entre otras razones porque es el más económico y el más fácil de controlar. El calor
utilizado con este fin puede aplicarse en forma de calor seco o de calor húmedo. El calor
seco destruye los microorganismos por efectos de oxidación y se requieren temperaturas
menores, ya que la presencia de agua acelera la rotura de los puentes de hidrogeno
responsables de la estructura terciaria de las proteínas haciendo que estas se
desnaturalicen y pierdan por tanto su funcionalidad.
La esterilización por calor seco puede hacerse por flameo o mediante hornos de aire
caliente
1. Flameado.
Se empieza por llenar el mechero bunsen con el ron de quemar para luego poner el hilo
de pabilo, prendemos el mechero bunsen y colocamos directamente al fuego los hilos
de siembra, pinzas y el asa de drigalsky (antes rociar con alcohol de 96°), hasta que
estos estén al rojo vivo.

3. 2. Esterilización por aire caliente.
 Lo primero que se debe hacer es lavar con detergente los materiales de
laboratorio como (pipetas, tubos de ensayo, placas preti y probetas).
 Luego llevaremos los materiales de laboratorio al horno de calor seco para que
los materiales estén completamente libre de agua.
 Después que los materiales de laboratorio estén secos se envolverán con papel
estraza, tapamos las boquillas de la pipeta con algodón, los envolvemos con
papel estraza y rotulamos la pipeta, segundo envolvemos las placas Petri de 2
en 2 con papel estraza. Para los tubos de ensayo tapamos las boquillas con
algodón y luego las envolvemos con papel estraza (se puede envolver 5 o 6
tubos de ensayo)

4.  Luego de ser envuelto los materiales llevaremos a un horno de calor seco para
esterilizar los materiales, tiene que estar a una temperatura de 180° durante 2
horas.

5. 3. Ebullición: El agua hirviendo (100°C) tiene acción limitada, ya que aplicada durante 10
minutos va a destruir las formas vegetativas de los microorganismos, pero las endosporas
bacterianas pueden sobrevivir incluso a tratamientos prolongados.
Se podría utilizar el baño maría o baño de agua hirviendo (solo con fines de desinfección
en el laboratorio), cuando no se necesita alcanzar la esterilidad o cuando no se dispone de
otros métodos mejores, tanto para material (pinzas, tijeras, escalpelos, etc.) como para
medios de cultivo que no puedan esterilizarse en autoclave.
4. Vapor fluente: Esta técnica se emplea con frecuencia para esterilizar medios de cultivo
que no se puedan someter a una temperatura superior a 100°C sin que pierdan alguna de
sus propiedades, como leche, azucares, suero, etc. Se utiliza una autoclave a presión
atmosférica, con la espita abierta, donde nunca se superan los 100 ° C y se realiza el
proceso durante tres días consecutivos, dejándose a temperatura ambiente en los
intervalos entre dos tratamientos. La muestra se somete a calentamiento (100°C) durante
30-45 minutos destruyéndose en este proceso las formas de vegetativas, pero no las
endosporas termo resistente. Si estas se encuentran presentes en la muestra germinan
después del calentamiento y estas formas vegetativas serán destruidas en los siguientes
ciclos. Este método de esterilización se denomina también esterilización fraccionada o
tindalización.
5. Vapor saturado a presión: La esterilización por esta técnica utiliza vapor de agua
saturado que se somete a una atmosfera extra de presión sobre la presión atmosférica
normal, elevándose con ello el punto de ebullición del agua de 100°C a 121°C y
consiguiéndose la destrucción de todos los microorganismos (salvo los termófilos
extremos) en un tiempo de 15 a 20 minutos. Esta temperatura es también necesaria para
la destrucción de las endosporas bacterianas, que presentan una alta resistencia térmica y
que pueden sobrevivir, como ya se ha indicado, a 100°C durante horas. El vapor de agua
difunde por osmosis a través de las membranas de las esporas, coagulando su
protoplasma, fenómeno que se acentúa si el vapor es saturado y a sobrepresión. Esta
técnica de esterilización requiere el uso de autoclave.
6. La autoclave permite elevar la presión una o dos veces atmosferas sobre la presión
atmosférica, elevándose con ello la temperatura de ebullición del agua que se encuentra
en su interior.
Consta de un recipiente metálico, generalmente de acero inoxidable, similar a una gran
olla, en cuyo interior se introduce el material a esterilizar que se coloca sobre una rejilla

6. o placa agujereada. Después de cerrar cuidadosamente la tapa, se conecta la fuente de
calor y comienza a elevarse la temperatura en su interior. La salida continua del chorro
de vapor a través de la válvula nos indica que el aire contenido en el interior de la
autoclave ha sido eliminado. La eliminación de este aire es importante ya que la difusión
del calor entre el vapor de agua y el aire es pobre, por lo que no alcanzará la temperatura
esperada a la presión elegida y no se conseguirá la esterilización.
La válvula se cierra cuando solo sale vapor de agua y, a partir de ese momento comienza
a elevarse la presión hasta una atmosfera sobre la presión normal, elevándose como
consecuencia la temperatura hasta 100°C y no la presión la que destruye los
microorganismos.
Si se esterilizan volúmenes grandes de líquidos es necesario mantener el material en la
autoclave durante periodos de tiempo más prolongados, pues se tarda más en alcanzar los
121°C en el centro de un gran volumen.
Una vez transcurrido el tiempo necesario, se apaga la autoclave y se deja descender la
temperatura hasta que el indicador marque menos de 80°C, que será cuando la presión
haya descendido hasta presión atmosférica. Se abre ligeramente la espita para comprobar
que no quede vapor a presión en el interior y ya se puede proceder a retirar todo el material
esterilizado, dejándolo enfriar a temperatura ambiente.
La autoclave se utiliza se utiliza para esterilizar medios de cultivo, instrumentos, ropas,
soluciones, jeringas, etc., que puedan soportar altas temperaturas y una atmosfera de
sobrepresión.
Para la esterilización de materiales líquidos sensibles al calor, como algunos medios de
cultivo, soluciones de antibióticos, enzimas, vacunas, etc., o también para gases, se utiliza
la filtración. En la esterilización por calor se destruyen los microorganismos del medio,
mientras que la filtración los retira de una forma mecánica, en lugar de destruirlos.
La filtración es el paso de un líquido o gas a través de un material filtrante, con poros lo
suficientemente pequeños como para retener células microbianas.
Los filtros que se utilizan en la actualidad son, generalmente denominados filtros de
membrana y esta integrados por pequeñas piezas de material sintético, generalmente
acetato de celulosa o policarbonato, que pueden tener poros con tamaños de 0.22 y 0.45
𝜇m, diseñados para retener bacterias. La acción combinada de los poros, la trama del filtro

7. y la naturaleza química del material utilizado retiene los microorganismos, pero no el
fluido. Los fluidos que se van a filtrar pasan a través de la membrana con la ayuda del
vacío generado, por ejemplo, con una bomba de vacío.
Tanto los filtros de membrana como los equipos de filtración con los que estos se usan
deben ser esterilizados por otros métodos, generalmente vapor saturado a presión en la
autoclave. Los virus y algunas bacterias de tamaño muy pequeño como, por ejemplo, los
microplasmas, no son retenidos por los filtros habituales.
III. RESULTADOS
 En esta práctica no se obtuvieron resultados tangibles, ya que no hubo una
verificación de la esterilización. Sin embargo, se espera que el material haya
quedado totalmente libre de todas las formas de vida (incluyendo esporas
bacterianas), tanto por el método flameado y por calor seco.
 Se debe utilizar el papel correcto, de lo contrario se romperá y el material no
queda esterilizado.
 Si el material no se envuelve correctamente, este no quedará estéril y se tendrá
problemas al momento de los resultados del cultivo.
IV. COMENTARIO
La importancia de la practica en el laboratorio no solo se basó en la
esterilización y desinfección de materiales, sino de comprender la importancia
de los microrganismos y cómo influyen en nuestras vidas. Los grandes
hombres que se adentraron a investigar este mundo oculto nos proporcionaron
todos sus descubrimientos por los cuales dedicaron prácticamente toda su
vida. Gracias a estas técnicas de esterilización y desinfección, tanto biólogos,
químicos, científicos y estudiantes en general han podido identificar, clasificar
y estudiar estos microorganismos.
V. CONCLUSIONES
 Comprendimos los métodos de esterilización, ya sean físicos o químicos.
 Al término de esta práctica he aprendido que el empacado del material de
laboratorio para su esterilizado es de suma importancia, ya que
debemos protegerlos de la contaminación por suciedad, polvo y bacterias para
que al emplearlos una vez ya esterilizados tengamos un óptimo resultado en
nuestros trabajos de laboratorio.

8.  Logramos como prevenir el ingreso de microorganismos en los materiales
esterilizados ya que podrían crecer otros microorganismos no requeridos.
VI. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
 MANRIQUE RUBEN M.2004- “Manual de laboratorio”-5ta edición-Omega-
TINGO MARIA – PERU.
 HANZ ZINSSER -2000 –Microbiología -18 Edición – Medica Panamericana-
MEXICO.
 RAMÍREZ-GAMA, R. M., B. LUNA MILLÁN, O. VELÁSQUEZ
MADRAZO, L. VIERNA GARCÍA, A. MEJÍA CHÁVEZ, G. TSUZUKI
REYES, L. HERNÁNDEZ GÓMEZ, I. MÜGGENBURG, A. CAMACHO
CRUZ Y M DEL C. URZÚA HERNÁNDEZ-2006-Manual de Prácticas de
Microbiología General-5ª edición- UNAM. MEXICO.
DIFERENCIAS ENTRE ESTERILIZACION, DESINFECCION Y ANTISEPSIA
 ESTERILIZACION
Es la eliminación completa de toda forma de vida microbiana y sus formas de
reproducción incluyendo las esporas. Puede conseguirse a través de diferente
tipo de métodos; físicos, químicos y gaseosos.
Métodos físicos:
 Calor seco: Pupinel.
Métodos Químicos y gaseosos:
 Óxido de Etileno.
 Gas de Formaldehído.
 Plasma de Peróxido de Hidrógeno.
 Radiaciones ionizantes.
Métodos de controles de esterilización:
 Monitores físicos.
 Indicadores químicos.
 Indicadores biológicos.
 Calor Húmedo a presión: Autoclave.

9.  DESINFECCION
En este proceso se eliminan los agentes patógenos reconocidos, pero no
necesariamente todas las formas de vida microbianas. Es un término relativo,
donde existen diversos niveles de desinfección, desde una esterilización
química, a una mínima reducción del número de microorganismos
contaminantes. Estos procedimientos se aplican únicamente a objetos
inanimados. Alcohol.
 Hipoclorito (desinfección suelos, mostradores).
 Compuestos iodados al 7,5% (suelos y mostradores de color oscuro).
 Glutaraldehído al 2% (lentes e instrumental delicado).
 ANTISEPSIA
Es el proceso que, por su baja toxicidad, se utiliza para la destrucción de
microorganismos presentes sobre la superficie cutáneo-mucosa. Este término
tampoco implica la destrucción de todas las formas de vida. Existen agentes
como los alcoholes que son antisépticos y desinfectantes a la vez. Dado que el
tema que se está abordando es: métodos para controlar o destruir distintas
poblaciones bacterianas; es necesario saber previamente la cinética de dicha
destrucción, es decir de qué modo muere una 2 población, y que parámetros
inciden sobre este efecto.
CINETICA DE DESTRUCCION DE LAS POBLACIONES BACTERIANAS

10. Cuando una población bacteriana es expuesta a un agente letal físico o químico, se
produce una progresiva reducción del número de sobrevivientes, de modo que la curva
que representa el número de sobrevivientes en función del tiempo, tiene forma
exponencial decreciente
Si graficamos la curva en una escala semi logarítmica, obtenemos una recta. En la misma,
la pendiente (negativa) representa la velocidad de muerte de la población. Resulta claro
que cuanto mayor sea el valor absoluto de la pendiente, los microorganismos morirán más
rápido.
Este comportamiento debe tenerse presente siempre, más aún en las técnicas de
esterilización, donde el tiempo de exposición al agente es fundamental para alcanzar el
objetivo buscado.
El efecto letal de un agente (por Ej.: el fenol) cambia en relación a las distintas cepas,
incluso dentro de una misma especie bacteriana. Existen además un conjunto de
condiciones fundamentalmente ambientales que afectan la cinética de destrucción.
Dentro de estos se encuentran:
1) concentración del agente
2) tiempo de exposición
3) pH del medio
4) temperatura
5) presencia de materiales extraños
6) resistencia propia del microorganismo
7) número inicial de la población