Aislamiento y cultivo de hongos filamentosos y levaduras

1. Aislamiento y cultivo de
hongos filamentosos y
levaduras

2. ¿Qué son?
 Microorganismos:
 Eucarióticos
 Heterótrofos
 Quimiooganotróficos
 Respiración facultativa (aerobios o anaerobios)

3. Hongos filamentosos
 Diámetro: 1-30µm
 Pared celular constituida por polisacáridos
 Forman filamentos o hifas
 Crecimiento apical

5. Micelios
 Septado: Aquellos que presentan “tabiques”.
 Continuo: Sin “tabiques”.
 Pigmentado: Acumulan pigmentos en el micelio. (carotenoide o fuliginoso)
 Hilano: El hongo no produce pigmento

6. Reproducción
Asexual:
 Fragmentación
 Gemación
 Formación de esporas
Sexual:
 Hifas homotálicas en hongos hermafroditas
 Hifas heterotálicas de hongos dioicos

7.  Ubicuos.
 Saprófitos.
 Simbiontes.
 Parásitos.
 Hiperparásitos.
 Micosis.
 Forman dos ramas separadas (según Woese):
 Myxomicota.
 Eumicota.
 Hongos dimórficos.
Otras características

8. Levaduras
 Crecimiento isodiamétrico.
 Gemación.
 Colonias con aspecto húmedo y consistencia cremosa.
Diferentes clases de hongos según el tipo de reproducción sexual
Clase Tipo de espora
Zygomycetes Zigosporas
Ascomycetes Ascosporas
Basidiomycetes Basidiosporas
Deuteromycetes No producen esporas de origen sexual

9. Importancia
 Enfermedades cutáneas, subcutáneas y sistémicas.
 Patógenos de flora y fauna.
 Elaboración de pan, cerveza, vino, queso, etc.
 Productores de micotoxinas y aflatoxinas.
 Sintetizan ácidos orgánicos, cetonas, enzimas, vitaminas, etc.
 Existen comestibles, tóxicos y alucinógenos.

10. Métodos

11. I. Aislamiento por dilución.
10^-1 10^-2 10^-3 10^-4 10^-5
suelo Gelosa Sabouraud
x3
Rosa de Bengala
x3
0.1 mL 0.1 mL
Incubar
28 °C
48-72 h.
Calcular UFC/g suelo.
Observar 2 colonias y
describir morfología
colonial.
Preparación en fresco con
una gota de azul de algodón
lactofenol.
1 gota
Examinar a seco
débil y seco
fuerte.
Observar:
• Diámetro de hifas.
• Micelio septado o cenocítico.
• Hifas pigmentadas o hialinas.
• Tipos de esporas asexuales.
Azul de algodón
lactofenol

12. Agar Sabouraud Agar Rosa de Bengala
• Medio enriquecido y selectivo.
• Enriquecido por peptona y glucosa.
• Selectivo por pH y clorafenicol que inhibe a la mayoría de
las bacterias.
• pH acido (5.6 aproximadamente)
• Medio enriquecido y selectivo.
• Enriquecido por peptona y glucosa.
• Selectivo por pH y clorafenicol que inhibe a
la mayoría de las bacterias.
• pH acido (3.6 aproximadamente)
• El colorante rosa de bengala se incorpora de
forma intracelular restringiendo el tamaño de
las colonias de rápido crecimiento.

13. II. Preparación de microcultivos.

14. III. Cultivo y descripción de la
morfología colonial de levaduras.
Pichia sp.
Saccharomyces
cerevisiae
Gelosa Sabouraud
Incubar
28 °C
24-48 h
Observar crecimiento y
morfología colonial.

15. Saccharomyces sp. Agar Sabouraud Dextrosa

16. IV. Descripción de la morfología colonial de los
hongos filamentosos.
Textura o aspecto Superficie Color Pigmento difusible en el medio
Algodonosa o lanosa Plana Anverso (superficie o porción del
área)
Vellosa Acuminada
Aterciopelada Plegada
Granulosa Cerebriforme Reverso (micelio vegetativo en el
medio)
Pulverulenta Crateriforme
Cremosa Umbilicada
Geotrichum sp. Agar Sabouraud
Dextrosa
Penicillum sp. Curvularia sp. Agar Sabouraud

17. V. Observación de las ascosporas
(esporas sexuales).
Teñir con la técnica de Ziehl-Neelsen
modificada.*
Fijar al calor.
*Decolorar con alcohol acido láctico, no con alcohol acido.
Nigrosina
1 gota
x2
Saccharomyces sp.
Pichia sp.
Dejar secar al aire.
Observar a
inmersión.

18. Morchella elata

19. VI. Observación de zigosporas (esporas
sexuales).
PDA
Zygorrhynchus sp.
Incubar
28 °C
72-96 h
A seco débil buscar
cigosporas formadas
por la unión de dos
hifas.

20. Rhizopus sp.

21. VII. Observación macroscópica de un
basidiomiceto y microscópica de las esporas
sexuales.
Basidiocarpo