Este documento describe diferentes métodos para optimizar la expresión de proteínas en plantas, incluyendo la transformación genética estable, la expresión transitoria mediante vectores virales y la agroinfiltración. Se discuten modificaciones estructurales como la eliminación de secuencias ricas en timina y sitios de splicing, así como la adición de intrones, que pueden mejorar la eficiencia al procesar y exportar los transcriptos al citoplasma, llevando a un mayor número de células capaces de iniciar la replicación viral. Finalmente, se estim

1. Optimización de expresión de
proteínas en plantas

2.  Transformaciones
 Expresión
genéticas estables
transitoria usando vectores virales
Infección limitada de genes medianos o
grandes

3. Agroinfiltración mediante el uso de TMV conteniendo GFP
en hojas de N. benthamiana
UTR 3’
Deleción
de MP
Solo entre el 0.6-1.6 % de las células(protoplastos) presentaron
replicación activa

4. •Posibles causas
Virus de RNA como TMV se replican en
citoplasma y no en núcleo
Tamaño del transcripto…..1-2kb en plantas y 7.6
del TMV conteniendo GFP
Genes en plantas poseen intrones

5.  Hipótesis:
Modificaciones en las construcciones que puedan
mejorar la eficiencia con la se procesan y exportan los
transcriptos, al citoplasma, podría llevar a un aumento
en el numero de células que puedan iniciar la replicación
viral.

6. Eliminación de secuencias ricas en timina
y sitios de splicing
Medición de
fluorescencia de
GFP
Porcentaje de
protoplastos con
iniciación de
replicación viral

7. Adición de intrones
Construcciones con mas de 12
intrones, la iniciación de la
replicación viral empieza en
casi todas las células
(DO600=0.7).
GFP

8.  Aproximadamente
8 células de A.
tumefaciens son necesarias por evento de
expresión de GFP en N. benthamiana
 23
para tabaco
Tabaco
N.benthamiana

9. Reemplazo de GFP(0.7kb) por GUS( 1.8kb)
en construcciones pICHI16707 y
pICHI18711

10. Haciendo unos cálculos:
1 Lt. de A. tumefaciens
alcanzaría (dil 10-3 )
para tratar 700-1000 kg.
de N. benthamiana y
producir entre 2.4 y 4
kg de proteína
recombinante.

11. _Las modificaciones estructurales podrían aplicarse a otros
vectores virales
_Magnifection da muchas ventajas:
.los vectores son menos afectados por el tamaño del transgen ya
que no tiene que moverse sistémicamente.
.la infección simultanea hace a la expresión rápida y sincronizada
en toda la planta
.no se pierde energía en la producción de proteínas de cápside

12. MUCHAS
GRACIAS
Julia Del Cogliano
Julidelco_94@hotmail.com