1. SEMINARIO BIOLOGIA
MOLECULAR
Characterization of a Vancomycin-
resistant Enterococcus faecium Outbreak Caused by 2
Genetically Different Clones at a Neonatal Intensive Care
Unit .
LAURA ARANGO BEDOYA
LAURA BERMEO
TERCER SEMESTRE
MEDICINA
UPB
2012

2. INTRODUCTION.
ENTEROCOCCUS:
Enterococcus are facultative anaerobic organisms and Gram positives.
They are organized in chains or pairs.
Catalase –
Subdivided into groups by antibodies that recognize surface antigens.
The most important groups are A, B, and D
The hemolysis reaction is important for the classification.

3. INTRODUCTION.
GENDER FAECIUM:
It can be commensal (innocuous) in
the human intestine.
It may also be pathogenic, causing
diseases such as:
• neonatal meningitis.
•urinary tract infection
•bacteremia
•endocarditis
•diverticulitis

4. INTRODUCTION.
VANCOMYCIN
Vancomycin is used to treat colitis (inflammation of
the intestine).
Is in a class of medications called glycopeptide
antibiotics
It works by killling bacteria in the intestines. (will not
function in any other part of the)
.

5. INTRODUCTION.
Vancomycin-resistant Enterococcus
Vancomycin-sensitive enterococci typically obtain new DNA in the form of
plasmids or transposons which encode genes that confer vancomycin resistance.
High-level vancomycin-resistant E. faecalis and E. faecium
Six different types of vancomycin resistance are shown by enterococcus : Van-A,
Van-B, Van-C, Van-D, Van-E and Van-F. Of these, only Van-A, Van-B and Van-C
have been seen in general clinical practice.
The mechanism of resistance to vancomycin found in enterococcus involves the
alteration to the terminal amino acid residues of the NAM/NAG-peptide subunits,
under normal conditions, D-alanyl-D-alanine, to which vancomycin binds.
This loss of just one point of interaction results in a 1000-fold decrease in affinity

6. GENERAL OBJETIVE
The main aim of the study was determined from two cases, the ways
in which the streptococcus can become resistant to vancomycin, the
risk factors to suffer the infection, the main causes of transmission and
measures for controlling the spread of VRE.

7. MATERIALES Y METODOS
DATOS GENERALES
Este estudio se llevó a cabo en un hospital universitario de 1.000
camas
La sala NICU tiene 2 habitaciones con 26 camas.
Compuesto por un pediatra, 5 residentes y 29 enfermeras que prestan
atención a los pacientes críticamente enfermos de edad inferior o igual a
6 meses.
Todos los trabajadores de la salud práctican las precauciones
estándar.
 En julio de 2010, VRE fue aislado de una muestra de esputo de un
recién nacido prematuro (caso índice 1). Posteriormente, el ERV se aisló
de un cultivo de orina de otro neonato (caso índice 2).

9. CASE 1
Un bebé de 780 g (primero en nacer de una pareja de gemelos).
Parto normal vaginal espontáneo (NSVD), madre de 21 años de
edad, semana 25 de gestación.
Puntuaciones de Apgar fueron de 2 y 3 a los 1 y 5 minutos,
respectivamente.
Recibió tratamiento con surfactante (complicaciones de la
prematuridad):
• Dificultad respiratoria que requería ventilación mecánica y la
oxigenoterapia (ampicilina-sulbactam ).
El día 5 en la UCIN, íleon mostraba signos enterocolitis
necrotizante (NEC). (rayos x)
En el día 8, se sometió a una resección del intestino delgado.

10. CASE 1
Día 15, desarrolló hemorragia pulmonar y hemorragia intraventricular.
En el dia 31: esputo (VRE +).
(Ampicillina-sulbactam ceftriaxona y linezolid. )
En el dia 36: en el cultivo de esputo se detuvo el crecimiento de VRE :
VRE + muestras de rectales.
 En el dia 77: Empieza entrenamiento alimienticio
•Se observa regurgitación
•Pequeña reseccion del intestino.
En el dia 135::
• Estudio por imagenes muestra que NEC empeoro.
• Acidosis metabolica y neumonia.
En el dia 142: muere (fallo multisistemico y sepsis).

11. CASE 2
.
2300 gr.
 G1P0 de 27 años de edad, a las 36 semanas de gestación
por NSVD..
 La Puntuación de Apgar fue 8 y 9 a 1 y 5 minutos,
respectivamente. .
Su condicion de salud durante la primera semana no tuvo
complicaciones
En el 7 º día: letargo, ingesta oral deficiente (meningitis
aséptica, coagulación intravascular diseminada, e ictericia
neonatal)
Fue admitido en la UCIN: vancomicina y ceftriaxona (7 días).
En el dia 6(interno): bradicardia y aumento de los niveles de
las enzimas cardiacas= 19% (miocarditis)

12. CASE 2
Dia18
Dia 23
Muestras de orina y rectales (VRE +)
La paciente recibió inicialmente vancomicina y
ceftriaxona ampicillina-sulbactam.
Los hemocultivos y cultivos de orina fueron negativos
después de 1 semana de tratamiento y durante 1 semana
después de la interrupción
Condición clínica del paciente mejoró, y no se observaron
complicaciones.
 Dia 28: El paciente fue dado de alta, y la ecocardiografía a
los 2 meses reveló una fracción de eyección normal (61%).

13. MATERIALES Y METODO
INTERVENCIÓN.
Equipo especial creado para coordinar la gestión de la crisis.
Vigilancia activa de las muestras de los 26 pacientes de NICU, 42
trabajadores de la salud y sus entornos.
Todos los pacientes que fueron identificados con VRE se pusieron en
cohortes estrictas.
 Medidas de control de infecciones reforzadas y áreas de los pacientes se
limpiaron a fondo.
La selección se repite cada semana hasta que se presenten pacientes
VRE+.

14. MATERIALES Y METODO
• PCR: Reacción en cadena de la polimerasa
 Objetivo: obtener un gran número de copias de un fragmento
de ADN particular, partiendo de un mínimo. (ampliar)
 Utilidad: amplificación resulta mucho más fácil identificar :
• virus
• Bacterias Termociclador
• cadáveres
• Hacer investigación científica sobre el ADN amplificado.
 Fundamento: la propiedad natural de los ADN polimerasas para replicar
hebras de ADN:
• Ciclos de altas y bajas temperaturas alternadas para separar las hebras
de ADN recién formadas entre sí tras cada fase de replicación.
• Dejar que vuelvan a unirse las polimerasas para que vuelvan a duplicarlas.

15. MATERIALES Y METODO
2. PFGE
Electroforesis en gel de campo pulsado.
Separación de las moléculas de ADN la aplicación
de un campo eléctrico que cambia periódicamente la
dirección de una matriz de gel.
 UTILIDAD:
• huella genética.
• Estudios epidemiológicos de los organismos patógenos.
•Vincular el medioambiente o alimentos con infecciones clínicas
FUNDAMENTO:
•Los trozos más grandes de ADN serán más lentos para alinear
su carga cuando la dirección del campo cambia, mientras
que piezas más pequeñas serán más rápidas.
•En el transcurso del tiempo con el cambio constante
de direcciones, cada banda se empieza a separar más y más .

16. MATERIALES Y METODO
3. MLST
Multilocus sequence typing
Es una técnica para la tipificación de múltiples loci.
El procedimiento caracteriza aislamientos de especies
bacterianas usando las secuencias de ADN de
fragmentos internos de múltiples genes de limpieza
FUNDAMENTO: amplificación de PCR seguida de la
secuenciación del ADN .

17. Results

18. Pulsed-field gel electrophoresis
of vancomycin-resistant

19. Discussion

20. Discussion

21. Personal conclusions

23. Laura arango

24. Laura Bermeo