Este documento trata sobre los mecanismos de resistencia microbiana y la detección fenotípica en la práctica clínica para gram negativos y positivos. Explica los principales mecanismos de resistencia como impermeabilidad, inactivación enzimática, mutaciones y transportadores. También describe métodos de detección como cultivos, pruebas de sensibilidad y biología molecular para identificar resistencias a antibióticos importantes. El documento enfatiza la necesidad de entender estos mecanismos para combatir la creciente resistencia micro

1. MECANISMOS DE RESISTENCIA MICROBIANA Y
DETECCION FENOPICA EN LA PRACTICA CLINICA
GRAM NEGATIVOS
M. Sc. Roberto Ventura Flores
Biólogo – Microbiólogo
tiernobacilo@hotmail.com
Tu F-, yo F+

2. ¿QUE ES RESISTENCIA?
Capacidad de un Microorganismo de sobrevivir y
multiplicarse en presencia de antibiótico.
Se estima que hay 10 veces mayor bacterias que células humanas. Por lo
tanto, en la mayoría de los casos, los patógenos tienen que invadir nichos que
ya están ocupados por muchas bacterias residentes perfectamente adaptadas.
En el tracto digestivo, residen un vasto ecosistema microbiano heterogéneo
que comprende hasta 1014 bacterias de más de 400 especies
Trends in Microbiology July 2011, Vol. 19, No. 7

3. GRAM - NEGATIVE CELL WALL
Nature Reviews l Drug Discovery
Passive
transporter
Active
transporter

4. Infect Chemother. 2012 Aug;44(4):263-268. Korean.
Introduction of new clases of antibiotics for human 1930 to 2010
(Beta-lactams include Three groups: penicillins, cephalosporins,
and carbapenems)
1928

5. Sources and movement of antibiotic resistance genes in
the environment.
Genes de resistencia
a tetraciclina
Nature. 2011 Aug 31;477(7365):457-61

6. Transportador
Fusión
Canal
IMPERMEABILIDAD
EFLUJO
PBP
INACTIVACION ENZIMATICA
MECANISMOS DE RESISTENCIA A BETA LACTAMICOS
Omp F

8. EVOLUCIÓN DE BETA LACTAMICOS Y BETALACTAMASAS
PENICILINAS CEFALOSP.
1° GEN
CEFALOSP.
2° GEN
MONOBAC-
TAMES
CEFALOSP.
3° Y 4° GEN
CARBAPENEMES
Β-lactamasa espectro reducido Hiperproducción + impermeabilidad CLAV
Β-lactamasa espectro extendido ( BLEE) CTXM+ IMPERMCLAV
Cefalosporinas tipo Amp C (BLEE) HIPERPRODUCCIÓN + IMPERMEA CLOX/APB
Carbapenemasas EXTREMAS (KPC, GES-S y otros alelos)

12. Transportador
Fusión
Canal
EFLUJO
Hidrofìlico
Hidrofóbico
MERO
C3G, C4G
PIP, AZT
FQ , CMP
TMP
Sin carga
NAL, TET
IMI

15. OprD OprD
+ + +
- - - -

17. KPC

19. ¿TODO ESTA DEMOSTRADO?
SÍ.
Atte.
tiernobacilo@Hotmail.com
GRACIAS
Está demostrado que desconocemos
muchas cosas

20. M.SC ROBERTO VENTURA FLORES
BIOLOGO-MICROBIOLOGO
tiernobacilo@hotmail.com
VISA/ H-VISA /VRSA
MECANISMOS DE RESISTENCIA MICROBIANA Y
DETECCION FENOPICA EN LA PRACTICA CLINICA
GRAM POSITIVOS

27. DISTRIBUCION DE CIMs VAN en VISA-h-VISA-VSSA
Problemática DE VISA/H-VISA
1. DIFICULTAD DE DETECCION
FIG. 1. Frequency distribution of vancomycin MICs in VSSA, HVISA and VISA strain.

29. MICROSCAN
Sistema de Microbiología
PANEL: COMBO 33: cocos Gram positivos

30. BACILOS GRAM POSITIVOS
Enterococcus

32. Principales mecanismos de resistencia a los
antibióticos por Enterococcus
Ahora alta resistencia de los Enterococcus a los B-lactámicos por los PBP5 de baja afinidad

34. Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI 2014)

37. FIN

38. MECANISMOS DE RESISTENCIA MICROBIANA Y
DETECCION FENOPICA EN LA PRACTICA CLINICA
Mycobacterium tuberculosis
M. Sc. Roberto Ventura Flores
Biólogo – Microbiólogo
tiernobacilo@hotmail.com

39. TUBERCULOSIS EN PERU A LA CABEZA DEL CONTINENTE
• Cada 3 a 4 horas alguien enferma de TB en el Perú, y cada día
se reportan 3 muertes a causa de la infección.
• Un enfermo no tratado puede infectar de 10 a 20 personas por
año.
• Somos el tercer país de América con mayor incidencia de TB y
el primero en severidad de las TB resistentes.
• En el siglo XXI es un país en crecimiento, paradójicamente al
mismo tiempo brotan cepas cada vez mas resistentes.

41. TRASMISION DE M. tuberculosis
TB MDR se transmite de la
misma manera que la
TB sensible
NO

42. H y Etionamida
E
Z
R
ACCION DE FARMACOS SOBRE M. tuberculosis
The cell envelope of mycobacteria
β-lactámicos
E
Lipoarabinomanano (LAM)
Virulentos: residuos de manosa
No virulentos: residuos de arabinosa

43. RESISTENCIA EN Mycobacterium tuberculosis
• Mecanismos de generación de resistencias:
– Mutacion
– Transducción
– Transformación
– Conjugación
• El M. tuberculosis solo emplea el primero mutación)
(H)
(R)

45. NT-2013: 4 R3H3

46. Levofloxacina Lfx
Etionamida Eto
Cicloserina Cs
Kanamicina Km
 paciente de 65 años, con alto riesgo de morir por estar
comprometido un 60% de su pulmón y presentar un diagnostico
bacteriológico por tipificación de una tuberculosis atípico.
¿Qué criterios se debe seguir? Si:
a) Paciente se rehúsa a recibir tratamiento
b) Es de baja condición económica
c) Prefiere dar lo poco que tiene como diezmo al pastor evangélico.

47. DIAGNÓSTICO DEL Mycobacterium tuberculosis
 OBSERVACION DIRECTA
-Baciloscopía
CULTIVO
-Lowenstein Jensen
-Ogawa
PRUEBAS DE SENSIBILIDAD TRADICIONALES
-Método de Proporciones
PRUEBAS RAPIDAS
-fenotípicas: MODS, GRIESS
-Genotípicas: Biología Molecular

48. BACILOSCOPÍA: Método de Ziehl Neelsen
• Es la herramienta fundamental rutinaria para el diagnóstico y para
el seguimiento del tratamiento de los pacientes con tuberculosis.
• No tiene alta sensibilidad porque requiere 5000 a 10000
bacilos/mL de esputo para ser positivo.

49. LECTURA DE BACILOSCOPIA
Campo N° 1 ………………….
(cero BAAR)
Campo N° 80 …………………..
(47 BAAR)
Campo N° 100
(cero BAAR)
Resultado …… ¿ ?
Frotis Bueno
SIZE OF 2 x 3 CM

50. Métodos
Aislamiento de Mycobacterium tuberculosis empleando
el Método de Ogawa (INS, 1995; OPS, 2008).
ESPUTO
HIDROXIDO DE SODIO AL 4%
IDENTIFICACION DE CULTIVO
POSITIVO A M. tuberculosis
LECTURA E INTERPRETACION
INCUBACION 37C°/30 DIAS
CULTIVO EN MEDIO OGAWA
ESPUTO: 2 TUBOS
MUESTRA EXTRAPULMONAR: 4 TUBOS

51. Métodos
Identificación de Mycobacterium tuberculosis empleando
el Método de proporciones (Canetti et al., 1963).
CULTIVO DE
M. tuberculosis
DILUCIONES
(10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5, 10-6 )
IDENTIFICACION DE CULTIVO
PANSENBLE
LECTURA E INTERPRETACION
INCUBACION 37C°/30 DIAS
SIEMBRA EN
LOWENSTEIN JENSEN

53. b
Fig.1. Sobrevivencia de cultivo pansensible de M. tuberculosis a
Rifampicina
a. Cultivo de M. tuberculosis pansensible en medio Lowenstein Jensen.
b. Sobrevivencia M. tuberculosis pansensible en medio Ogawa.
C: control, H: isoniacida, R: rifampicina.
a

54. METODO DE GRIESS
Se basa en la determinación de
la actividad de reducción de
nitrato en el cultivo de M.
tuberculosis en medio sólido L - J
conteniendo NaN03 (1 g/l) con y
sin droga.
Cepa M. tuberculosis H37RV,
sensible.
C H S H R
Cepa M. tuberculosis resistente a
H y sensible al resto de drogas.
C H S H R
C H S H R
Interpretación
El reactivo de Griess (HCL+ sulfanilamida
+ n-1- naphthylethylenediamine
dihydrochloride)
Lectura
 Resultado negativo: Sensible (no se
observa cambio de color)
 Resultado positivo: Resistente (se
observa cambio de color de rojo o
violeta intenso)
MDR

55. Método MODS :
(Método Susceptibilidad Directa por
Observación Microscópica)
J. Clinic. Microbiol. p. 1093–1097 Vol. 45, Nº4
Evaluation of Microscopic Observation Drug Susceptibility Assay for detection of Multidrug-Resistant Mycobacterium tuberculosis.
Girum Shiferaw, Yimtubezinash Woldeamanue Mekdes Gebeyehu, Feven Girmachew, Daniel Demessie, and Eshetu Lemma

57. • 2000 A.C. - Come un trozo de esta raíz.
• Año 1000 - Comer esas raíces es una costumbre pagana. Repite esta
plegaria.
• 1850 - Esa plegaria es una nueva superstición. Bebe esta porción.
• 1920 - Esa porción está preparada con aceite de serpiente. Toma esta
pastilla.
• 1945 - Esa pastilla es ineficaz. Toma penicilina.
• 1955 - !Oh!… los microorganismos han mutado. Toma tetraciclina.
• 1960-1999 - Otros 39 «oh»… Toma este antibiótico más potente.
• ±2000 - ¡Los microorganismos nos han vencido! Come un trozo de
esta raíz.
Anónimo

58. «Los microbios siempre tienen la última palabra» (L. Pasteur)
«No siempre son las especies más fuertes, ni las más
inteligentes, las que sobreviven, sino aquellas que mejor
responden a los cambios» (C. Darwin).
FIN