2. La electroforesis es una técnica de separación
que puede ser utilizada con fines analíticos
y que fue introducida por el químico sueco
Arne Tiselius. El interés principal de este
investigador fue la química de las proteínas
séricas
INTRODUCCION
3. Los métodos electroforéticos son de alta sensibilidad eficacia,
poder de resolución y versatilidad
Métodos de separación de:
Proteínas
Ácidos nucleicos
Otras biomoléculas
Permite determinar:
Peso molecular de una proteína
Distinguir moléculas por su carga o su forma
ELECTROFORESIS
4. Es una técnica de separación que consiste en el transporte
de iones a través de una disolución por acción de un campo
eléctrico
Principio teórico
5. PARÁMETROS QUE INFLUYEN EN LA
MOVILIDAD ELECTROFORÉTICA
Tenemos:
Parámetros externos
Campo eléctrico
Temperatura
Parámetros relacionados con el solvente y con el sistema electroforético
Viscosidad
Fuerza iónica
La naturaleza de los iones componentes
El pH
Parámetros relacionados con el soluto
7. La muestra debe situarse en o sobre un medio soporte, principalmente para
evitar perturbaciones mecánicas y corrientes de convección durante la
separación. En algunos soportes (papel o similares) la muestra queda sobre la
superficie y avanza a lo largo de ella, con escasa fricción, por lo que el
mecanismo principal de separación es la magnitud de la carga de cada
componente de la muestra. Otros medios de soporte (“geles”, medios
semisólidos o gelatinosos) están formados por polímeros que forman una malla,
matriz o red tridimensional a través de la cual deben avanzar las moléculas de la
muestra, que queda embebida en el medio de soporte electroforético. Como
consecuencia, la fricción es notable y los factores de forma y tamaño adquieren
una alta relevancia en la separación
Medios de soporte para realizar la
electroforesis
8. Electroforesis de frente móvil
Electroforesis de zona
TIPOS DE ELECTROFORESIS
9. Electroforesis de frente móvil Aquella en la cual las partículas se mueven de forma
libre en el medio en el que se encuentran dispersas. Las sustancias a separar se
introducen en un tubo en forma de U, disueltas en un tampón de pH y fuerza iónica
adecuados. Se colocan los electrodos en sendos brazos del dispositivo, entre los que
se crea un campo eléctrico, provocando que las moléculas de la muestra (por
ejemplo: proteínas) cargadas emigren hacia los electrodos de polaridad opuesta
ELECTROFORESIS DE FRENTE MOVIL
10. La disolución a tratar se aplica como una mancha, o como una banda, y las
partículas migran a través de un disolvente, utilizando además un medio
soporte inerte y homogéneo, tal como el papel o ciertos tipos de geles. Esta
técnica es utilizada para analizar mezclas, para determinar la pureza de
una muestra, para detectar cambios de movilidad o de conformación de
sustancias.
ELECTROFORESIS DE ZONA
