Este documento describe la determinación de proteínas plasmáticas y séricas. Las proteínas plasmáticas incluyen principalmente albúmina y globulinas. Se pueden determinar a partir de plasma o suero mediante electroforesis, la cual separa las proteínas según su carga y tamaño utilizando un gel. Esto permite visualizar las diferentes proteínas y detectar alteraciones como hiper e hipoproteinemias.

1. Determinación de proteínas
plasmáticas y séricas.

2. Las proteínas plasmáticas (pp) son un grupo
heterogéneo de proteínas con diversas funciones,
pesos moleculares y densidades de carga eléctrica,
pero en general se incluyen principalmente en dos
grupos:
albúmina y globulinas (en esta última fracción
están incluidos fibrinógeno, complemento y
anticuerpos, entre otras proteínas).

4. concentración:
La concentración de las proteínas plasmáticas se
obtiene a partir de sangre con anticoagulante;
Las proteínas plasmáticas pueden ser determinadas a
partir del plasma que se encuentra en la parte
superior de un tubo capilar centrifugado para la
determinación del hematocrito (Hto).

5.  Las alteraciones encontradas en las pp son
hiperproteinemias e hipoproteinemias.

6. La concentración de proteínas en el plasma, está en función del:
 equilibrio hormonal
 nutrición
 balance hídrico
 Datos generales del paciente: especie, raza, edad,
sexo; así como los datos de historia clínica y datos de
anamnesis (información sobre el problema actual).

7. Técnica utilizada.
 Electroforesis y desintometria (proteinograma
electroforético).

8. La electroforesis
 Es una técnica para la separación de moléculas según
la movilidad de estas en un campo eléctrico. La
separación puede realizarse sobre la superficie
hidratada de un soporte sólido (p. ej., electroforesis
en papel o en acetato de celulosa), o bien a través de
una matriz porosa (electroforesis en gel), tambien en
disolución (electroforesis libre). Dependiendo de la
técnica que se use, la separación obedece en distinta
medida a la carga eléctrica de las moléculas y a su
masa.

9.  La variante de uso más común para el análisis de
mezclas de proteínas o de ácidos nucleicos utiliza
como soporte un gel.

10.  Al poner la mezcla de moléculas y aplicar un campo
eléctrico, éstas se moverán y deberán ir pasando por
la malla del gel (una red tridimensional de fibras
cruzadas), por lo que las pequeñas se moverán
mejor, más rápidamente.
 Así, las más pequeñas avanzarán más y las más
grandes quedarán cerca del lugar de partida.

11. Divisiones del electroforesis:
 electroforesis de zona (separación en función de la
carga).
 isoelectroenfoque.
 separación por tamaño en tamiz molecular (también
aplicable a ácidos nucléicos).

12. Electroforesis de zona
 Su carga neta depende del pH del medio.
Normalmente, la separación electroforética de
proteínas se hace a pH alcalino, en el que la mayoría
de las proteínas presentan una carga global negativa.
También se puede trabajar a pH ácidos, pero no
demasiado bajos, ya que las proteínas precipitan en
medio ácido (básicamente se usa en la detección de
variantes de la hemoglobina).

13. Isoelectroenfoque
 En lugar de separar las proteínas en función de su
carga a un pH dado, se separan en función de su
punto isoeléctrico (pI):
 el pI es el pH en el que la carga neta de la proteína es
nula, y depende de la composición aminoacídica de
la proteína.

14. Separación por tamaño
 Permite separar proteínas y ácidos nucléicos.
 En el caso de las proteínas, deben ser tratadas con
SDS (sodio dodecil sulfato) para que su carga sea
negativa y todas migren hacia el ánodo ,la separación
se hace en medios de soporte en el que se ha creado
un tamiz molecular (matriz), que hace que las
proteínas más pequeñas corran más que las más
grandes.

15. Visualización de las proteínas.
 Una vez separadas las proteínas, deben fijarse y




teñirse para poder ser visualizadas.
Hay diferentes protocolos en función de lo que se
quiere estudiar:
fijación por calor o química
tinción en caso de estudios no específicos
(proteinograma y electroforesis)
fijación mediante anticuerpos previa a la tinción en
caso de estudiar proteínas específicas
(Inmunofijación).

16. Tinciones:
 La tinción con plata no es utilizada si se desean hacer
análisis por espectrometría de masas (MS) pero es
más sensible que la tinción con Azul de Coomassie.
 La tinción fluorescente es muy sensible y compatible
con MS pero los costos de tinción son elevados.
 Una tinción sensible y barata es la denominada "Blue
Silver" o Coomassie G250 . Además, esta tinción es
compatible con MS. esta compuesta por azul de
coomassie diluido en una solución coloidal y se
utiliza agua destilada para desteñir el gel de
poliacrilamida.

17. ¿Dónde se aplica?
 pueden analizarse las proteínas contenidas en diferentes









líquidos biológicos:
sangre
plasma (el líquido sanguíneo sin células)
suero (plasma sin fibrinógeno)
orina
LCR
líquido sinovial
saliva
lágrimas
Así como alimentos, especialmente lácteos y cereales.

18. Principales proteínas del plasma sanguíneo
 ALBUMINAS: es la mas abundante de las
proteínas del plasma.
 GLOBULINAS: La fracción de globulinas es
sumamente compleja. En general las globulinas
contienen proteínas conjugadas de dos tipo
principales: glicoproteínas (beta) y lipoproteínas
(alfa)
 GAMA O INMUNOGLOBULINAS

19.  La fracción de globulinas α presenta dos tipos en el




proteinograma α1 y α2, excepto en pequeños
rumiante y en el cerdo. La mayoría son sintetizadas
en el hígado y entre ellas se encuentran:
Globulinas α1:
ANTITRIPSINA
PROTROMBINA
TRANSCORTINA

20.  Globulinas α2:
 CERULOPLASMINA
 HAPTOGLOBINA
 MACROGLOBULINA
 ERITROPOYETINA

21.  b-globulinas :
 entre ellas hallamos las glicoproteínas:
 proteínas del complemento
 Ferritina

22.  GAMA O INMUNOGLOBULINAS:
 Son anticuerpos formados por el organismo frente a
la presencia de sustancias que son reconocidas como
extrañas a él y son sintetizadas por las células
plasmáticas derivadas de linfocitos B.

23. Concentración:
 La concentración total de proteínas plasmáticas varía
entre 6 – 8 g/dl.
 En clínica tiene cierto interés conocer la relación
entre las concentraciones de albúminas y globulinas
(a:g) cuyo valor normal es en término medio, 0,8 a 1.
 La disminución de este valor es un hallazgo
frecuente en clínica.

24. Relación albúmina:globulinas (rel. A:G)
 Es un valor calculado, obtenido de dividir la
albúmina entre las globulinas.
 Disminución de la relación A:G. Aumento de
globulinas por disminución de albúmina.
 Elevación de la relación A:G.
Hipogammaglobulinemia (frecuente en becerros),
inmunodeficiencia congénita, inmunodeficiencia
adquirida.

26. densitometría,
 procedimiento que mide la intensidad de la
coloración en los distintos sectores de la tira
coloreada, se puede obtener un trazado que dibuja
una serie de ondas o picos en correspondencia con
cada una de las bandas. La superficie de cada pico es
proporcional a la intensidad de color y tamaño de las
bandas originales. Este trazado suele designarse
proteinograma electroforético.

29. Proteinograma de referencia para las distintas especies:
 varía de acuerdo a diferentes factores fisiológicos a







saber:
especie
sexo
edad (recién nacidos, viejos)
estado fisiológico (gestación y lactancia),
estado metabólico (hidratación, hormonas),
actitud productiva (puesta de huevos, lactancia...)
factores ambientales (efectos nutricionales, estrés).

31. Alteraciones:
El término disproteinemia:
se refiere a cualquier alteración en la cantidad de
proteínas de la sangre.

32. Hiperproteinemias.
La causa más frecuente de este tipo de alteración se
relaciona con:
Hemoconcentración. Algunos signos clínicos que se
pueden mencionar son:
vómito, diarrea, poliuria, ascitis, fiebre, sudoración
profusa y, en equinos, en algunos casos de síndrome
abdominal agudo. Se recomienda efectuar perfil de
laboratorio para detectar otras alteraciones
concomitantes
como:
eritrocitosis,
hiperalbuminemia,
hipergammaglobulinemia e hiperazotemia prerrenal.

33. Hipoproteinemias.
Se deben considerar las siguientes causas:
Disminución en la síntesis proteica, provocada por
insuficiencia hepática, alimentación con escasa
cantidad de proteínas, síndrome de mala digestión
(insuficiencia exocrina pancreática), síndrome de
mala absorción (enteropatía con pérdida de
proteínas) e insuficiencia cardiaca congestiva.
Pérdida
de
proteínas,
por
vía
renal
(glomerulonefropatía), a través del intestino (diarrea
con pérdida de proteínas), por quemaduras,
hemorragia.