Este documento describe varios métodos serológicos e inmunológicos, incluyendo electroforesis, inmunoelectroforesis, electroinmunodifusión, aglutinación, pruebas de Coombs, y métodos inmunoquímicos como ELISA y RIA. Explica cómo estos métodos se usan para detectar respuestas inmunológicas, anticuerpos, antígenos, e infecciones. También discute factores que afectan los niveles de inmunoglobulinas y aplicaciones clínicas de estos métodos

1. UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMA
CENTRO UNIVERSITARIO DE OCCIDENTE
DIVISIÓN DE CIENCIAS DE LA SALUD
CUARTO AÑO CARRERA DE MEDICINA
SEROLOGÍA
Dr. Otto Alberto Rodas Méndez
Coordinado Cuarto Año Medicina Interna
Dos usos separados:
a) Se usan para detectar respuestas inmunológicas y su patología.
b) Principios inmunológicos para la detección cuanti y cualitativa de Ag y Abs
Unmunodifusión/inmunoprecipitación detecta la reacción de Ag-Ab mediante la reacción de
precipitación.
Es el modo más simple y más directo de demostrar reacciones Ag-Ab.
Las cifras de Ig sérica dependen de diversos factores del desarrollo, genéticos y ambientales.
Estos incluyen características:
a) Étnicas
b) Edad
c) Sexo
d) Antecedentes de alergias/infecciones recurrentes
e) Factores geográficos
Infestación endánica de parásitos [IgE]. Los niños normales nacen con concentración muy
bajas.
Toda la porción de IgG del suero del cordón umbilical se transfiere por la madre a través
de la placenta.
Si hay infección intraútero se eleva IgM materna, e IgA del cordón.
Después del nacimiento IgG materna decae. Existe un aumento gradual y progresivo de
IgG, IgA e IgM hasta la adolescencia tardía cuando se obtienen las con… normaales del adulto.
En la práctica rutinaria sólo se miden Inmunoglobulinas G, A, M y E.
IgD no se relaciona con enfermedad IgB es útil para el diagnóstico diferencial de estados
alérgicos parasitarios; requiere métodos sensibles como PIA Y ELISA.
Electroforesis e Inmunoelectrofóresis Lde.
La heterogeneidad en las proteínas del suero se analizan por electroforesis (EF)
distribuidas en un campo eléctrico.
La EP es útil en el diagnóstico de trastornos humanos para proteínicos como mieloma
múltiple.
Las cadenas ligeras libres se detectan con rapidez en orina cuando están presentes en
cantidades grandes como en la proteinuria de Bence Jones, en el mieloma.
Bandas oligocionales en LCR con movilidad electroforética restringida, se han detectado
cerca de 90% de casis clínicos definidos de esclerosis múltiple.
Inmunoelectroforesis en el laboratorio combina la separación electroforética difusión y
precipitación Inmunitaria de las proteínas. Por lo tanto se pueden obtener la identificación y
cuantificación aproximada de proteínas individuales presentes en suero, orina u otros líquidos
biológicos.

2. Aplicaciones
La presencia de un aumento agudo o un pico de la región de gammaglobulinas en la
electroforesis sugiere marcadamente la presencia de paraproteínas monocional . Sin embargo es
necesario llevar a cabo inmunoelectroforésis para determinar el tipo exacto de cadena H y L.
Electroinmunodifusión.
En la inmunodifusión se permite que el Ag y el Ab se pongan en contacto y se precipitan en
agar solo por difusión.
Sin embargo la posibilidad del encuentro entre el Ag y el Ab se incrementar mucho al
dirigir potécnica de E-Inmunodifusión es útil en el diagnóstico serológico de enfermedades
infecciosas por la detección del Ag en suero.
Su máximo exponente es la contrainmunoelectrofóresis. Su principio este método es la
electroforesis simultánea de Ag Ab en direcciones opuestas.
Métodos inmunoquímicos y fisicoquímicos.
Estudios que detallan los constituyentes séricos de mayor importancia inmunitaria
incluyen:
Cromatografía
Viscosidad de suero
Crioglobulinas – piroglobulinas
Complejos inmunitarios
Cromatografía es una técnica de separación de moléculas entre una fase líquida móvil y
una fase sólida estacionaria.
Viscosidad sérica es un técnica simple y valiosa para evaluar pacientes con
paraproteinemia. Normalmente los elementos formados de la sangra contribuyen de manera más
significativa a la viscosidad total de la sangre de lo que lo hacen las proteínas plasmáticas. Sin
embargo enfermedad con concentraciones altas de proteínas séricas en particular
inmunoglobulinas, la viscosidad sérica puede alcanzar valores altos y originar el síndrome de
hiperviscosidad.
La Viscosidad sérica se determina por una serie de factores como: concentración de
proteínas, forma, tamaño, deformidad de moléculas séricas, estado hidrostático, carga molecular,
sensibilidad de las proteínas a la temperatura.
Crioglobulinas
La precipitación de Ig sérica en el frío se observó en un paciente con mieloma múltiple.
Designa un grupo de proteínas que tiene la propiedad de formar un pecipitado o gel en
frío. Este fenómeno es reversible al aumentar la temperatura.
Crioglobulinas tipo I consisten en un solo Ig monoclonal.
Tipo II con inmunoglobulina monoclonal: consiste en Ig monoclonal con actividad de Ab
contra una Ig policlonal.
Tipo III son crioglobulinas policlonales mixtas es decir se encuentran una o más Ig.
Ninguna de las cuales es monocional.
Tipo III indican la presencia de complejos inmunitarios tipo I y II aumentados en pacientes
con mieloma, linfoma.

3. Todos los tipos de crioglobulinas pueden originar síntomas específicos que se generan
como resultado de cambios en la crioglobulina inducida por exposición al frío. Los síntomas son:
- Fenómenos de Raynaud
- Púrpura vascular
- Tendencia a sangrar
- Urticaria inducida por frío
- Trombosis arterial distal con gangrena.
Piroglobulinas
Son Ig monocionales que precipitan de manera irreversible cuando se calientan a 56o
c.
Este fenómeno es distinto de la termoprecipitación reversible de las proteínas de Bence Jones.
Se presenta en mieloma múltiple. Lupus, Ca., trastornos linfoproliferativos.
Detección de complejos inmunitarios
Producen daño tisular, sus manifestaciones clínicas son enfermedad reumática,
hematológicas, renales. Son detectables en tejidos o en la circulación.
La mayoría de los métodos de detección se basan en la fijación de tales complejos a varios
componentes del complemento. No ha tenido utilidad clínica.
Análisis de fijador de ligando
El primer método de A de L fue radioinmunovaloración [RIa]. Se inicia con la detección de
Abs. Humanos antiinsulina, hormona tiroidea con este método se pueden detectar hormonas,
fármacos, marcadores tumorales, alérgenos, Ags. Bacterianos y viales, Abs en enfermedades
infecciosas como hepatitis y sida.
RIA = Se ha modificado para originar métodos analíticos.
Elisa = Valoración de inmunoabsorcion ligada a enzimas, detecta un Ab. El componente
de fase sólida es un Ag. El Ab por detectar se une a este componente y entonces se adiciona
un segundo Ab unido a enzimas dirigido contra el Ab por detectar. Se añade el sustrato de la
enzima y se obtiene un producto colorido de la reacción que puede medirse con facilidad por
espectrofotometría.
Aglutinación
La precipitación y la aglutinación son la base de muchas técnicas en el laboratorio de
inmunología.
Las de aglutinación son semicuantitativas. Sus ventajas son: mayor sensibilidad.
De acuerdo con Coombs, los 3 requerimientos principales en las pruebas de aglutinación
son:
1) Disponibilidad de una sus. Estable de células o pastiarlas.
2) Presencia de 1 o más Ags cerca de la superficie.
3) Conocimiento de que se pueden detectar Abs “incompletos o no aglutinantes
mediante modificaciones por ejemplo reacciones con antiglobulina.
Las reacciones de aglutinación se pueden clasificar como:
- Directas: cuando una célula o un Ag particulado insoluble se aglutina de manera directa
por el Ab.
Un ejemplo es la aglutinación de eritrocitos A por antisuero.
- Indirectas, pasivas, anti A.
Se refiere a la aglutinación de células recubiertas de Ags. Los ejemplos son aglutinación en
látex [fijación] para kdetección de factor reumatoideo y aglutinación de eritrocitos
recubiertos de DNA para la detección de Ab anti DNA.

4. Técnicas de Aglutinación
Prueba de aglutinación directa
Mediante Ab se pueden aglutinar directamente los eritrocitos, bacterias, hongos y gran
variedad de otras especie microbianas.
Prueba de aglutinación indirecta [pasiva] los límites de Ags solubles que se pueden
absorver de manera pasiva o acoplar químicamente a los eritrocitos u otras partículas inertes, ha
extendido la aplicación de las reacciones de aglutinación. Muchos Ags se acoplan
espontáneamente con eritrocitos y forman reactivos estables para la detección ad Abs.
Inhibición de la hemaglutinación [IH]. La IH de eritrocitos recubiertos de Ag por el Ag
homólogo, es un método muy sensible y específico para detectar pequeñas cantidades de Ag
soluble en la sangre u otros líquidos tisulares.
Se ha usado en la detección de HBs Ag en hepatitis, así como para detectar el Ag del factor
VIII en hemofilia.
Aplicación clínicas de la aglutinación
Prueba de antiglobulina
Prueba de Coombs
Los Abs con “F” recubren eritrocitos pero no pueden formar la malla necesaria para
producir aglutinación. Un ejemplo típico es el Ab dirigido contra determinantes Rh en los
eritrocitos humanos. Sin embargo, la adición de antisuero antiglobulina producido en especie
heterologa, por ejemplo gamma globulina de conejo antihumana origina una clara aglutinación.
Así la prueba de antiglobulina o de Cooms se utiliza principalmente para detectar cantidades sub
aglutinantes o no aglutinantes de Abs antieritrocitos.
La prueba directa de coombs detecta gamma-globulina, u otras proteínas séricas que son
adherentes a eritrocitos, tomadas directamente de un individuo sensiblilizado.
La prueba indirecta de Coombs es la reacción de 2 etapas para la detección de Abs
incompletos en el suero de un paciente. El suero en cuestión se incuba primero con eritrocitos de
prueba y después las células supuestamente recubiertas de Ab se aglutinan por el suero de cooms
antiglobulina. Las aplicaciones principales de la prueba de coombs son:
Tipificación de eritrocitos en bancos de sangre
Enfermedad hemolítica del Recién nacido y
Anemia hemolítica autoinmune.