Puedes encontrar el seminario aquí: https://youtu.be/lkbqgegmy1I BIBLIOGRAFÍA Y CIBERGRAFÍA •http://www.who.int/topics/hiv_aids/es/ •LUQUE CABRERA, J y HERRAEZ SANCHEZ, A. Texto ilustrado de Biología Molecular e Ingeniería genética: Conceptos, Técnicos y aplicaciones en ciencias de la salud. Madrid: Elsevier Science, ZAOL. 469p (QH581.2/L8-01) •LODISH, H. Biología celular y molecular. 5. ed. Buenos Aires: Médica Panamericana, 2005. 973 p. (QH506/Ló-O4) •www.iib.unsam.edu.ar/archivos/docencia/licenciatura/.../2017/.../1504124326.pdf •http://sisbib.unmsm.edu.pe/bvrevistas/dermatologia/v09_sup1/tecnicas_2.htm •https://www.ipb.csic.es/servicios/CitometriadeFlujo/index.html •ufq.unq.edu.ar/Docencia-Virtual/BQblog/Electroforesis-western-blot-Elisa.pdf •http://www.adcis.net/es/Applications/Examples/CometAssay.html

1. Mariana Bello
Eraso

2. INTRODUCTION
- VIH (Human Immunodeficiency Virus). It infects the cells of the immune system, altering or canceling their
function, which causes a progressive deterioration of the immune system, generating "immunodeficiency". It is
transmitted through vaginal, anal or oral sex with an infected person, the transfusion of contaminated blood or the
sharing of needles, syringes or other sharp instruments. It can also be transmitted from mother to child during
pregnancy, delivery and breastfeeding.
- DNA DAMAGE: The set of changes in the DNA molecule that lead to alterations in the replication and
transcription, with its consequent damage in cell viability.

3. - ROS (Reactive oxygen species). Are free radicals produced by the oxidative metabolism
of the cell, especially in the mitochondria. The main ones are the superoxide anion and the
hydroxyl radical, which damage the DNA of a strand or oxidize the nitrogenous bases.
- B cells or B lymphocytes: These are white blood cells that can recognize foreign
molecules (antigens) and mediate immune responses. In specific, B lymphocytes are
responsible for the production of antibodies
INTRODUCTION

4. Identify how the HIV Tat-1 protein induces DNA damage in B lymphocytes from human
blood through mitochondrial ROS production
OBJETIVE

5. Se obtuvieron muestras de sangre completa de ocho individuos VIH-positivos tratados en el Departamento
de Inmunología Clínica, Hôpital Saint-Louis, París, Francia.
MATERIALES & MÉTODOS
a) Procesamiento de muestras de sangre
Purificación de las células B y cultivo de estas con 1% de
penicilina / estreptomicina (medio completo)
b) Tratamiento de células B
Las células B se trataron con la proteína Tat recombinante
Purificada .

6. • RT-qPCR: Se utiliza para la detección y amplificación de ARN. Permite estudiar la expresión de
determinados genes (proteínas). Se extrae el ARNtotal de las células en estudio y se separa la fracción
correspondiente al mensajero. Tras purificarlo el ARN se transcribe a ADN mediante una transcriptasa
inversa, por cada molécula de ARNm se sintetiza una molécula de cADN monocatenaria que
posteriormente se ha de convertir en bicatenaria utilizando una ADN polimerasa. Se utilizó para la
evaluación cuantitativa de los niveles de transcripción de genes.
• Tinción de DHE: El indicador de superóxido dihydroethidium, también llamado hidroeididina, exhibe
fluorescencia azul en el citosol hasta que se oxida, donde se intercala en el ADN de la célula, teñiendo su
núcleo de un rojo fluorescente brillante. En la investigación fue utilizada para medir los niveles de
superóxido, es decir, refleja el nivel de ROS en las células B.
MATERIALES & MÉTODOS

7. • La Citometría de Flujo (CMF): Se basa en hacer pasar una suspensión de partículas (células) alineadas
y de una en una por delante de un haz de láser focalizado. El impacto de cada célula con el rayo de luz
produce señales que corresponden a diferentes parámetros de la célula y que son recogidos por distintos
detectores. Estos convierten dichas señales en señales electrónicas para mirar varios parámetros en una
misma célula. En este estudio se usa para medir el nivel de GSH intracelular.
• Western blot: Esta técnica analítica es usada para detectar una proteína especifica en un extracto crudo,
mediante el uso de anticuerpos. En el estudio lo utilizaron para cuantificar las fracciones de proteína
nuclear y citosólica para analizar la localización relativa nuclear frente a la localización citosólica de la
subunidad RelA / p65.
MATERIALES & MÉTODOS

8. • Ensayo de cometa alcalino: También conocida como electroforesis Alcalina de Células Individuales (SCG), es
una prueba que evalúa el daño del material genético causado por diferentes agentes químicos y físicos. Se
observa como fragmentos del ADN que migran fuera de las células del núcleo bajo una forma característica
similar a la cola de un cometa. Se utilizó para saber medidas que incluyen el porcentaje de ADN en la cola, la
longitud de la cola y el momento de la cola calculado para evaluar la extensión del daño del ADN.
• Inmunofluorescencia: Técnica que se utiliza para la detección de estructuras subcelulares que nos permiten
estudiarlas con la utilización de anticuerpos acoplados a fluoróforos. En este caso se usó para detectar los
anticuerpos contra yH2AX y NF-kB.
MATERIALES & MÉTODOS

9. Fig. 1.b
RESULTADOS

10. Fig. 3.b
RESULTADOS

11. RESULTADOS
Fig. 5.b

12. AUTHOR WHAT THEY PROPOSED
TRUE OR FALSE
(YES/NO)
Banerjee, X. et al.
A.V. Ivanov et al.
The increased levels of ROS, together with the
reversal of DD by treatment with antioxidants,
including mitochondria targeting ones,
demonstrate that Tat promotes genomic
instability via induction of mitochondrial ROS.
TRUE/YES
C. Capone et al.
Y. Gu et al.
H. Lecoeur et al
Tat was shown to induce ROS production by
activating NADPH and spermine oxidases and
mitochondrial membrane permeabilization and
inactivation of cytochrome c oxidase in T-cells.
TRUE/YES
T.O. Price et al.
Our data are in agreement with the
previous study where Tat was found to reduce the
GSH/GSSG ratio in brain endothelial cells
TRUE/YES
DISCUSSION
Yes because the proposal is according to the study and its results.

13. CONCLUSIONS
Knowledge of the action of HIV tat-1 protein opens the possibility of finding mechanisms to
inhibit the production of ROS, one of the main causes of DD and genetic instability.
HIV proves to be a virus with a high capacity to induce damage to the cell, such as damaging its
genetic information and modifying its normal functioning.