1. ARTICULO PROCESOS Y COMPARACIONES REALIZADAS EN
PROTEINAS SANGUINEAS
Caracterización de proteínas en la sangre – Facultad Medicina Universidad cooperativa de
Colombia sede Villavicencio
RESUMEN
INTRODUCCIÓN: Las proteínas son
sustancias que forman un grupo de
compuestos de gran diversidad
estructural y funcional, en la sangre
encontramos la albumina, las
globulinas y el fibrinógeno.
Las proteínas presentan un arreglo
tridimensional en su estado nativo
pero ante cambios de temperatura,
de pH, adición de solutos y solventes
pueden sufrir desnaturalización.
OBJETIVO: Describir el
procedimiento realizado en el
laboratorio de bioquímica, buscar la
presencia de enlaces peptídicos y
observar los cambios que se dan en
las proteínas sanguíneas al adicionar
sulfato de amonio o ácido
tricloroacetico.
MATERIAL Y METODO: se realizó un
estudio transversal, experimental en
el que se llevaron a cabo cuatro
procesos relacionados con proteínas,
durante 2 horas en el laboratorio de
Bioquímica de la facultad de medicina
de la Universidad Cooperativa, los
resultados fueron sometidos a
observaciones buscando diferencias
e igualdades.
RESULTADOS: El total de sangre
utilizada fue de cinco tubos de
ensayo de una misma integrante del
grupo de investigación, se encontró
que la prueba de Biuret dio positivo,
la hemolisis[1] de los componentes
celulares se denoto, la prueba salting
out fue exitosa en casi un 100% y la
CARACTERIZACION DE PROTEÍNAS EN LA SANGRE
CHARACTERIZACION OF PROTEIN IN THE BLOOD
Erika Natalia Montenegro Villalobos, Ivy Alexandra castillo, Lina Katherine Sánchez, Margarita Suarez Sepúlveda
Facultad de Medicina Universidad Cooperativa de Colombia

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PROTEINAS SANGUINEAS
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Colombia sede Villavicencio
desnaturalización con ácido
ticloroacetico fue irreversible.
DISCUSIÓN: las proteínas[2]
sanguíneas son de gran importancia
en procesos como la inmunidad,
preservar la presión coloidosmotica y
coagulación sanguínea, estas
presentan un arreglo tridimensional
es su estado nativo que puede sufrir
desnaturalización como en el caso de
adicionar ácido tricloroacetico y asi
perder o cambiar dichas funciones
dentro del organismo.
PALABRAS CLAVE: Hemolisis,
salting out, prueba de Biuret,
desnaturalización.
ABSTRACT
ABSTRACT.
INTRODUCTION: Proteins are
substances that form a group of
compounds with a vast structural and
functional variety,in the blood we can
find albumin,globulins and fibrinogen.
Proteins are formed in a three-
dimensional array in their natural
state but when introduced to changes
in temperature, ph, solutes and
solvents additions may suffer
denaturation.
OBJECTIVE: Describe the process
made inside biochemistry's
laboratory, locate peptide bonds and
observe the changes that might occur
in the blood proteins when adding
ammonium sulphate or trichloroacetic
acid.
MATERIALS AND METHOD:
Experimental cross-sectional study
was conducted in which four protein
processes were carried out during two
hours inside the biochemistry
laboratory of the school of medicine of
the Universidad cooperative, the
results were subjected to verification
looking for differences and equalities.
RESULTS: The total blood used was
five test tubes of the same member of
the research group, found that tested
positive Biuret test, hemolysis I
denote cellular components, salting
out test was successful in almost
100% and ticloroacetic acid
denaturation was irreversible.
DISCUSSION: blood proteins are of
great importance in the immune
processes and preserve the colloid
osmotic pressure and blood
coagulation, such a three-dimensional

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PROTEINAS SANGUINEAS
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arrangement is present in its native
state which can undergo denaturation
in the case of addition of
trichloroacetic acid and lose or
change said functions within the body.
KEYWORDS: Hemolysis, salting out,
test of Biuret, denaturing.
INTRODUCCIÓN
Las proteínas constituyen la
estructura básica de todas las células
vivas y son esenciales para la
formación y mantenimiento del
organismo, por eso se les conoce
como el material de construcción del
cuerpo. A su vez, las construcciones
que producen al unirse reciben el
nombre de aminoácidos,que
producen al unirse reciben el nombre
de aminoácidos.
Nombre de aminoácidos. Los
elementos celulares corresponden a
eritrocitos (glóbulos rojos), leucocitos
(glóbulos blancos) y plaquetas. Entre
las proteínas, las más Abundantes
están representadas por la albúmina,
las Globulinas y el Fibrinógeno.
Dentro de los eritrocitos se encuentra
una gran cantidad de hemoglobina, la
Proteína especializada en el
transporte de O2 desde los pulmones
a los tejidos.
durante la práctica se realizaron
diferentes procedimiento de vital
importancia para cumplir con los
objetivos de la investigación dentro
estos esta tomar una muestra
sanguínea por medio de una
Venopunción (jeringa o vaicutainer
estéril) a un integrante de grupo esta
muestra fue depositada en 4 tubos
con anticoagulantes, el siguiente
paso consistía en introducir los
tubos en una maquina centrifuga
para aislar el plasma del soluto
sanguíneo después de estos pasos
se realizan una serie de
comparaciones con reactivos
específicos para esta práctica como
Solución de ácido Tricloroacético al
50%Sulfato de Amonio, Reactivo de
Biuret, Hidróxido de sodio al 10%
(p/v) de esto hay que tener en
cuenta que las proteínas presentan
un arreglo tridimensional en su
estado nativo. Sin embargo, esta
conformación puede ser perturbada
por las condiciones del medio en que
se encuentra, especialmente en
condiciones in vitro. La
desnaturalización de una proteína
indica “disrupción” de las estructuras
cuaternaria, terciaria, secundaria y
primaria. Esto puede ocurrir con la
variación del pH, la temperatura, la
naturaleza del solvente y de los
solutos del medio.
Las proteínas por otro lado, también
pueden ser precipitadas en el medio
por la adición de ciertas sales, de tal
manera que se insolubilizan

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reversiblemente sin sufrir
desnaturalización. Este procedimiento
se denomina “salting out”.
MATERIAL
 Guantes
 tapaboca y gorro
 Sistema vacutainer
 Con tubos tapa lila que
contienen EDTA como
anticoagulante.
 Torniquete
 Tubos de ensayo
 Tubos de centrífuga
 Gradilla
 Pipetas
Tapones de Caucho
REACTIVOS
 Solución de ácido
Tricloroacético al 50%
 Sulfato de Amonio.
 Reactivo de Biuret
 Hidróxido de sodio al 10% (p/v)
METODO
se realizó mediante un tipo estudio
transversal, experimental en el que se
llevaron a cabo cuatro procesos
relacionados con proteínas, durante 2
horas en el laboratorio de Bioquímica
de la facultad de medicina de la
Universidad Cooperativa, los
resultados fueron sometidos a
observaciones buscando diferencias
e igualdades.
PRIMER PASO: REACCION DE
BIURET
Para la realización de esta
procedimos a la utilización de 1 ml
de solución de gelatina sin sabor,
luego de ello adicionamos un

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volumen igual de NaOH al 10%.
Seguidamente mezclamos por un
tiempo y agregamos gota por gota la
solución de Biuret, y por ultimo
agitamos
QUE LOGRAMOS OBSERVAR?
La muestra cambia su coloración
a morado claro por acción del
reactivo
Realizar en mismo procedimiento con
1 ml de plasma
Teniendo en cuenta las
observaciones realizadas, obtener
una muestra de sangre de 20 ml de
un compañero del grupo usando el
sistema vacutainer con tubo de tapa
color lila. Retirar la aguja y dispensar
inmediatamente la muestra de sangre
en dos tubos de centrífuga limpios.
SEGUNDO PASO: SEPARACION
PLASMA Y DE LAS CELULAS
SANGUINEAS
Para este paso se centrifugo cada
muestra de sangre por 10 minutos en
una centrífuga clínica a 2400 r.p.m.
luego se procedió a la remoción
cuidadosamente del plasma mediante
una pipeta de plástico colocando las
dos muestras en un mismo tubo de
ensayo. Para así finalmente marcar el
tubo de plasma
TERCER PASO: MEZCLA DE LOS
COMPONENTES CELULARES
Mezclamos aproximadamente 1 ml de
componentes celulares del
precipitado con 9 ml de agua
destilada en un tubo de ensayo,
después se rotulo con el nombre de
solución hemoglobina
¿QUE SE OBSERVO EN EL
PROCESO DE HEMOLISIS?
Se separó la porción liquida, el
plasma de los componentes celulares
quedando de esta forma el suero
arriba y los eritrocitos abajo
CUARTO PASO : SEPARACION
PLASMA Y HEMOGLOBINA
Tomamos dos tubos de centrífuga y
por separado colocamos en uno de
ellos 5 ml de plasma y en el otro 5 ml
de solución de hemoglobina.
Después se añadió a cada tubo en
porciones muy pequeñas 0.88 gr. de
sulfato de amonio progresivamente,
se mezcló muy bien y se tuvo en
cuenta de no añadir la siguiente
porción de sulfato de amonio hasta
que no se haya disuelto totalmente la
anterior. Esta cantidad de sulfato de
amonio corresponde al 30% de
saturación. Mezclar nuevamente,
centrifugar y separar el sobrenadante
en otro tubo de centrífuga.
QUINTO PASO: UTILIZACION DEL
ACIDO TRICLOROACETICO :

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A este sobrenadante añadimos en la
misma forma a cada tubo 1.48 gr. de
sulfato de amonio para completar una
saturación del 70%. Después
Centrifugo cada tubo por 10 minutos.
Y se separó los sobrenadantes con
una pipeta desechable, para así
añadir a cada tubo con precipitado 4
ml de agua destilada y mezclar.
¿QUE SE OBSERVO EN ESTE
PARTE?
Hay rompimiento de las células y se
empiezan a hinchar, porque se hace
mayor contacto del agua con los
eritrocitos, puesto que los eritrocitos
que quedan abajo se llenan casi
totalmente de agua hasta que todos
los eritrocitos se rompen y sufren
proceso de hemolisis
SEXTO PASO: UTILIZACION DEL
ACIDO TRICLOROACETICO
Tomamos 2 ml de plasma en un tubo
de centrífuga y 2 ml de solución de
hemoglobina en otro tubo de
centrífuga, añadimos a cada tubo 0.5
ml de ácido Tricloroacético (TCA) al
50%
Es importante en este sexto paso
agitar y centrifugar por 10 minutos.
Separar los sobrenadantes con una
pipeta, seguidamente añadimos a
cada tubo 4 ml de agua destilada y
mezclar.
DISCUSION
En esta práctica de laboratorio
destacamos la gran importancia de
las proteínas en sangre y realizamos
una gran variedad de reacciones para
determinar propiedades de la sangre
y cada uno de sus componentes
contenidos en el plasma, obtuvimos
un mínimo porcentaje de sangre del
cual utilizamos respectivamente 10 %
de la misma para realizar los
diferentes procedimientos.
identificando los diferentes
comportamientos de los componentes
celulares y proteínas plasmáticas al
adicionarse a cada uno de los
reactivos, observando también la
utilidad de cada método como el
“Salting Out” que es la adición de
sal a la sangre para evitar la
desnaturalización y otros
procedimientos que se llevaron a
cabo para lograr determinar la
cantidad y variedad de componentes
celulares en plasma, también
destacamos el procedimiento para la
obtención de solución hemoglobina
teniendo 1 ml de componentes
celulares en sangre dándoles un
precipitado y agregándole 9 ml de
agua destilada obteniendo como
resultado un 70 % de solución de
hemoglobina y 30 % de restos de

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eritrocitos muertos, tomando como
referencia otros factores que han
determinado otros investigadores y
que de cierto modo tienen cierta
similitud con los nuestros, partiendo
de los valores que en algunos varían
y pueden llegar a ser notablemente
diferentes.
RESULTADOS
Se realizó una serie de 4 prácticas
relacionadas con las proteínas en la
sangre, con las cuales quería
determinarse la presencia de estas y
su desnaturalización[3] reversible e
irreversible.
Al adicionar gelatina sin sabor con
NaOH mas el reactivo de Biuret se
determinó la presencia de enlaces
peptídicos por el tono violeta que
tomo la solución. Imagen 1.
Al separar la sangre en sus
componentes (plasma y componentes
celulares) se determinó que al tomar
componentes celulares y adicionarles
agua destilada, estos comenzaban a
hincharse, luego estallaban y
liberaban hemoglobina, allí se
evidencio un proceso de hemolisis.
Imagen 2.
Al tomar plasma y componentes
celulares, cada uno por separado y
adicionarles sulfato de amonio se
realizo un proceso de insolubilización
reversible sin sufrir desnaturalización
llamado salting out con el cual, luego
al adicionar agua destilada y
mezclarlos se obtuvo una unión de
estos que produjo nuevamente la
sangre, con una consistencia
relativamente igual a la que se tenía
antes del procedimiento. Imagen 3.
Al hacer el mismo proceso con ácido
tricloroacetico se determinó que la
desnaturalización que sufría tanto el
plasma como los componentes
celulares era de manera irreversible
lo cual se evidencio al querer formar
nuevamente la sangre adicionando
agua destilada. Imagen 4.

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Imagen 1. El tono violeta evidencia la presencia de
enlaces peptídicos, positivo para el reactivo de Biuret. Imagen 2. Solución de hemoglobina.

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Imagen 3. Proceso de salting out, antes de agregar
agua destilada para su restauración en sangre.
Imagen 4. Desnaturalización con acido tricloroacetico.
DISCUSIÓN:
las proteínas sanguíneas son de
gran importancia en procesos como
la inmunidad, preservar la presión
coloidosmotica y coagulación
sanguínea, estas presentan un
arreglo tridimensional es su estado
nativo que puede sufrir
desnaturalización como en el caso de
adicionar ácido tricloroacetico y asi

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perder o cambiar dichas funciones
dentro del organismo.
PALABRAS CLAVE: Hemolisis,
salting out, prueba de Biuret,
desnaturalización.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Foundling. J (2014) Hemolisis
15 de enero del 2014
http://es.wikipedia.org/wiki/He
m%C3%B3lisis
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11° Edicion. Autor: Arthur C.
Guyton,John E. Hall Año:
Editorial:Gea consultoria S.L.L
Ciudad: Madrid Pais: España
Paginas :855
3. Bioquimica Libro de textos con
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Edicion. Autor: Thomas M.
Devlin Año: Editorial:Reverte
S.A Ciudad: Barcelona Pais:
España Paginas :107
3. Karla.2010.Plasma
sanguíneo. En línea. Fecha de
consulta:09/04/2011.
Disponible en
: http://phplassan.blogspot.com
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4. Technopat, k (2014)
desnaturalización (proteínas)
http://es.wikipedia.org/wiki/Des
naturalizaci%C3%B3n_(bioqu
%C3%ADmica)
5. Guia de articulo original
http://revista.anacem.cl/web/w
p-content/uploads/2013/02/6.3-
Numero-Completo.pdf
6. Hidrolizados de proteína:
procesos y aplicaciones
http://www.scielo.org.ar/scielo.php?sc
ript=sci_arttext&pid=S0325-
29572008000200008
7. sangre y proteínas
plasmáticas
http://acemucsc.galeon.com/articulos/
Bioquimica/sangre.htm