PRECIPITACIÓN EN PROTEÍNAS MEDIANTE EL MÉTODO SALTING OUT.

2. PRECIPITACIÓN DE
PROTEÍNAS
La separación de las proteínas
presentes en sangre se consigue al
adicionar ciertos electrolitos. La
precipitación salina “SALTING OUT”
es un método en el cual se logra la
separación de las proteínas y el
plasma.
Para ésta precipitación se uso el
sulfato de amonio en dos
concentraciones al 0.88gr al 30% de
saturación y al 1.48 gr en una
saturación del 70%.
El procedimiento Salting Out precipita
e insolubiliza las proteínas, pero sin
que se de lugar a la desnaturalización
de las mismas

3. SALTING OUT EN EL
LABORATORIO
DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
1. Una vez conocidas las
normas de bioseguridad
y contando con personas
capacitadas, se procede
a la extracción de sangre
de uno de los
participantes de la
práctica utilizando el
método Vacutainer.
2. Previamente se ha
dispuesto de 5 tubos de
ensayo de tapa color
lila; Además 10 tubos de
centrífuga y dos pipetas
desechables para usar
una en plasma y otra en
hemoglobina.
1
2

4. 3.Se centrifugan
inmediatamente los 5 tubos
a 2400 r.p.m.
4.Luego de que se ha
centrifugado se separa todo
el plasma en un tubo, con
una pipeta de plástico sin
mezclar el plasma con los
componentes celulares.

5. 5.Se toma 1mL de los
componentes celulares que
han quedado en el fondo del
tubo a lo cual se adicionan 9
mL de agua destilada
9 mL
Se observa el
proceso de
Hemólisis

6. 6.Se toman dos tubos de
centrífuga, se adiciona en
uno 5mL de plasma y en el
otro 5 mL de solución de
hemoglobina.
Acto seguido se adiciona
progresivamente a cada uno
de los tubos sulfato de
amonio; inicialmente 0.44 gm
aproximadamente de Sulfato
de amonio en concentración
30% de saturación. Debe
mezclarse muy bien la
solución de cada uno de los
tubos, cuando ya se haya
mezclado perfectamente la
solución debe añadirse los
otros 0.44 mg de sulfato de
amonio a cada uno de los
tubos, así se habrá
completado los 0.88 gr
requeridos en ésta practica.
Una vez adicionados en su
totalidad los 0.88 mg de
sulfato de amonio a los dos
tubos se lleva a centrifugado
durante 10 minutos.
plasma
Sln de
hemoglb.
(0.44
gr
aprox
(0.44
gr
aprox
2
2

7. Del centrifugado anterior se pasa el
sobrenadante a otro tubo sin
descartarse el mismo.
7.Al sobrenadante resultante se le
añade ahora sulfato de amonio 1.48
gr de igual forma dividido en su mitad
a cada uno de los dos tubos de
solución de hemoglobina y plasma.
Éste tiene una concentración al 70%.
Se centrifuga cada tubo 10 minutos,
se separan los sobrenadantes y se
añaden 4mL de agua destilada a cada
uno. Ahora, se mezclan los
precipitados tanto de la
concentración del 30% con la
concentración del 70% y se observa
que la hemoglobina no se
desnaturaliza, si se solubiliza dado la
adición de los electrolitos
provenientes del sulfato de amonio,
pero, al final del método de
precipitado Salting out se ve
nuevamente la hemoglobina en su
apariencia inicial
2 En cada tubo
tanto en el
de solución
de
hemoglobina
como en el
de plasma.