El documento describe un experimento de laboratorio para caracterizar proteínas en la sangre. El objetivo era detectar enlaces peptídicos y analizar proteínas plasmáticas y componentes celulares después de agregar sulfato de amonio y ácido tricloroacético. Se extrajo sangre de un voluntario y se realizaron pruebas como Biuret, hemolisis, salting-out y desnaturalización con ácido tricloroacético. Los resultados mostraron la presencia de enlaces peptídicos, hemolisis de eritrocit

1. Caracterización de las proteínas
en la sangre
Faculta de medicina universidad Cooperativa de
Colombia- sede Villavicencio
Resumen
Objetivos: Detectar la presencia de enlaces
peptídicos, realizar un análisis de las proteínas
plasmáticas y componentes celulares después
de la adición de sulfato de amonio y ácido
tricloracético.
Metodología: en la facultad de medicina de la
universidad cooperativa de Colombia se realizó
una práctica de laboratorio en la cual se hizo
una serie de procedimientos donde
primeramente se extrajo una muestra se sangre
de una compañera del grupo e inmediatamente
se introdujo la respectiva muestra en cinco
tubos con sistema vacutainer, que más
adelante serían centrifugados para luego dar
paso a los procedimientos mencionados
anteriormente.
Resultados: El primer procedimiento realizado
fue la prueba de Biuret, la cual dio positivo,
luego se vio la hemolisis de los componentes
celulares, la prueba de saltingout fue exitosa y
al agregar ácido tricloracético se observó que la
desnaturalización era irreversible.
Conclusiones: La proteínas en sangre pueden
ser desnaturalizadas por factores externos, así
como nuestro grupo de trabajo en el
laboratorio, así mismo puede ocurrir dentro de
nuestro organismo, ya sea por fármacos, por
enfermedades autoinmunes u otras muchas
causas.
Palabras Claves: Enlaces peptídicos, Sulfato
de amonio, ácido tricloracético, saltingout,
desnaturalización, Proteínas.
Abstract
Objectives: To detect the presence of peptide
bond , carry out an analysis of plasma proteins
and cellular components after addition of
ammonium sulfate and trichloroacetic acid .
Methodology: in medical school cooperative
university Colombia practical laboratory in
which a series of procedures where first
extracted a sample is blood of a fellow group
and immediately the respective sample was
introduced into five became was performed
vacutainer tubes system, which would later be
spun and then give way to the above
procedure.
Results: The first procedure was performed
Biuret test , which was positive , then hemolysis
was cellular components , the test was
successful and salting out by adding
trichloroacetic acid was observed that
denaturation was irreversible.
Conclusions: The blood protein can be
denatured by external factors as well as our
group of laboratory work; also can occur within
our body, either by drugs, autoimmune
diseases or many other causes
Keywords: peptide links, ammonium sulfate,
trichloroacetic acid, salting out, denaturation,
Proteins.

2. Introducción
Las proteínas son moléculas formadas por
cadenas lineales de aminoácidos, los
aminoácidos son compuestos orgánicos que
contienen grupos aminos y carboxilo y por lo
tanto poseen propiedades ácidas y básicas.
Las proteínas se pueden encontrar en
diferentes medios, en el laboratorio estudiamos
las proteínas en sangre.La sangre es un fluido
biológico compuesto por una suspensión de
células y otros numerosos elementos tales
como las proteínas, lipoproteínas, glúcidos,
sales, etc. Los elementos celulares
corresponden a eritrocitos (glóbulos rojos),
leucocitos (glóbulos blancos) y plaquetas. Entre
las proteínas, las más abundantes están
representadas por la albúmina, las Globulinas y
el fibrinógeno.
Las proteínas presentan un arreglo
tridimensional en su estado nativo. Sin
embargo, esta conformación puede ser
perturbada por las condiciones del medio en
que se encuentra, especialmente en
condiciones in vitro. La desnaturalización de
una proteína indica “disrupción” de las
estructuras cuaternaria, terciaria, secundaria y
primaria. Esto puede ocurrir con la variación del
pH, la temperatura, la naturaleza del solvente y
de los solutos del medio. Las proteínas por otro
lado, también pueden ser precipitadas en el
medio por la adición de ciertas sales, de tal
manera que se insolubilizan reversiblemente
sin sufrir desnaturalización. Este procedimiento
se denomina “saltingout”.
Materiales
Guantes, tapaboca y gorro
Sistema vacutainer con tubos tapa lila
que contienen EDTA como
anticoagulante.
Torniquete
Tubos de ensayo
Tubos de centrífuga
Gradilla
Pipetas
Tapones de Caucho
REACTIVOS
Solución de ácido Tricloroacético al 50%
Sulfato de Amonio
Reactivo de Biuret
Hidróxido de sodio al 10% (p/v)
Metodología
Primer paso: Se utilizó la reacción de Biuret,
en donde a 1 ml de solución de gelatina sin
sabor se adiciono un volumen igual de NaOH
al 10%, luego agregamos gota a gota solución
de Biuret y agitamos. Realizamos el mismo
proceso, pero esta vez lo hicimos con plasma
sanguíneo.
Segundo paso: obtuvimos una muestra de
sangre de 20 ml de un compañero del grupo
usando el sistema vacutainercon tubo de tapa
color lila. Retiramos la aguja y dispensamos
inmediatamente la muestra de sangre en dos
tubos de centrífuga limpios.
Tercer paso: Separamos el plasma y las
células sanguíneas centrifugando cada muestra
de sangre durante 10 minutos en una
centrífuga clínica a 2400 r.p.m. Removimos el
plasma con una pipeta de plástico colocando
las dos muestras en un mismo tubo de ensayo.

3. Cuarto paso: Mezclamos aproximadamente
1 ml de componentes celulares del precipitado
con 9 ml de agua destilada en un tubo de
ensayo, se rotulara como solución de
Hemoglobina.
Quinto paso: Tomamos dos tubos de
centrífuga y por separado colocamos en uno de
ellos 5 ml de plasma y en el otro 5 ml de
solución de hemoglobina. Añadimosa cada tubo
en porciones muy pequeñas 0.88 gr. de sulfato
de amonio. Esta cantidad de sulfato de amonio
corresponde al 30% de saturación.
Mezclamos nuevamente, centrifugamos y
separamos el sobrenadante en otro tubo de
centrífuga. A este sobrenadante añadimos en la
misma forma a cada tubo 1.48 gr. de sulfato de
amonio para completar una saturación del 70%.
Centrifugamos cada tubo durante 10 minutos.
Separamos los sobrenadante con una pipeta
desechable. Añadimos a cada tubo con
precipitado 4 ml de agua destilada y
mezclamos.
Sexto paso: Tomamos 2 ml de plasma en
un tubo de centrífuga y 2 ml de solución de
hemoglobina en otro tubo de centrífuga.
Añadimos a cada tubo 0.5 ml de ácido
Tricloroacético (TCA) al 50%. Agitamos y
centrifugamos por 10 minutos. Luego
separamos los sobrenadantes con una pipeta.
Añadimos a cada tubo 4 ml de agua destilada y
mezclamos.
Resultados
Cuando mezclamos gelatina sin sabor con
NaCl y adicionamos reactivo de Biuret, la
reacción se tornó de color violeta debido a que
se encontraban enlaces peptídicos
Luego cuando se separó el plasma y los
componentes celulares y cada uno de ellos se
les adiciono agua destilada, se pudo observar
como los eritrocitos se hinchaban y explotaban,
produciéndose la hemolisis.
En el siguiente procedimiento al adicionar
sulfato de amonio al plasma y a los
componentes celulares, estos se insolubilizaron
de manera irreversible, ya que luego al
adicionar agua destilada, volvieron a su estado
normal.
Igual que en el anterior procedimiento se
separó el plasma y los componentes celulares
pero esta vez se le adiciono ácido tricloracético,
pero se observó que esta reacción si era
irreversible, ya que luego al adicionar agua
destilada, el plasma y los componentes
celulares no quedaron en su estado inicial.
Bibliografía
http://es.wikipedia.org/wiki/Biuret
http://ehfdquimica.com/2012/09/25/
sales-proteinas-y-solubilidad-
efectos-salting-out-y-salting-in/
http://www.slideshare.net/PaoLaGa
rcia11/la-hemolisis-en-muestras-
sanguineas