Lab bioquimica enzima

1. ¿El Cianuro y el plomo inhiben la actividad de la enzima catalasa?
Objetivo: El alumno observará la actividad de la enzima Catalasa utilizando diferentes
fuentes biológicas y comprenderá el efecto de la temperatura de algunos inhibidores como el
Pb y CN sobre la actividad enzimática de la Catalasa.
Las enzimas son moléculas de naturaleza proteica que catalizan reacciones químicas; Como todos los catalizadores, las enzimas funcionan
disminuyendo la energía de activación (ΔG‡) de una reacción, de forma que se acelera sustancialmente la tasa de reacción. Las enzimas no alteran
el balance energético de las reacciones en que intervienen, ni modifican, por lo tanto, el equilibrio de la reacción, pero consiguen acelerar el
proceso incluso millones de veces.
La actividad de las enzimas puede ser afectada por otras moléculas. Los inhibidores enzimáticos son moléculas que disminuyen o impiden la
actividad de las enzimas
CLASIFICACIÓN TRADICIONAL DE LAS ENZIMAS
DESHIDROGENASAS.- Catalizan la pérdida de hidrógeno (H+ y e-) de un sustrato
teniendo como aceptor una molécula diferente al oxígeno.
OXIDASAS.- Catalizan la pérdida de hidrógeno de un sustrato teniendo como aceptor al oxígeno.
QUINASAS (CINASAS).- Catalizan la transferencia de grupos fosfato del ATP a otra molécula.
TRANSAMINASAS.- Transfieren grupos amino a grupos carbonilo.
FOSFATASAS.- Rompen enlaces fosfoéster en presencia de agua.
TIOQUINASAS (TIOCINASAS).- Forman enlaces tioéster dependientes de ATP a partir
de la coenzima A y ácidos carboxílicos.
MUTASAS.- Catalizan rearreglos intramoleculares de grupos funcionales.
TRANSALDOLASAS Y TRANSCETOLASAS.- Transfieren grupos de tres y dos carbonos respectivamente.
EPIMERASAS.- Catalizan la formación de compuestos con orientaciones espaciales
diferentes. Por ejemplo: D L ó L D
DESCARBOXILASAS.- Eliminan grupos carboxilo.
SINTETASAS.- Forman nuevos compuestos por condensación de dos sustratos.
HIDROLASAS.- Rompen enlaces introduciendo una molécula de agua
FOSFORILASAS.- Introducen fosfato inorgánico
NÚMERO DE CLASIFICACIÓN DE LAS ENZIMAS.
El número de clasificación de las enzimas consta de 4 dígitos separados por puntos.
A . B . C . D
El primer dígito es la CLASE. Indica el tipo de reacción
El segundo dígito es la SUBCLASE. Indica el sustrato
El tecer dígito es la SUB SUB CLASE. Indica el cosustrato.
El cuarto dígito es el NÚMERO DE ORDEN.
La comisión internacional de las enzimas ha clasificado a las enzimas en 6 clases que son:
1 OXIDORREDUCTASAS Catalizan reacciones de óxido-reducción
2 TRANFERASAS Catalizan reacciones de transferencia de grupos
3 HIDROLASAS Catalizan ruptura de enlaces químicos con adición de agua.
4 LIASA Catalizan la ruptura de enlaces químicos sin participación de agua (adición a dobles enlaces).
5 ISOMERASAS Catalizan reacciones de isomerización.
6 LIGASAS O SINTETASAS Catalizan reacciones que consisten en unir
dos moléculas.
NOMENCLATURA DE LAS ENZIMAS
Algunas enzimas tienen nombres no descriptivos como tripsina, quimotripsina, pepsina, etc. Sin embargo la mayoría de las enzimas se denominan
con la terminación –asa- tomando como base el tipo de reacción que catalizan y/o el sustrato que transforman
SUSTRATO ENZIMA
Almidón (Amylum) Amilasa
Lípido Lipasa
Lactosa Lactasa
ENZIMAS
Las enzimas son proteínas complejas que producen un cambio químico específico en todas las partes del cuerpo. Por ejemplo, pueden
ayudar a descomponer los alimentos que consumimos para que el cuerpo los pueda usar. La coagulación de la sangre es otro ejemplo del
trabajo de las enzimas. Las enzimas son necesarias para todas las funciones corporales. Se encuentran en cada órgano y célula del cuerpo,
como en:
La sangre
Los líquidos intestinales
La boca (saliva)
El estómago (jugo gástrico)
ESPECIFICIDAD:
Que se define como la presencia que presentan las enzimas hacia ciertos sustrato.
son específicas:
Por la forma del sitio activo.
Por los residuos del sitio activo
Por el medio electrónico del sitio activo.
DESNATURALIZACIÓN PROTEICA:
Proceso o serie de procesos en el que se altera la disposición espacial de las cadenas polipeptídicas dentro de la molécula,
transformándose la estructura típica de la proteína nativa en otra más desordenada. La desnaturalización puede ser causado por
temperatura, pH, agentes reductoresu oxidantes, etc.
CATALASA
La catalasa es una enzima perteneciente a la categoría de las oxidorreductasas que cataliza la descomposición del peróxido de hidrógeno
(H202) en oxígeno y agua. Esta enzima utiliza como cofactor al grupo hemo y al manganeso.
2 H2O2 ↔ 2 H2O + O2
El peróxido de hidrógeno es un residuo del metabolismo celular de muchos organismos vivos y tiene entre otras una función protectora
contra microorganismos patógenos, principalmente anaerobios, pero dada su toxicidad debe transformarse rápidamente
MATERIAL
12 tubos de ensaye
NaCN al 5%
Pb(NO3)2 al 5%
H2O2
Papa
Manzana
Higado de pollo
pinzas
DISCUSIÓN:
• En todos los tubos se presentaron los mismos resultados, éstos fueron
acordes a los esperados, pues la temperatura, el plomo y el cianuro son
inhibidores enzimáticos, por lo que no permitieron que la enzima catalasa
degradara el peróxido de hidrogeno.
• el burbujeo confirmaba la reacción.
Conclusión
El cianuro, la temperatura y el Plomo,
son buenos inhibidores de la enzima
catalasa, pues no se llevo a cabo la
reacción que degrada el peróxido de
hidrógeno
1º Cortar en 4 trozos delgados: la manzana, la papa y el
hígado de pollo en forma rectangular (procurando que todos
sean del mismo tamaño ) y colocarlos en el papel absorbente
Nota: No se debe manipular con los dedos directamente ni
con pinzas
2º Preparar una serie de tubos como lo muestran las tablas:
Contenido Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4
Tejido
(Manzana)
Sin hervir Hervido Sin hervir Sin hervir
NaCN 5 % ------------ ---------- 5 gotas -----------
Pb(NO3)2 5% ----------- --------- --------- 5 gotas
H2 O2 2 mL 2 mL 2 mL 2 mL
Contenido Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4
Tejido (papa) Sin hervir Hervido Sin hervir Sin hervir
NaCN 5 % ------------ ---------- 5 gotas -----------
Pb(NO3)2 5% ----------- --------- --------- 5 gotas
H2 O2 2 mL 2 mL 2 mL 2 mL
Contenido Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4
Tejido (Hígado
Sin hervir Hervido Sin hervir Sin hervir
de pollo)
NaCN 5 % ------------ ---------- 5 gotas -----------
Pb(NO3)2 5% ----------- --------- --------- 5 gotas
H2 O2 2 mL 2 mL 2 mL 2 mL
NOTA: En el tubo 2 debe ser colocando agua destilada hasta cubrir el tejido y luego introducirlo al
baño María (agua hirviendo) durante 5 min. Después de hervir vaciar el agua que tiene el tubo y
agregar lo que se indica en la tabla.
3º Por último se mezclan bien los tubos, y se marca con cruces del 1 al 5 según aparece la intensidad de
burbujeo en cada tubo.
Cuestionario
1. Defina el pI de una proteína
Es el grado de PH necesario para que la carga neta de una proteína sea igual a 0, a ese PH
pierde su solubilidad puesto que se vuelve incapaz de desplazarse en un campo eléctrico, por
tanto precipita.
2. Escriba la ecuación de Henderson Hasselbach
푝퐻 = 푝퐾푎 + 푙표푔
[퐴−]
[퐻퐴]
3. ¿Porqué el alcohol actúa como agente precipitante para la gelatina?
La polaridad del disolvente disminuye cuando se le añaden sustancias menos polares que el
agua como etanol o la acetona. Con ello disminuye el grado de hidratación de los grupos
ionicos superficiales de la molécula proteica, provocando la agregación y precipitación. Los
disolventes orgánicos interaccionan con el interior hidrofóbico de las proteínas, y desorganizan
la estructura terciaria, provocando su desnaturalización y precipitación.
Resultado de los tubos con tejido de manzana
Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4
xxx 0 0 0
Resultado de los tubos con tejido de hígado de pollo
Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4
xxx 0 0 0
Resultado de los tubos con tejido de papa
Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4
xxx 0 0 0