Este documento describe procedimientos de laboratorio para el aislamiento e identificación de hongos. Explica cómo realizar exámenes directos, cultivos y pruebas serológicas y moleculares en muestras de piel, uñas, pelo, esputo y otros fluidos corporales para diagnosticar infecciones fúngicas como dermatofitosis, candidiasis y criptococosis. Además, detalla técnicas de microscopía, cultivo en medios selectivos y uso de la reacción en cadena de la polimerasa para identificar

1. PROCEDIMIENTO LABORATORIAL PARA
AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE HONGOS
M. Sc. Roberto Ventura Flores
Biólogo – Microbiólogo
tiernobacilo@hotmail.com

2. DIAGNÓSTICO MICOLÓGICO
 Examen directo por microscopía, pruebas inmunológicas o
técnicas genéticas.
 Aislamiento del agente de diversos sitios anatómicos o fluidos
corporales.
 Respuesta de anticuerpos específicos contra el patógeno.

3. MUESTRAS MICOLOGICAS
MICOSIS SUPERFICIALES:
 Dermatofitos: Trichophyton
Microsporum y Epidermophyton
 Pitiriasis versicolor: Malassezia 1
 Piedras: Trichosporom ovoides,
T. inkin y T. cutaneum. Piedraia hortae.
 Tiña negra: Hortaea werneckii. 1
MICOSIS OPORTUNISTAS:
*Candidiasis: C. albicans, 1,3,4,5,7,8,11
*Criptococosis: C. neoformans. 4,5,6,7,8,10
*Neumosistosis: P. jirovecii
*Zigomicosis: Rhizopus oryzae,
Mucur circinelloides
*Aspergillus: A. fumigatus, A. niger,
A. flavus, a terreus, etc.
MICOSIS SISTEMICAS O PROFUNDAS
 Coccidioidomicosis: Coccidioides
immitis y C. posadasii
 Histoplasmosis: H. capsulatum
 Paracoccidioidomicosis: P. brasiliensis
 Blastomicosis: Blastomysis dermatitidis
MICOSIS SUBCUTÁNEAS:
 Micetoma: Nocardia, Streptomyces, 4, 10
 Esporotricosis: S. schenckii. 1, 4, 10
 Cromoblastomicosis: Fonsecaea
pedrosoi y Cladophialophora carrionii
1. Piel (escamas)
2. Pelo
3. Uña
4. Exudado
5. Esputo
6. Lavado bronquiales
7. LCR
8. Orina
9. Medula ósea
10. Frag. de biopsia
11.Sangre
12. Heces
1, 2, 3
2
1*
1. 4, 5, 6
4, 5, 7, 10
4,5,6,7,9,10
4,5,6,7,8,10
4,5,6,10
5,6
4,5,6, 12

4. DIAGÓSTICO DIRECTO DE RASPADO DE PIEL
ARTROCONIDIAS
KOH
Se observa BLASTOCONIDIAS
Compatibles con Malassezia
Azul de Lactofenol

5. CULTIVO DE RASPADO DE PIEL
Sabouraud
Diagnostico:
 Dermatofito
30°CT°
Ambiente

6. CULTIVO DE MUESTRAS DE PELO
Diagnostico:
 Dermatofito
 Trichosporum
 Piedraia ¿?
30°CT°
Ambiente
Sabouraud

7. DIAGNOSTICO DIRECTO DE ONICOMICOSIS
ARTROCONIDIAS
KOH

8. CULTIVO DE MUESTRAS DE UÑA
Diagnostico:
 Dermatofito
 candidiasis
30°CT°
Ambiente
Sabouraud

9. EXUDADO
MICOSIS SUPERFICIALES:
 Dermatofitos: Trichophyton
Microsporum y Epidermophyton
 Pitiriasis versicolor: Malassezia
 Piedras: Trichosporom ovoides,
T. inkin y T. cutaneum. Piedraia hortae.
 Tiña negra: Hortaea werneckii
MICOSIS OPORTUNISTAS:
*Candidiasis: C. albicans, etc.
*Criptococosis: C. neoformans
*Neumosistosis: P. jirovecii
*Zigomicosis: Rhizopus oryzae,
Mucur circinelloides
*Aspergillus: A. fumigatus, A.
niger, A. flavus, a terreus, etc.
MICOSIS SISTEMICAS O PROFUNDAS
 Coccidioidomicosis: Coccidioides
immitis y C. posadasii
 Histoplasmosis: H. capsulatum
 Paracoccidioidomicosis: P. brasiliensis
 Blastomicosis: Blastomysis dermatitidis
MICOSIS SUBCUTÁNEAS:
 Micetoma: Nocardia, Streptomyces, etc.
 Esporotricosis: S.schenckii
 Cromoblastomicosis: Fonsecaea
pedrosoi y Cladophialophora carrionii

10. CULTIVO DE EXUDADOS
30°CT°
Ambiente
Sabouraud

11. EXAMEN DIRECTO Y CULTIVO DE ORINA
30°CT°
Ambiente
Sabouraud
CENTRIFUGADO

12. 30°CT°
Ambiente
Sabouraud
CULTIVO DE LCR
Detección de antígenos capsulares:
 Técnica: aglutinación de partículas de látex sensibilidad con
anticuerpos monoclonales Específicos anti C. neoformans.
 Sensibilidad en LCR: > 95%
Sensibilidad cercana al 100%
OTROS:
 Histoplasmosis: H. capsulatum
 Paracoccidioidomicosis: P. brasiliensis
 Blastomicosis: Blastomysis dermatitidis

13. CULTIVO DE BIOPSIAS
30°CT°
Ambiente
Sabouraud

14. TECNICA DE MICROCULTIVO
30°/ Tiempo variable
Cultivo positivo:
DERMATOFITO
Cultivo positivo:
Sporothix sp.
Cultivo positivo:
Aspergillus sp.

15. MICROCULTIVO: IDENTIFICACION DERMATOFITOS
Microsporum
Diferenciar microconidios de macroconidios
Trichophyton
Epidermophyton

16. MICROCULTIVO: IDENTIFICACION Sporotrix schennkii
simpoduloconidios

17. MICROCULTIVO: IDENTIFICACION Aspergillus
Aspergillus flavus Aspergillus fumigatus
vesicula
Aspergillus niger Aspergillus terreus
fiálides
conidióforo
Microconidios

18. SEROLOGIA
MICOSIS SUPERFICIALES:
 Dermatofitos: Trichophyton
Microsporum y Epidermophyton
 Pitiriasis versicolor: Malassezia
 Piedras: Trichosporom ovoides,
T. inkin y T. cutaneum. Piedraia hortae.
 Tiña negra: Hortaea werneckii
MICOSIS OPORTUNISTAS:
*Candidiasis: C. albicans, etc.
*Criptococosis: C. neoformans
*Neumosistosis: P. jirovecii
*Zigomicosis: Rhizopus oryzae,
Mucur circinelloides
*Aspergillus: A. fumigatus, A.
niger, A. flavus, a terreus, etc.
MICOSIS SISTEMICAS O PROFUNDAS
 Coccidioidomicosis: Coccidioides
immitis y C. posadasii
 Histoplasmosis: H. capsulatum
 Paracoccidioidomicosis: P. brasiliensis
 Blastomicosis: Blastomysis dermatitidis
MICOSIS SUBCUTÁNEAS:
 Micetoma: Nocardia, Streptomyces, etc.
 Esporotricosis: S.schenckii
 Cromoblastomicosis: Fonsecaea
pedrosoi y Cladophialophora carrionii
(β -1,3 D-GLUCANOS

19. DETERMINACION DE β -1,3 D-GLUCANOS
PRODUCTOS LIBERADOS EN ALGUNAS INFECCIONES FUNGICAS:
 CANDIDIASIS
 NEUMOCISTOSIS
 ASPERGILOSIS
SE REALIZA EN SUERO SANGUINEO POR METODO DE ELISA Y SU
POSITIVIDAD SÓLO ES SUGESTIVO DE INFECIÓN FUNGICA.

20. PRINCIPIO Y APLICACION
AGAR CROMOGENICO CANDIDA es un medio selectivo y de
diferenciación para el aislamiento de hongos. Con la inclusión de sustratos
cromógenos en el medio, las colonias de C. albicans, C. tropicalis y C. krusei
producen colores diferentes, lo que permite la detección directa de estas
especies de levaduras en la placa de aislamiento.
En el medio la glucosa es el carbohidrato fermentable aporta carbono y
energía. La Peptona aporta nitrógeno, vitaminas, minerales y aminoácidos
esenciales para el crecimiento. El Cloranfenicol es un antibiótico que ayuda
en el aislamiento de hongos patógenos de muestras clínicas altamente
contaminadas. La Mezcla de cromogenicos permite la identificación y la
diferenciación de las 3 especies de candidas.
Cultivo en medios cromogénicos

22. La región genómica más frecuentemente utilizada para detectar ADN
fúngico e identificar especies, es la que incluye el complejo ribosomal
(genes 18S, 5.8S y 28S). Estos genes contienen secuencias conservadas
comunes a todos los hongos y también, dominios variables y regiones
espaciadoras internas (ITS), altamente variables.
BIOLOGIA MOLECULAR:
PCR
PCR: Es una síntesis in
vitro, exponencialmente
progresiva, de una
secuencia (target) de ADN

26. Componentes:
 Oligonucleótidos (cebadores)
 Tampón (buffer)
 ADN polimerasa termoestable
 Desoxinucleótidos (dNTPs)
 Cloruro de Magnesio (Mgcl2)
 ADN molde

34. 10

35. Segunda especialidad en Microbiología Clínica

36. GRACIAS