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1. En una laboratrio de micología tradicional se basa principalmente en la microscopia
y el cultivo; sin embargo, actualmente el desarrollo está centrado en la búsqueda de
metodologías rápidas como la detección de antígenos y/o anticuerpos y las técnicas de
biología molecular, las cuales todavía no estánimplementadas en nuestro laboratorio.
A continuación se revisan los principales aspectos de las diferentes metodologías
disponibles en el laboratorio de micología.
MUESTRAS CLÍNICAS
El mejor resultado microbiológico se obtiene cuando la muestra que se recibe en el
laboratorio es recolectada en las mejores condiciones. Se debe considerar dependiendo
de la localización (heridas, expectoración, secreción vaginal, lavado broncoalveolar,
líquidos de cavidades estériles, etc.), las cuales nos llegan de los diferentes
especialidades y pabellones o son referidas por otras instituciones sobre todo de
hospitales, que no realizan micología, lo que califica a nuestro laboratorio como de
Referencia. Las muestras de piel, pelos y uñas son tomadas por un equipo de
profesionales bien entrenado, perteneciente al departamento de toma de muestra de
nuestro hospital. En general, todas las muestras se obtienen en las mismas condiciones
que para el estudio microbiológico habitual, asegurando de procesar las partes más
sospechosas de contener elementos infecciosos (necróticas, caseosas, hemorrágicas,
etc).
TÉCNICAS DIAGNÓSTICAS UTILIZADAS POR MICROSCOPIA
La observación microscópica puede dar información preliminar (al Bioanalista y al
Medico), sobre la presencia o ausencia de hongos en la muestra clínica y orientar
sobre la especie causante de la infección debido a la observación de elementos
micóticos característicos. Algunos elementos que podremos observar al microscopio
son levaduras, hifas septadas o aseptadas, pseudohifas, conidios caracteristicos de una
especie, etc.
EXAMEN DIRECTO
El examen al fresco entre lámina y laminilla es un método de bajo costo, rápido y que
no requiere equipos especiales; sin embargo, debe ser realizado por personal
entrenado. Su sensibilidad depende del tipo y cantidad de muestra y del número de
microorganismos presentes en ella. Cuando la muestra tiene detritus celulares se
utiliza hidróxido de potasio al 10%, el cual clarifica de material orgánico y deja
visibles las estructuras fúngicas.
PRUEBA PARA MALASSEZIAS
DIAGNÓSTICO DIRECTO
La morfología peculiar de Malassezia lo hace reconocible en muestras clínicas y la
microscopia directa es la de mayor importancia. La fase levaduriforme y/o micelial
son fácilmente observables en el examen micológico con solución de Albert o azul de
metileno (1%).
La muestra para diagnosticar Pitiriasis versicolor es obtenida utilizando una cinta
scoth tape del área afectada, la cual es coloreada para ver los elementos fúngicos
característicos de esta afección.

2. Si se sospechara de Malassezia sp como fungemia (cuando el paciente no responde a la
terapia y todos los cultivos repetidos, bacterianos y micológicos son negativos), el
médico debe solicitarlo por seresta una prueba no usual que con lleva medios con
adición de aceite para que crezcan estos hongos.
TINCIÓN DE GRAM
Es una técnica barata y rápida, que nos permitirá observar levaduras gemantes o
formación pseudohifas con mayor claridad que el examen directo; sin embargo, debe
tenerse presente que los hongos filamentosos no se tiñen o lo hacen muy débilmente
con tinción de Gram, por lo que si se sospecha la presencia de un hongo filamentoso,
no debe utilizarse.
TINCIÓN DE CÁPSULA
Esta técnica es útil para la búsqueda de Cryptococcus neoformans en muestras
clínicas, especialmente en Liquido Cefalorraquídeo. Utiliza tinta china la cual destaca
el material capsular como un halo claro (no teñido) alrededor de la levadura. En casos
de criptococosis meníngea, logra una sensibilidad de alrededor de 75.
COLORACIÓN DE GROCOTT
La coloración de Grocott modificada, es una técnica que hemos venido realizando con
mucho éxito sobre todo para muestras broncopulmonares, con la cual se ahorra
tiempo en el diagnostico ya que las estructuras fúngicas se observan mejor al ser
teñidas con la plata argéntica, con la cual hemos podido identificar muchos hongos
antes desconocidos en nuestra unidad, como son los Blastomices, Neoscytalidium,
Pneumocistis jiroveci Prototheca wickerhamii y recientemente Bipolaris hawaiiensis.
CULTIVOS
La siembra microbiológica es necesaria para lograr la identificación de especie de los
diversos hongos comprometidos en infecciones fúngicas y permite además realizar
estudio de susceptibilidad en caso de sernecesario. En general, si no hay suficiente
material para realizar el examen directo y el cultivo, este último tiene prioridad por su
mayor sensibilidad.
Utilizamos medios como agar Sabouraud, Micobiotic agar y Medio especial para
dermatofitos como es el DTM o medio para dermatofitos y medios inhibitorios que
por contener antimicrobianos, evitan un crecimiento bacteriano excesivo para
muestras provenientes de sitios no estériles.
HEMOCULTIVOS
Últimamente se han desarrollado una gran variedad de sistemas automatizados
para hemocultivos, los cuales en su botella estándar utilizan medios enriquecidos
líquidos para cultivar un sin número de microorganismos incluyendo los hongos
levaduriformes. El hallazgo de un hongo en sangre verifica el diagnóstico de una
micosis invasora. En el caso de los hongos filamentosos, aun cuando ellos estén
invadiendo tejido, escasamente se encontrarán en sangre, debiendo sembrar la
muestra desde el principio en medios sólidos adecuados para su recuperación

3. temprana cuando haya sospecha clínica de fungemia, previo aviso al laboratorio para
la búsqueda adecuada de tales microorganismos.