Un laboratorio de micología requiere: 1) una sala adecuada, 2) instrumentos como pinzas y cajas de Petri, y 3) técnicas de búsqueda de anticuerpos, cultivo y aislamiento de hongos. Se deben seguir protocolos de bioseguridad y obtener muestras adecuadas como esputos o exudados para identificar hongos mediante tinción, cultivo e investigación inmunológica.

1. MEDICINA V
 NICOLE BEJARANO
VILLEGAS
 PAULA ANDREA VALDES
MAYOR

2. REQUISITOS PARA
UN LABORATORIO
DE MICOLOGÍA
• 1. Sala adecuada.
• 2. Poseer los
instrumentos
• 3. técnicas de búsqueda
de anticuerpos
• 4. laboratorio de biología
molecular
• 5. bioseguridad.
TÉCNICAS Y
MÉTODOS
• 1. Poner de manifiesto el
parásito
• 2. Permitir el aislamiento
del hongo
• 3. Identificación del
hongo.
• 4. Investigación de las
reacciones inmunitarias

3. • ÚTIL EN ALGUNAS MICOSIS SUPERFICIALES

4. • Pinzas de depilar y
tijeras, Aguja de
disección. Cajas de
Petri o portaobjetos,
Asa de aluminio o
platino, Matraces
Erlenmeyer, Tubos de
ensayo, espátulas,
torundas, Cepillos,
Solución salina, formol
, Medios de cultivo.

5. OBTENCIÓN DE
MUESTRAS
RECHAZO DE
MUESTRAS
• 1. esputo mas no la
saliva.
• 2. Las muestras de las
zonas enfermas pero no
ser tomadas al azar.
• 3 Muestras insuficientes.
• 4. no se usen muestras
con mucho tiempo de
almacenamiento

6. MUESTRA
ESCAMAS
PELO
EXUDADO
MUCOSAS
PUS Y LIQUIDOS
PATOLOGICOS
EXPECTORACION
HECES
SANGRE

8. • tinción de Gram
• azul de metileno
• Giemsa
• PAS
• Papanicolaou

9. • valorar el tipo de reacción en
los tejidos, que puede ser:
congestiva con
vasodilatación, edema,
exudados y depósitos de
fibrina; purulenta, con
cúmulos de
polimorfonucleares, o más a
menudo granulomatosa con
histiocitos, células gigantes
de tipo cuerpo extraño o de
Langhans, rodeadas por
linfocitos y plasmocitos.
• Los hongos se presentan en
forma de filamentos,
levaduras y esporangios
• fenómeno de Splendore-
Hoeppli

10. • Sencillo, rápido y barato.
• Se efectúa a partir de
escamas, pelos y
exudados. (Dificiles de
observar sin sustancias
aclarantes)
• Se encuentran
abundantes hongos
oportunistas.
• Se utiliza solución de
lugol.

11. • Se utiliza blanco de
calcoflúor bajo el
microscopio fluorescencia.
• Se observan hifas,
seudohifas y levaduras.
• Imposible ver endosporas
de C. immitis.

12. • Las muestras se
recolectan con un hisopo
estéril.
• Especímenes en el centro
del cultivo, a temperatura
ambiente (en caso de
micosis profundas de 30 a
37 C°)
• Las levaduras se
siembran en zigzag y se
desarrollan en 24 a 48
horas.
• Los hongos patógenos se
desarrollan en una a dos
semanas.

13. Técnica de resiembra: Recolección de la colonia en tubo
pasa la conservación de la cepa.
Cultivo en lámina o microcultivo: Se coloca un
fragmento del cultivo en un porta objetos con laminilla.
Esta técnica tiene dos variedades:
• Lamina desecada
• Cuadrado de gelosa

14. Cultivo sobre pelo o método del anzuelo: Se depositan
en tierra húmeda pelos o cabellos para aislar
dermatofitos del suelo.
Ataque del pelo in vitro: En agua estéril se depositan
cabellos rubios o de niño junto con el extracto de
levadura, permite la observación de dermatofitos.

15. Importante para definir especies de levaduras.
Auxonograma: Asimilación de alimentos con carbono o
nitrógeno.
Medio de lodder modificado:
• Asimilación de azucares.
• Asimilación de nitrógeno.

16. Zimograma: Fermentación de azucares, cultivo de
levadura en medio liquido con glucido.
Medio de Marcelou-Kinti: Agar en 900ml de agua por 24
horas.
Se añade peptona y se calienta a 110°C durante 10
minutos.
Si hay fermentación, el medio se decolora.

18. En tubos se incuba un fragmento de cultivo o suspensión
de esporas o levaduras. No se observa crecimiento en el
tubo donde falta una vitamina indispensable.

19. Se utiliza medio urea-indol a
37°C. Rojo fenol, de color
amarillo, vira a rojo-violeta
en tres a seis horas.
(cryptococcus)
En tubos solidificados en
posición inclinada se
siembra un pequeño
inoculo de la colonia y se
incuba a 25 grados
centígrados.

20. Se emplea en la investigación, pero también tiene utilidad
diagnostica.
Se usan conejos, ratas, ratones, cobayos y hámsteres.
Los hongos pueden ser inoculados por vía subcutanea,
intravenosa, intraperitoneal, intratesticular e
intracraneal.

21. PRUEBAS DE
SENSIBILIDAD
CUTÁNEA
• intradermorreacciones
SERODIAGNÓSTICO Y
DETECCIÓN DE
ANTÍGENOS
• doble difusión en agar
• técnica de Ouchterlony
• técnicas de electrodifusión pueden
ser inmunoelectroforesis y
electrosinéresis
• anticuerpos fijadores de
complemento
• inmunofluorescencia indirecta
• técnicas inmunoenzimáticas
• anticuerpos monoclonales

23. Se utilizan métodos como: tubos germinativos,
consumo de metabolitos, citometría de flujo,
métodos basados en agar y dilución de caldos de
cultivo.
Las técnicas de agar son fáciles y de bajo costo. Los
métodos de dilución son ampliamente usados pero
reservados para Candida y Cryptococcus.

24. Prueba Colorimétrica
Se usa azul de alamar para producir cambio de azul a rojo,
cuando se reduce en presencia de un crecimiento
microbiano. Las sales de tetrazoilo pueden cambiar de
color cuando se reducen, y para detectarlo se usa el
espectrofotómetro.

25. • se pueden agregar dos
gotas de una mezcla de
penicilina estreptomicina o
emplear medios que
contengan cloranfenicol
Técnicas de aislamiento
para líquidos, sólidos y
ambiente
• técnica de dilución y
vaciado en placa

26. MORFOLOGÍA
MACROSCÓPICA
1. Forma y tamaño.
2. Color en la superficie o en el
reverso.
3. Difusión del pigmento.
4. Coloración
5. Textura
6. Superficie
7. Aspecto
8. Consistencia
9. Rapidez de crecimiento
MORFOLOGÍA
MICROSCÓPICA
1. Análisis a través del tubo.
2. Análisis de un fragmento del
cultivo.
3. Método de la cinta adhesiva
transparente
4. Cultivo en lámina

28. Preservar su viabilidad, sin
degeneración, variación ni
mutación.
mantener en agar
método de agua destilada
Congelado en nitrógeno
líquido

29. • Contraste de fase
• Campo oscuro
• Microscopia
electrónica

30. Permite estudiar cualidades estables e inmodificables por
el ambiente.
• Hibridación.
• Reacción en cadena polimerasa.
• Polimorfismo en la longitud de los fragmentos de
restricción.

31. • Análisis de polimorfismo en la longitud de los
fragmentos de restricción de regiones amplificadas
por PCR.
• Análisis del polimorfismo en la conformación de las
cadenas sencillas de ADN de regiones amplificadas
por reacción de PCR.
• Análisis del polimorfismo del ADN amplificado con
cebadores arbitrarios.

32. Las vías más frecuentes
de exposición son:
• accidentes con objetos
punzocortantes
• picaduras
• mordeduras de
animales
• la inhalación de
aerosoles
• ingestión accidental
• contacto de
membranas mucosas

33. • En un laboratorio de micología, se debe actuar con
responsabilidad y observar las más elementales normas
de seguridad para evitar accidentes de trabajo.