Este documento evalúa los aceites esenciales de laurel (Laurus nobilis), calaminta (Calamintha officinalis) y salvia morada (Lippia alba) para controlar la ascosferosis o cría yesificada en colmenas de abejas melíferas causada por el hongo Ascosphaera apis. Los resultados mostraron que C. officinalis tuvo la mayor actividad inhibitoria sobre A. apis in vitro y fue atóxica para abejas adultas y larvas, por lo que es promisoria para el control de esta enfermed

1. “Evaluación de aceites
esenciales para el control de
ascosferosis en colmenas de
abejas melíferas”
Albo G.
Producción Animal I. Facultad de Ciencias Agrarias
y Forestales. UNLP. La Plata, ARGENTINA.
albo.graciela@yahoo.com.ar

2. La cría yesificada es
una micosis invasiva de
las abejas melíferas (A.
mellifera, L.), que
afecta el estadío larval.
El agente causal es el
hongo Ascosphaera
apis (Maassen ex
Claussen) Olive &
Spiltoir (1955).

3. Síntomas de la enfermedad

4. Estructuras reproductivas de A. apis
Ascoscistos
Esporocistos
Ascospor
as

5. Importancia de la enfermedad
Argentina 1º-2º exportador
mundial de miel
Menor eficiencia Reduce la producción
polinizadora de miel
Cría Yesificada
Rara vez mata 12 % de infección no
una colmena se detecta.
Control
80 % colmenas Las esporas infectan
Apic. migratoria larvas sanas
Esporas
Buscar alternativas
de manejo integrado

6. OBJETIVO
Evaluar y comparar la actividad in
vitro de las esencias de Laurus
nobilis, Calamintha officinalis y
Lippia alba sobre Ascosphaera
apis, y sus potenciales efectos
tóxicos en los estadíos adulto y
larval de Apis mellifera L.

7. • Laurel (Laurus nobilis L., Fam. Lauraceae).
• Calaminta (Calamintha officinalis Moench.,
Fam. Lamiaceae).
• Salvia morada (Lippia alba Mill., Fam.
Verbenaceae).

8. 1.- PRUEBAS DE SENSIBILIDAD in vitro
 Método de difusión en agar
 Medio de cultivo: MY20
 Incubación: 28 ºC
 Concentraciones de las esencias: 50, 100, 200, 400,
800 y 1600 ppm
 Mediciones del crecimiento del hongo: 24, 48 y 72 h

9. Selección de los Siembra Preparación del Inóculo:
aislamientos. alícuotas de 7 mm
diámetro
Medición del Incubación a 28 °C Siembra del inóculo
crecimiento del hongo en medio de cultivo
a 24, 48 y 72 h + esencia +
disolvente PG 2,5 %

10. Sensibilidad in vitro de L. nobilis
39,36
Crecimiento de A. apis (mm)
38,79
28,54 29,43
72 horas
21,64 48 horas
25,71
24,00 24 horas
16,86 17,29 15,29
7,07
13,71 12,36 7,40
8,79 8,61 8,50 7,00
50 100 200 400 800 1600
Concentraciones de la esencia (ppm)
Figuras 1: Determinación de la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI)
de la esencia de L. nobilis frente a A. apis

11. Sensibilidad in vitro de L. alba
37,64
Crecimiento de A. apis (mm)
31,36
31,00
27,57
72 horas
48 horas
22,71 24 horas
20,57
17,64
14,57 7,45 7,00
7,20 7,00
11,07 10,71 9,00 7,75 7,00 7,00
50 100 200 400 800 1600
Concentraciones de la esencia (ppm)
Figura 2: Determinación de la Concentración Mínima Inhibitoria
(CMI) de la esencia de L. alba frente a A. apis

12. Sensibilidad in vitro de C. officinalis
36,43 36,57
Crecimiento de A. apis (mm)
27,00
72 horas
24,57
48 horas
22,07 22,36 24 horas
13,39 7,07 7,00
10,86
8,86 7,00
11,79 11,64
7,96 7,25 7,00 7,00
50 100 200 400 800 1600
Concentraciones de la esencia (ppm)
Figura 3: Determinación de la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) de
la esencia de C. officinalis frente a A. apis

13. RESULTADOS
• El perfil de sensibilidad de los
aislamientos estudiados no mostró
diferencias significativas.
CMI a las 72 h de contacto del hongo con
las esencias:
 L. nobilis: 1600 ppm
 C. officinalis: 800 ppm
 L. alba: 800 ppm

14. DOSIS LETAL MEDIA (DL50) DE LAS
ESENCIAS EN ABEJA ADULTA
 Dosis: Esencias: 0.25, 0.50,
1, 2, 4, y 8 μg de p.a./abeja;
dimetoato: 0,02; 0,04; 0,08;
0,16; 0,32 y 0,64 µg
p.a./abeja
 Controles: tóxico:
dimetoato; atóxico:
sacarosa al 50 %.
 Midió la mortalidad de
abejas adultas a las 24, 48 y
72 h.
 La DL50 se calculó con el
Programa PROBIT.

15. DL50 de las esencias en abeja adulta
24 h 48 h 72 h
L. nobilis 257,67 264,66 261,87
C.officinalis 520.611,30 119.231,55 35.760,16
L. alba 26.192,48 41.659,38 18.640,24
Dimetoato 0,327 0,231 0,202
Referencias: >100 µg p.a./abeja: virtualmente no tóxica; entre 10 y 100 µg p.a./abeja:
levemente tóxico; entre 1 y 10 p.a./abeja : moderadamente tóxico; < 1 µg p.a./abeja:
altamente tóxico.
Todas las esencias en estudio fueron “VIRTUALMENTE NO
TOXICAS”.
L. nobilis presentá niveles mayores de DL50 y podría resultar tóxico a
dosis mayores.

16. Composición del Candy:
37,5 g Azúcar impalpable
12,5 g Glucosa
-Dosis de las esencias:
800 mg de L. alba y C. officinalis
1600 mg de L. nobilis
Se realizan 4 inspecciones
semanales al día 0, 7, 14 y 21 de
evaluación 180
celdas
con cría
abierta

17. ENSAYO DE TOXICIDAD LARVAL in vivo
• Se encontraron diferencias altamente
significativas entre tratamientos (p =
000,16)
• El Test de Tukey diferenció dos grupos,
por un lado la esencia de C. officinalis
y Testigo con 13 y 7 % de mortalidad,
respectivamente. Por el otro, L. nobilis
y L. alba con 21 y 31 % de mortalidad
respectivamente.

18. Tabla 2. Resultado del Test de Tukey.
Existen diferencias altamente
significativas entre tratamientos ( ≤ 0,001)
C.
L.
officinali
Testigo L. alba nobilis
s
Testigo 0 36,5 15,4 7,6
L. alba -36,5 0 -21,1 -28,9
L. nobilis -15,4 21,1 0 -7,8
C.
officinali
-7,6 28,9 7,8 0
s

19. Toxicidad larval a campo
C.
Officinalis
resultó la
única
esencia L. alba;
ATOXICA 31,03% L. nobilis;
para larvas L. alba
40,00% 22,36%
L. nobilis
30,00% C. officinalis; C. officinalis
Porcentaje de
12,60% Testigo; 6,30%
mortalidad
20,00% Testigo
10,00%
14
0,00% %
% de mortalidad normal
Esencias

20. C ONS UMO DE C ANDIE S C ON E S E NC IAS E N
C OL ME NAS
60
50 50
45,6 L. nobilis
40
C . citratus
30 L. alba
20 18,5 C . officinalis
12,6
10 9 8,3
7,8
10,8 Tes tigo
7 5,6
2,8
2,1
0 0 0,5 0,2
0 1 2 3 4 5
-10
Ins pe c c io ne s (0, 7, 14 y 21 días )

21. CONCLUSION
• La esencia de C. officinalis es promisoria
para su uso en el control de A. apis en
colonias de A. mellifera, L.
• Posee efecto fungistático sobre A. apis, es
atóxico para los estadios larval y adulto de la
abeja melífera y es consumido por la colonia
en su totalidad.
• Restaría determinar los componentes
principales de la esencia.

22. POTENCIAL ACTIVIDAD INHIBITORIA DE
DIFERENTES DISOLVENTES DE LAS
ESENCIAS
Disolventes
• Tween 80 1 %
• DMSO (Dimetilsulfóxido)
• Alcohol 70º
• Propilenglicol 2,5 % (PG 2,5 %)
• Agua
30 aislamientos de A. apis de diferentes
orígenes geográficos (Córdoba, Buenos Aires,
La Pampa, Neuquén y Chile)

23. Resultados
• Se observaron diferencias significativas entre
tratamientos (p = 0,03).
• No se observaron diferencias significativas
con alcohol 70º, PG 2,5 %, agua y Tween 80.
• El análisis de LSD mostró que DMSO se
diferenció estadísticamente del resto de los
disolventes.
Conclusión
El “DMSO” no debería ser usado como disolvente ya que presenta
inhibición per se. Sin embargo, es el disolvente que disuelve en
forma más eficiente a las esencias. Por ello, se deberían
profundizar los estudios para determinar su posible efecto
sinérgico con otro disolvente, que permita reducir su
concentración y por lo tanto su efecto inhibidor.

24. Tasa de crecimiento (en mm) con diferentes
solventes
Tween 80 2,5%
ORIGEN CEPAS Alcohol 70º Agua DMSO
al 1% Propilenglicol
GORINA 42 9,0 9,7 9,3 9,2 8,8
GRAL.PAZ 44 9,4 9,5 8,4 9,1 6,9
ABRAMO MACHETTI 96 6,6 7,2 6,5 7,2 5,6
SAAVEDRA 27 8,9 10,5 9,8 9,0 7,3
LABORDE 47 7,1 7,0 7,5 6,9 6,5
PUNTA DE INDIO 76 6,6 8,9 7,7 7,5 5,5
JACINTO ARAOZ 35 7,4 8,3 7,6 7,5 5,8
ALBERTI 95 8,5 7,2 6,7 8,5 6,6
LOS HORNOS 79 9,5 9,9 9,1 10,1 7,1
CHACRAS CHASM. 46 7,5 6,7 9,2 9,1 7,1
GUATRACHE 98 7,3 7,6 8,1 8,2 6,9
JUSTINIANO POSSE 39 5,0 7,5 6,7 8,3 4,9
HUINGANGO 26 5,6 6,9 8,1 6,9 5,3
CHILE 8 6,8 8,5 4,8 7,7 7,1
CHILE 14 6,3 8,0 5,0 7,1 5,6
CHILE 17 8,6 11,7 9,0 10,7 9,2
CHILE 19 7,2 7,1 5,9 6,8 5,3
CHILE 20 8,3 8,2 8,3 8,3 6,3
LAPRIDA 37 7,6 9,2 9,3 9,8 6,3
LAPRIDA 70 6,9 6,7 6,3 7,9 7,1
PIGUE 4 9,5 9,3 9,4 5,1 4,1
BME. BAVIO 87 6,5 6,9 6,8 8,3 6,0
TANDIL 38 5,9 5,4 6,9 5,6 3,7
TANDIL 77 7,2 7,2 7,4 7,2 5,9
25 DE MAYO 25 6,3 6,7 6,7 5,6 3,8
RANELAGH 99 6,3 7,5 7,1 10,0 7,2
MIRAMAR 97 8,3 8,3 8,6 6,5 4,4
MONTE BUEY 75 8,6 9,2 10,1 7,1 4,5
PIGUÉ 52 6,8 8,5 9,3 6,9 4,5
LABORDE 41 7,2 7,5 7,0 5,5 4,0
MAX 9,5 11,7 10,1 10,7 9,2
MIN 5,0 5,4 4,8 5,1 3,7

25. Sensibilidad in vitro de los diluyentes
Diluyente CMI
DMSO 150 ppm
Alcohol 70º 250 ppm
Tween 80 500 ppm
Agua 500 ppm
PG 2,5 % 500 ppm

26. DETERMINAR Y COMPARAR LA ACTIVIDAD
in vitro DE Cymbopogon citratus FRENTE A
A. apis USANDO 5 DILUYENTES.
• Concentraciones de C. citratus: 250 y 750 ppm.
• Diluyentes: Tween 80, dimetilsulfóxido (DMSO),
propilenglicol 2,5%, agua y alcohol 70.
• Control de crecimiento (100%): A. apis + agua.

27. RESULTADOS
• No se observaron diferencias significativas
en la sensibilidad de los aislamientos
estudiados.
• Cymbopogon citratus inhibió el crecimiento
a las 72 h.
• Con DMSO y Tween 80, hubo diferencias
significativas en ambas concentraciones de
la esencia evaluada cuando se los comparó
con el control de crecimiento.
• Para el PG 2,5% y alcohol 70º las diferencias
significativas fueron observadas solo a 750
ppm.

28. Valor de crecimiento de Ascosphaera apis en mm frente a Cymbopagon citratus según el diluyente utilizado
Alcohol 70º Tween 80 (1%) Agua 2,5% propilenglicol DMSO
250 PPM 750 PPM 250 PPM C. 750 PPM C. 250 PPM 750 PPM 250 PPM 750 PPM 250 PPM C. 750 PPM
C. citratus C. citratus citratus citratus C. citratus C. citratus C. citratus C. citratus citratus C. citratus
MAX 6,3 0,0 5,5 0,0 3,5 0,0 4,3 0,0 2,0 0,0
MIN 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0
MG 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0