1. Aplicación de dos sistemas de
bicistrónicos implicados en la biosíntesis
de carotenoides en el endospermo del
arroz.
Por: Jenifer Galván Alonso, Ignacio Lara Hernández. Beatriz Mendoza
Escalante, Karen C. Ruíz Trujillo.
Tecnología del DNA Recombinante

2. Problemática:




“Carotenoides y Arroz Dorado”

3. Introducción:




Algunos transgenes con co-transformación se insertan de forma independiente en el genoma,
causando grandes variaciones en la expresión del transgen.
(de Felipe y col.,2006)

Además, en ambos casos, los transgenes pueden ser todavía segregados en las siguientes
generaciones.

4. Modificación de plantas
Vía directa:
Electroporacion
Aplicar un
impulso
eléctrico
Biobalistica
Bombardear
con nano
partículas
Microinyeccion
Inyección de
ADN

5. Transformación
Agrobacterium
Plásmido con
multicassettes

6. Alternativa:
(Martínez-Salas, 1999).

7. Secuencias Virales:
2A

8. Genes de Biosíntesis de carotenoides:
CrtI

9. Representación esquemática de los vectores súper
binarios utilizados para la transformación de arroz:

10. Resultados
Oryza sativa, cv Nakdong
35 líneas transgénicas fértiles (20 para la PAC y 15 para PIC)

11. Resultados
 PAC y PIC fueron seleccionados por
inspección visual.
 Germinación y crecimiento en medio
MS.
 Verificación de los transformantes
PAC y PIC por PCR (366 pb para el
PAC y 491 pb para PIC

12. EXPRESIÓN COORDINADA DE PAC Y PIC EN
ENDOSPERMA DE ARROZ TRANSGÉNICO
ANÁLISIS DE NIVELES DE TRANSCRIPCIÓN DEL TRANSGÉN POR RT-PCR

13. WESTERN BLOT PARA EL ANÁLISIS DE PROTEINAS

14. COMPOSICIÓN DE CAROTENOIDES DE ENDOSPERMA DE ARROZ TRANSGÉNICO
Figure 5. HPLC analyses of the carotenoids. Representative chromatograms.

15. CARACTERÍSTICAS AGRONÓMICAS DE PAC Y PIC
EN ARROZ TRANSGÉNICO
•Se especula que la disminución en la línea de PIC,
se debe a las variaciones somaclonales que se producen
durante el cultivo de tejidos y la transformación.
•El rendimiento de grano de las líneas de PAC se mantuvo
similar a la de los controles WT en condiciones de campo normales.
•Y la producción de carotenoides en el endospermo PAC
no afecta el rendimiento de grano de estas plantas transgénicas.

16. Discusión
•
•
•
–
•
•

17. Coordinación de la expresión de 2
genes:
IRES
2A
PAC
PIC
+ CRTI
-CRTI
+β-
+Luteína
caroteno

18. Altos niveles de β- carotenos
•
Gen Psy
•
CRTI, Psy
•
β
.

19. 2A
•
•
•
IRES
•
•

20. Construcciones de 2A e IRES
•
•
•
•
Promotor de globulina
•
Presenta menos actividad pero resulta ser mas específico
Nueva semilla de arroz
•
β
.

21. GLOSARIO:
•El endospermo o endosperma: es el tejido
nutricional formado en el saco embrionario de
las plantas con semilla; es triploide (con tres
juegos de cromosomas) y puede ser usado
como fuente de nutrientes por el embrión
durante la germinación.
Está conformado por células muy apretadas y
gránulos de almidón incrustados en una matriz,
gran parte de éste es proteína.
•variación somaclonal: por Larkin y Scowcroft
(1981), involucra cambios en las plantas
regeneradas que son transmitidos a la progenie.
Dichas variaciones ocurren por la manipulación
in vitro generando por ejemplo mutaciones,
entrecruzamiento de cromatides hermanas,
reordenamiento cromosómico, etc.

22. ¡Gracias!