espermatozoides

1. Espermatobioscopia
MORFOLOGÍA Y
TÉCNICAS
CONFIRMATORIAS
DE TINCIÓN
Rivera Galván G. Isabel
Heredia Granados Fernando

2. 01 IINTRODUCCIÓN Semen y espermatozoides
02 ESPERMATOBIOSCOPIA
¿Qué es?
Generalidades
03
MORFOLOGÍA DEL
ESPERMATOZOIDE
Utilidad de su análisis y
anomalías morfológicas
04 TÉCNICAS
CONFIRMATORIAS
Gram, Chrismas tree, Giemsa,
Eosina-Nigrosina, Rosa de Bengala
Tinciones
05 CONCLUSIONES

3. Es el conjunto de espermatozoides y otras
sustancias que se producen en el aparato
genital masculino. El semen es un líquido
viscoso y blanquecino que es expulsado a
través de la uretra durante la
eyaculación.
INTRODUCCIÓN
Semen
Célula reproductora masculina móvil,
destinada a la fecundación del óvulo; está
compuesta de una cabeza que contiene el
material cromosómico y de una cola o
flagelo que actúa como propulsor.
Espermatozoide

4. ESPERMATOBIOSCOPIA
es la evaluación del semen
eyaculado mediante distintos
procedimientos onde se analizan
ciertos aspectos de este.
Por lo tanto, la
espermatobioscopia es una
valoración cualitativa y
cuantitativa de los valores del
líquido espermático.
El proceso de evaluación del
esperma se divide en el examen
macroscópico y el microscópico.

5. análisis
MACROSCÓPICO
es el primero que se realiza.
En él se evalúan las
características más básicas del
semen, como las siguientes:
análisis
MICROSCÓPICO
Una vez que se ha producido la
licuefacción del semen, el
especialista del laboratorio procederá
a analizar la muestra de semen bajo el
microscopio. Esto es lo que recibe el
nombre de análisis microscópico del
semen.

6. Este análisis seminial consta de la determinación
de los siguientes parámetros y se evaluarán según
los valores considerados normales por la
Organización Mundial de la Salud (OMS):
• Concentración espermática: Una muestra normal
de esperma debe contener al menos 15 millones
de espermatozoides por mL de eyaculado.
• Movilidad de los espermatozoides: el porcentaje
de espermatozoides móviles (progresivos y no
progresivos) en la muestra seminal debe ser
superior al 40%.
• Morfología espermática: según los valores de
referencia de la OMS, una muestra seminal es
necesario que tenga un 4% de espermatozoides
con formas normal.
• Vitalidad: es decir, análisis de los
espermatozoides vivos y muertos.
análisis
MICROSCÓPICO

7. Morfología del espermatozoide
contiene el núcleo haploide
cubierto por el acrosoma y un par
de centriolos detrás del núcleo.
CABEZA
SEGMENTO INTERMEDIO
región que une la cabeza con la
cola y que contiene la carga
mitocondrial que provee la
energía necesaria (ATP) para la
movilidad del espermatozoide.
COLA O FLAGELO
Permite la movilidad del
espermatozoide

8. La OMS califica como muestra morfológicamente normal aquella
que muestra más de un 4% de espermatozoides con forma normal,
es decir, sin anormalidades en ninguna de sus partes.
Cuando una muestra seminal no alcanza los valores mínimos de
normalidad en la morfología se dice que
presenta teratozoospermia.
Los espermatozoides con morfología anormal pueden presentar
cabeza, pieza intermedia y/o cola anormal. Así, puede haber
las siguientes anomalías:
• Alteraciones de cabeza: espermatozoides sin cabeza (cabeza
de alfiler), cabeza pequeña, amorfa, redonda, alargada,
grande (globozoospermia), con forma de pera (piriforme), con
acrosoma grande, con acrosoma pequeño, sin acrosoma, con
muchas vacuolas, con vacuolas grandes o con dos cabezas.
• Alteraciones de cola: espermatozoides sin cola, cola
enrollada, corta, larga, doblada o doble cola.
• Alteraciones de pieza intermedia: espermatozoides sin pieza
intermedia, con una curvatura, asimétrica, engrosada,
delgada, irregular o con una protuberancia de un tamaño
superior a la tercera parte del área de la cabeza.
Anomalías morfológicas

9. Utilidad
96%
Según el criterio de la OMS un
valor igual o superior al 4% de
espermatozoides con morfología
normal es considerado dentro de los
valores normales. Si el índice de
anormales es mayor del 96% estamos
ante un caso de teratozoospermia

10. Técnicas confirmatorias de tinción
Los espermatozoides son demasiado
pequeños para observarse a simple
vista, es por ello que se utilizan
diferentes métodos de tinción, para
luego realizar una observación al
microscopio.
Pruebas de confirmación. Identifican de manera
concluyente la identidad de un material biológico

11. El procedimiento más habitualmente
utilizado para la valoración de la
vitalidad son las técnicas de tinción
vital que permiten diferenciar los
espermatozoides vivos de los muertos
debido a la permeabilidad de la membrana
plasmática a los colorantes vitales; por
lo tanto, aquellas células que presentan
una membrana plasmática funcional no per-
miten el paso del colorante, mientras que
si está alterada el colorante penetra en
el interior de la célula.El método
tradicional es la tinción con eosina-
nigrosina, que también se utiliza para la
valoración de las morfoanomalías. El pro-
cedimiento muestra una extensión donde
aparecen células vivas de color blanco
sobre un fondo púrpura, o teñidas de rosa
si están muertas (figura 5).

12. Para realizar el procedimiento se toman 4 µl de
la muestra con es- permatozoides y se mezclan
con 4 µl de solución de eosina al 0.5 %
mezclando suavemente y permitiendo la tinción
por dos minutos. Se realiza la observación en
aumento de 40X en diferentes campos para
observar espermatozoides con una coloración
rojiza aquellos que hayan perdido la
permeabilidad celular y se consideran muertos y
por otra parte aquellos sin coloración
indicando que conservan la permeabilidad y se
consideran como vivos. Se cuentan al menos 100
espermatozoides en total, haciendo la
diferencia entre vivos y muertos y de esta
manera se determina el porcentaje de vitalidad.

13. Los dos tipos de tinción de
espermatozoides más comunes son el
Nuclear Fast Red y el Picroindigocarmín,
los cuales son conocidos de forma
conjunta como Tinción de Christmas Tree o
por su traducción “tincion del árbol de
navidad’
Cuando el fluido analizado es semen, a
raíz de esta pericia los espermatozoides
presentan una coloración de un rojo
fuerte en su cabeza, rojo pálido en el
cuello y verde o verde azulado en el
flagelo (Mozayani y Noziglia, 2006, p.
8), de allí su comparación con un
arbolito de navidad.En el conteo de
espermatozoides debe incluirse aquellos
cuya anatomía está incompleta, por
ejemplo los que se encuentren carentes de
flagelo,

14. Savage y Clark (2006, p. 257) sostienen
que en el proceso de degradación natural
de los espermatozoides lo primero que
desaparece son los flagelos.
Inmediatamente después de la eyaculación
inicia su desintegración, de forma que 6
horas después de esta 25% de los
espermatozoides habrán perdido el
flagelo. A las 12 horas habrá pocos
espermatozoides aún con el flagelo
intacto y después de 24 horas existirán
únicamente unas cuantas cabezas.

15. La tinción de las cabezas de
espermatozoides en la coloración Cristal
violeta y Gram se debe a que los
reactivos utilizados en ambas
coloraciones son colorantes básicos, es
decir, tienen gran afinidad por elementos
celulares ácidos, esto explica el color
de las cabezas de espermatozoides en
ambas tinciones. Muestra el número total
de espermatozoides en los diferentes
tipos de soportes teñidos con la
coloración Gram y Cristal violeta. Las
telas de material de algodón de
diferentes texturas , muestran mayor
cantidad de formas completas (cabeza y
cola)e incompletas (solo cabezas) de
espermatozoides humanos en la coloración
Gram, de igual forma la tela
sintética (gasa corrugada).

16. A pesar del tipo de soporte, se observa que la tela (popelina gruesa nacional) y
tela (algodón piqué rayado) de material de algodón con diferente textura y color
presentan un mayor número de formas completas (cabeza y cola)e incompletas (solo
cabezas) de espermatozoides humanos con la coloración Cristal violeta. En la
tela (seda pesada) y (rit sintético) hay una ligera diferencia en el número de
espermatozoides entre ambas coloraciones, siendo mayor en la coloración Gram.
Independientemente del tipo de soporte, sea fibra de algodón o fibra sintética es
posible el reconocimiento de las manchas de semen con una vista macroscópica, a
través del tacto (si la muestra esta acartonada) y olor; además dichas telas
permiten la absorción de semen, teniendo en cuenta que las fibras de algodón
absorben mucho mejor que las sintéticas. Este resultado es sumamente importante
porque a pesar del tiempo en el cual la muestra ha sido guardada para su
posterior análisis (2 meses), aún se conservan formas completas (cabeza y cola)e
incompletas (solo cabezas) de espermatozoides humanos; esto es apoyado por los
estudios realizados en el Manual de Criminalística de la PNP en el 2012, en el
cual se han detectado espermatozoides móviles en líquido de lavado vaginal hasta
24 horas después de la violación e inmóviles 100 días después de ocurrido el
hecho en manchas secas

17. La experiencia en el laboratorio nos a
indicado que esta tinción es ideal ya
que nos proporciona no solo lacas
características morfológicas de los
espermatozoides si no que además las
características de las células redondas
logrando diferenciar con gran claridad
los leucocitos, células epiteliales y
las células de la espermatogénesis.
Siendo por lo mismo una tinción
ampliamente usada en la mayoría de los
laboratorios latinoamericanos y
Europeos tanto por su rapides como por
la cantidad de datos y detalles que
entrega.

18. Este método de tinción permite también la tinción diferencial de zonas
con un alto contenido de ADN, y concretamente de uniones A-T. Esto
permite distinguir perfectamente en microscopio óptico el núcleo celular,
los cromosomas durante la mitosis, y en algunos casos, incluso el ADN
mitocondrial (kinetoplasto de algunos protozoos, como Trypanosoma).
Estos poliorganismos adquieren una coloración diferencial y se ven dentro del citoplasma de
la célula huésped. La técnica de Giemsa está formada por varios colorantes: los tintes
neutros utilizados combinan el azul de metileno, Azure A y Azure B como tintes básicos, y la
eosina como tinte ácido, lo que da una amplia gama de colores. El azul de metileno y
el Azure son colorantes metacromático, de ahí que muchas estructuras se tiñan de púrpura y
no de azul. El pH de la solución de coloración es crítico y se debe ajustar idealmente según
diversos fijadores. La gama del pH debe estar entre 6.4 y 6.9.

19. La tinción de Rosa de Bengala es una
tinción espermática que permite
facilitar la diferenciación del
acrosoma de la célula y facilita la
visualización de las morfoanomalías
presentes en el eyaculado.
Se pondrá una gota de semen que se
dejará deslizar por el portaobjetos
para evitar que los espermatozoides
queden unos encima de otros. Dejaremos
secar la muestra y sumergiremos el
portaobjetos en la solución de rosa de
bengala durante 20 minutos. Finalizado
el tiempo de tinción se realizará un
lavado suave del portaobjetos con agua.

21. CONCLUSIONES
● Del minucioso estudio ordenado del semen o esperma, podrán obtenerse conclusiones importantes para la investigación del hecho. Surgirá
así, si realmente hay semen en las muestras analizadas y si dicho resto biológico es humano. Asimismo, se determinará si hubo eyaculación
interna y con ella penetración. El elemento fundamental en la identificación de esta secreción está en el hallazgo del espermatozoide, células
cuyas características en el humano son las siguientes: cabeza, segmento intermedio y flagelo
● La morfología espermática es uno de los parámetros más importan- tes de selección y se correlaciona con el potencial de fertilidad. De Vos y
col. 2003, indicaron que la morfología anormal (teratozoospermia) de los espermatozoides puede afectar drásticamente la fertilización,
desarrollo embrionario e implantación.
● El espermatozoide posee una cabeza donde se localiza el acrosoma con el material genético (ADN) y el flagelo que le permite la motilidad. El
ADN nos permite identificar de que individuo exactamente proviene. Se estima que en el producto normal de una eyaculación se encuentran
alrededor de 60 a 100 millones de espermatozoides por mililitro de semen. Y sus acepciones son la oligozoospermia (menor cantidad de
espermatozoides) y azoospermia (ausencia de espermatozoides).
● ara considerar que un hombre tiene un semen normozoospérmico y, por tanto, sin alteraciones de la fertilidad, es necesario cumplir con los
parámetros de referencia establecidos por la OMS en el año 2010: volumen, concentración, movilidad, morfología y vitalidad espermática,
entre otros.
● EXCLUSIÓN DE PATERNIDAD ALEGANDO INFERTILIDAD
● CASOS DE VIOLACION – Identificando presencia de semen

22. REFERENCIAS
● Chaves, Carballo, D. (2014). LA INTERPRETACIÓN DE LA PRUEBA
PERICIAL BIOQUÍMICO FORENSE REALIZADA EN FLUIDOS CORPORALES
HUMANOS: ANÁLISIS JURÍDICO - CIENTÍFICO EN LA INVESTIGACIÓN DE LOS
DELITOS SEXUALES.[PSF] Recuperado de http://iij.ucr.ac.cr/wp-
content/uploads/bsk-pdf-manager/2017/06/Análisis-Jur%C3%ADdico-
Cient%C3%ADfico-en-la-Investigación-de-Los-Delitos-Sexuales.pdf
● UAM. (2018]. Recolección y manipulación seminal.[PDF] Recuperado de
http://www.casadelibrosabiertos.uam.mx/contenido/contenido/Libroele
ctronico/recoleccion_manipulacion.pdf
● ¿Qué es la espermatobioscopia? Disponible en
https://www.lifeder.com/espermatobioscopia/
● ¿Qué es un semionograma y como se hace paso a paso? Disponible en
https://www.reproduccionasistida.org/seminograma/