Este documento presenta definiciones y conceptos relacionados con la tuberculosis, incluyendo: 1) definiciones de sintomático respiratorio para diferentes poblaciones; 2) definición de caso presuntivo de tuberculosis; 3) clasificación de casos bacteriológicamente confirmados o clínicamente diagnosticados; y 4) definición de caso descartado de tuberculosis. Además, proporciona información sobre la epidemiología de la tuberculosis en Perú y grupos poblacionales vulnerables.

1. bioquímica
Docente: Dr. Pedro Lezama Asencio
UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
SEGUNDA ESPECIALIDAD
MENCIÓN: BIOLOGÍA MOLECULAR Y GENÉTICA
Integrantes:
BERMEO TESEN MARCOS EDUARDO
CHEPE PINGLO MANUEL EDUARDO

2. OBJETIVO:
• Difundir mecanismos de
monitoreo y evaluación
que permitan una gestión
oportuna y eficiente de
los recursos asignados
para la prevención y
control de tuberculosis de
las regiones priorizadas.

3. 1.1 DEFINICIONES DE SINTOMÁTICO RESPIRATORIO.
•En población general, se considerará sintomático respiratorio a toda persona que
presente tos y expectoración por más de 15 días.
Población General
•se considerará sintomático respiratorio a quien presente tos con o sin expectoración,
fiebre, pérdida de peso, o sudoración nocturna, de cualquier tiempo de duración.
Personas con VIH o
inmunosupresión
•En privados de la libertad, grupos étnicos, habitantes de calle, migrantes, trabajadores
de la salud, población rural o rural dispersa el criterio será tos y expectoración por más
de 15 días
Poblaciones vulnerables
•En los niños y niñas, los síntomas clínicos más relevantes para sospechar tuberculosis
son tos con o sin expectoración por más de 15 días, fiebre mayor de > 8 días, pérdida o
no ganancia de peso en los tres meses precedentes, disminución del nivel de actividad o
juego, e historia de contacto con un adulto con tuberculosis.
Niños y niñas menores
de 15 años
Tabla 1. Definiciones programáticas de sintomático respiratorio

4. 1.2 DEFINICIÓN DE TUBERCULOSIS PRESUNTIVA
• Se refiere a una persona con síntomas o signos
sugestivos de tuberculosis identificados a partir de
una valoración médica. Corresponde a los casos
conocidos anteriormente como con sospecha de
tuberculosis. Aunque bajo este término se incluyen
quienes cumplen el criterio de sintomático
respiratorio, el profesional de la medicina podrá
definir la presunción de la enfermedad fundamentado
en síntomas o signos como fiebre, diaforesis nocturna,
pérdida de peso, astenia, adinamia u otras
manifestaciones sugestivas, así no se cumplan los
criterios de una persona sintomática respiratoria.

5. 1.3 DEFINICIONES DE CASO.
• Caso de tuberculosis bacteriológicamente confirmado: es
aquel que tiene un resultado positivo para alguna de las
pruebas de laboratorio como baciloscopia (coloración directa
de la muestra), cultivo o prueba molecular.
• Caso de tuberculosis clínicamente diagnosticado: es aquel
diagnosticado con tuberculosis activa por un médico, quien ha
decidido darle un ciclo completo de tratamiento
antituberculoso, sin confirmación bacteriológica. Esta
definición incluye casos diagnosticados sobre la base de un
cuadro clínico sugestivo acompañado de anomalías exámenes
radiográficos (radiografía simple o tomografía)

6. 1.4 CLASIFICACIÓN DE LOS CASOS.
Los casos bacteriológicamente confirmados o
clínicamente diagnosticados de tuberculosis se
clasifican según los siguientes criterios:
 Localización anatómica de la enfermedad.
 Historia de tratamiento previo.
 Estado serológico con respecto al VIH.

7. 1.5 CASO DE TUBERCULOSIS DESCARTADO
• Estos se definen como las personas que iniciaron
tratamiento para tuberculosis por criterio médico
pero que como resultado de pruebas diagnósticas y
por criterio clínico del equipo médico tratante se
descarta el diagnóstico de tuberculosis. Para efectos
del diagnóstico de egreso en el registro del Programa
Nacional de Tuberculosis y para la gestión de
medicamentos, se deben reportar los casos de
tuberculosis que hayan sido descartados; así mismo,
se deberán ajustar por descarte en el Sivigila.

8. Fuente: Año 2021 - SIGTB
• Población: 33’028,673 hab.
• Densidad poblacional: 25 hab. x km2
• 25 Regiones geografías
• Morbilidad de casos de TB: 26, 437
• Casos nuevos de TB: 23,139
• Casos nuevos de TBP FP: 13,729
• Casos TB-MDR: 1,256
• Casos TB-XDR por PS: 82
• Lima y Callao, representan:
• 57.5% (15,212) del total nacional de
casos.
• 78.5 % (1193) de TB-MDR.
• 83.0 % (68) de TB-XDR por PS
* El riesgo se sustenta en la
media de 14 indicadores: 05
epidemiológicos y 09
operacionales + tendencia de
la curva de incidencia
SEGUIMIENTO DE REGIONES
ACORDE A SU PROBLEMÁTICA
TENDENCIA
DEL RIESGO
MUY ALTO
RIESGO
ALTO RIESGO
RIESGO
MODERADO
RIESGO LEVE
Ucayali Loreto Tacna La Libertad
Lima Ica Pasco Arequipa
Callao San Martín Cajamarca Piura
Madre de Dios Huancavelica Moquegua Ayacucho
Tumbes Apurímac Ancash Junin
Cusco Puno Lambayeque Huanuco
Amazonas

9. Control y eliminación de la tuberculosis en España:las estrategias para el siglo XXI | Anales de Pediatría (analesdepediatria.org)
POBLACIONES VULNERABLES EN TB

10. Ponencia “TB Infantil y PPD”. Dr. Agreda, DIRESA La Libertad
ENF.
PULMO
NAR
ENF.
PULM
ONAR
TB
DISEMINADA
TB EN NINOS Y
ADOLESCENTE
S . PERÚ

11. Casos TB XDR año 2020
0
1
2 - 7
8 - 76
CALLAO
(18)
LORETO
(0)
UCAYALI
(0)
PUNO
(0)
CUSCO
(0)
JUNIN
(0)
LIMA
(76)
ICA
(7)
AREQUIPA
(1)
PIURA
(1)
MADRE DE DIOS
(3)
(0)
SAN MARTIN
(0)
AYACUCHOAPURIMAC
(0)
ANCASH HUANUCO
(1) (0)
PASCO
(0)
AMAZONAS
(0)
(0)
LA LIBERTAD
(7)
HUANCAVELICA
(0)
MOQUEGUA
(0)
TACNA
(0)
LAMBAYEQUCEAJAMARCA
(0)
TUMBES
(0)
DPCTB/DGIESP/MINSA/PERU
Lagos Principales
0 - 2
3 - 17
18 - 30
31 - 870
Callao
(103)
Loreto
(31)
Ucayali
(37)
Puno
(3)
Cusco
(6)
Junin
(28)
Arequipa
(7)
Piura
(17)
Madre de Dios
(17)
Lima
Metropolitana
San Martin
(4)
(8)
Ancash Huánuco
(23) (18)
Pasco
(0)
Ica
(63)
Tacna
(17)
Ayacucho Apurimac
(0)
Amazonas
(0)
La Libertad
(64)
(870)
Huancavelica
(0)
Moquegua
(0)
Lambayeque
(21)
Cajamarca
(0)
Tumbes
(0)
Lima
Provincia
(82)
RR/MDR XDR
Lima y Callao concentran el 75% de casos TB MDR y 86.3% de TB XDR, de las 6 regiones con mayor carga de
TB Resistente.
PERÚ. DISTRIBUCIÓN CASOS TB MDR/XDR .

12. BACILOSCOPIA
• Técnica de elección para el diagnóstico rápido y el control del tratamiento de la
tuberculosis.
• Es un examen básico para el diagnóstico de la tuberculosis.
• Herramienta fundamental para un programa de control de la tuberculosis.
• Económica y eficiente para detectar los casos infecciosos de tuberculosis.

13. Si se considera el total de casos
con diagnóstico de tuberculosis
pulmonar confirmado
bacteriológicamente, la
baciloscopia detecta el 70-80%. Y
el cultivo 20-30% restante

14. Baja sensibilidad (80%), especialmente en muestras de pacientes con
VIH, muestras de pacientes infantiles, muestras extrapulmonares.
• ESPECIFICIDAD
- Falsos Positivos:
- Micobacterias
- Nocardias
- Hongos
- Restos comida
- Suciedad
DESVENTAJAS DE LA
BACILOSCOPÍA

15. TIEMPO DE
DIAGNÓSTICO
Xpert Bacilosocpia Cultivo Liquido
MGIT
Cultivo Sólido
2 horas 24 horas Hasta 42 días Hasta 60 días

17. MICROSCOPÍA DEL
BAAR
MORFOLOGIA DE M. tuberculosis
•Forma bacilar.
•Longitud de 2 a 10 micras y diámetro 0,2 a 0,6
micras.

18. LA
BACILOSCOPI
A
Se Basa en la ácido-alcohol resistencia.
Propiedad que tienen las micobacterias de
unir en su pared Fucsina fenicada o
auramina y retenerlas frente a la acción de
decolorantes (alcohol ácido)
Pared Celular.
•Lípidos (más del 60%)
•Glucolípidos.
•Proteínas.

19. PARA QUE LA BACILOSCOPIA
SEA POSITIVA ES PRECISO QUE
LA MUESTRA TENGA COMO
MÍNIMO, ENTRE 5 000 Y 10 000
BACILOS POR MILILITRO DE
MUESTRA

20. APARIENCIA FÍSICA DE LA
MUESTRA DE ESPUTO
Salivoso Mucopurulento Hemoptisis mucoso

21. Tinción Ziehl Neelsen
1000X

22. Cubrir con fucsina
fenicada
Calentar hasta emisión de
vapores tres veces
durante 5 minutos
Lavar con agua
Cubrir con decolorante
durante 3 minutos (Repetir
este paso si es necesario)

23. LAVAR CON
AGUA
Tinción de fondo con azul de
metileno durante 1 minuto
Lavar con agua
Secar al aire

24. “TAMAÑO UNIFORME DEL EXTENDIDO
HACE FÁCIL LA LECTURA
Si el extendido es de 2x3cm,
Una línea horizontal equivale a
150 campos, y una línea vertical
equivale a 100 campos
Si el extendido es de 2x1cm,
Una línea horizontal equivale a 100
campos, y 2 línea verticales
equivale a 100 campos

25. LA TÉCNICA PARA LA DETECCIÓN DE
MICROORGANISMOS ÁCIDO
• alcohol resistentes por FLUORESCENCIA es similar a la
tinción clásica de Ziehl Neelsen, pero en este caso, la fucsina fenicada se
reemplaza por un colorante fluorescente con fenol agregado.
•La coloración fluorescente presenta la ventaja de una mayor visibilidad de
un microorganismo fluorescente contra un fondo oscuro.
•Esto permite el uso de una lente de menor aumento, que aumenta el
campo de visión y disminuye el tiempo necesario para evaluar la
preparación.
400X

26. TINCIÓN FLUORESCENTE
400X

27. Cubrir con solución de Auramina
“O” 0,1% filtrada
Dejar actuar durante un mínimo
de 20 minutos (no calentar)
Lavar con agua destilada
Cubrir con decolorante durante 1
ó 2 minutos (repetir este paso si
es necesario)

28. Lavar con agua DESTILADA
Tinción de fondo con
colorante de contraste
(permanganato de potasio al
0.5%) durante 1 minuto
Lavar con agua destilada
y secar al aire protegida
de la luz

29. Un microscopio de fluorescencia es un microscopio
óptico convencional al que se le adapta un
accesorio complementario de iluminación,
denominado “fluorescencia”.
Este accesorio utiliza los mismos objetivos de
aumento para formar la imagen, al incorporarlo se
puede
además
realizar una observación convencional y
una observación de contraste con
fluorescencia

30. VENTAJAS DE LA MICROSCOPIA DE FLUORESCENCIA
OMS 2011
 recomendó el uso de la MF
con lampará LED.
 Mayor sensibilidad (6% -
10%).
 Relación costo-eficiencia.
 Tiempo de lectura se
reduce a la mitad.

31. CULTIVOS
OBJETIVOS
Proporcionar al personal de laboratorio la información técnica
detallada necesaria sobre los procedimientos técnicos, para el
diagnóstico y aislamiento de la Tuberculosis, mediante la
descripción de los principales métodos de cultivo usado:
medios sólidos (Ogawa y Löwenstein Jensen) y medio líquido
BACTEC MGIT (Tubo indicador de crecimiento para
Mycobacterium).

32. • El cultivo es el método bacteriológico más sensible y específico para el
aislamiento e identificación de micobacterias, en especial MTB porque
puede evidenciar un mínimo de 10 bacterias/ml de muestra clínica. La
baciloscopía detecta 70 - 80% de casos de TB pulmonar y el cultivo 20 -
30% restante, estas cifras están condicionadas y varían de acuerdo a la
situación epidemiológica del paciente.
• Además, el cultivo permite diagnosticar casos de TB activa, confirmar el
diagnóstico de muestras cuando la baciloscopía es positiva y realizar la
prueba de sensibilidad a los medicamentos antituberculosis. Finalmente,
el cultivo es el método de referencia (Estándar de Oro) con el que se
evalúa todos los métodos nuevos de diagnóstico de MTB.

33. MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD
• El personal involucrado debe cumplir las medidas de bioseguridad establecidas
en el Manual de Bioseguridad en el Laboratorio de Tuberculosis.
• Toda muestra debe ser considerada como potencialmente infecciosa para MTB.
• Todos los procedimientos que incluyen la manipulación de materiales infecciosos
de riesgo alto deben ser desarrollados dentro de una cabina de bioseguridad
(CSB) Clase II Tipo A2.
• Los analistas deben usar EPP (respiradores N95, mandiles, mandilones, doble
guante, cubre zapatos, gorro quirúrgico).
• Las superficies de trabajo deben ser descontaminadas diariamente, antes y
después de terminar el trabajo, utilizando el desinfectante de uso del
laboratorio, el cual garantice la eliminación o inactivación de micobacterias.

35. Indumentaria y EPP
• No utilizar anillos ni ningún tipo de joya, reloj, mientras se trabaje en el
laboratorio.
• Utilizar EPP (guantes descartables, mandilones, gorros, cubre zapatos,
respirador N95), para mayor protección contra posibles salpicaduras, según el
nivel de riesgo.
• No utilizar la ropa de trabajo fuera del laboratorio. Si es reutilizable,
descontaminarla antes de lavarla.
• No guardar la ropa de trabajo junto con la ropa de calle.
• Tener disponibles a la vista de todo el personal los EPP para uso del personal.

36. CULTIVO EN MEDIO
OGAWA
Fundamento
El método Ogawa en su constitución utiliza sales amortiguadoras de pH
alcalino haciendo posible la siembra directa de una muestra clínica tratada
previamente con NaOH al 4%. El punto crítico en la decontaminación con
NaOH es el tiempo de exposición de la muestra a la solución alcalina fuerte, ya
que una sobre exposición puede disminuir la población de micobacterias
viables, por lo que no debe excederse el tiempo de la decontaminación por
más de 20 minutos.

37. Condiciones de la muestra
Usualmente, las muestras con baciloscopía negativa, muestras extrapulmonares y
muestras de pacientes en tratamiento previo (seguimiento diagnóstico) son
procesadas por el método Ogawa.
Las muestras deben cumplir con las siguientes condiciones:
• No deben ser menores a 2ml (idealmente 3 ml); de presentar un volumen
menor (1ml), deben ser evaluadas por el personal de laboratorio para decidir su
proceso.
• Las muestras no deben ser conservadas por más de 3 días.

38. Procedimiento
El procedimiento debe ser realizado en una CSB clase II tipo A2.
• Colocar las muestras codificadas de manera correlativa según el orden del
laboratorio dentro de la CSB.
• En un tubo de polipropileno, colocar 1ml de muestra de esputo con ayuda de una
pipeta de transferencia estéril.
• Añadir 4ml de NaOH al 4% y homogenizar con la ayuda del agitador de tubos
(vórtex) durante 20 a 30 segundos aproximadamente.
• Incubar los tubos con muestra en baño maría o en la incubadora a 37°C por 20
minutos.

39. • Retirar los tubos de incubación y homogenizar la muestra con la pipeta.
• Sembrar 0.2 ml en cada uno de los tubos con medio Ogawa, haciendo que el
líquido cubra por completo la superficie del medio. Se recomienda 2 tubos con
medio por paciente.
• No ajustar completamente las tapas de los tubos con medio de cultivo recién
inoculado, a fin de lograr que la parte líquida de la siembra se evapore dentro de
las 48 a 72 horas de incubación.
• Se recomienda trabajar en series de 10 muestras.

40. Incubación
• Colocar los tubos con la siembra en la incubadora a 37°C.
• Realizar una primera revisión de los cultivos a las 48 o 72 horas para
observar si existe contaminación.
• Durante la primera revisión, ajustar completamente las tapas de los tubos
asegurándose que ya no haya líquido en los tubos.
• En caso de detectar contaminación (medio licuado por acción de gérmenes
proteolíticos producto de una descontaminación deficiente) como tubo
alcalinizado (color blanco amarillento) o tubo acidificado (color verde
oscuro) se procede a realizar la resiembra si aún se conserva la muestra o
se procede a solicitar una nueva muestra al EESS de procedencia.

41. LECT
URAS
• La primera lectura de los cultivos se realiza a los 7 días de la siembra, para evidenciar el desarrollo de
colonias de algunas micobacterias de crecimiento rápido y/o posibles contaminantes.
• Las lecturas de los cultivos se realizarán a los 7 días,
• 15 días, 21 días, 30 días, 45 días y 60 días. Durante
estos días se debe ir registrando los cultivos
positivos (desde los 21 días) y en aquellos cultivos
donde no se observan crecimiento, debe continuar
su incubación hasta los 60 días.
IMPORTANTE:
Los cultivos positivos se
pueden reportar en el NetLab
desde los 21 días hasta los 24
y desde los 30 días hasta los
33 días.

42. Negativo (-)
No se observan colonias en los tubos luego de la
inspección de la octava semana de incubación.
Nº de colonias
Entre 1 y
19
sembrados.
colonias en el total de medios
Positivo (+) 20-100 colonias.
Positivo (++) Más de 100 colonias separadas.
Positivo (+++)
Colonias incontables confluentes (desarrollo en toda
la superficie del medio).
Contaminado
Ambos
tubo
inoculados se encuentran
INFORME DE
RESULTADOS
Escala semicuantitativa para reporte de resultados de cultivos en medio sólido:

43. • La cantidad de colonias es la suma obtenida en todos los tubos si
desarrollan hasta 19 colonias. Si supera este número, para transformar la
lectura en escala de cruces, se promedia el desarrollo observado en
todos los tubos.
• Los resultados se registran en el libro de registros de cultivos del
laboratorio, así como en el sistema Informático NetLab v.2. y la lectura de
los cultivos se realiza siguiendo la escala semicuantitativa para reporte de
resultados.
• Los cultivos positivos son enviados a los laboratorios de mayor
complejidad de su jurisdicción para realizarse la prueba de
susceptibilidad a drogas de primera y segunda línea, según corresponda.

44. BIBLIOGRAFIA DE CONSULTA O REVISION
1. MANUAL PARA EL DIAGNOSTICO BACTERIOLOGICO DE LA TUBERCULOSIS. PARTE 1: MANUAL DE
ACTUALIZACION DE LA BACILOSCOPIA/Programa “Fortalecimiento de la Red de Laboratorios de
Tuberculosis en la Region de las Ame¿ricas” – Lima:ORAS CONHU; 2018.
2. MANUAL DE BACILOSCOPIA, INS, Actualizado, 2019-2020
3. MANUAL DEL CULTIVO PARA EL DIAGNOSTICO DE LA TUBERCULOSIS, INS
4. NTS N° MINSA/2019/INS. Noema Tecnica de Salud sobre Preparacion, Embalaje y Documentacion para el
Transporte Seguro de Sustancias Infecciosas.
5. DIRECTIVA SANITARIA PARA LA OBTENCION, CONSERVACION Y TRANSPORTE DE MUESTRAS BIOLOGICAS
PARA EL, DIAGNOSTICO DE LA TUBERCULOSIS.
6. Manual de Bioseguridad en el Laboratorio de Tuberculosis. Ginebra-Suiza. Organización Mundial de la
Salud (OMS-2013).
7. Tuberculosis en el Perú: situación epidemiológica, avances y desafíos para su control, Rev. perú. med. exp.
salud publica vol.34 no.2 Lima abr./jun. 2017, http://dx.doi.org/10.17843/rpmesp.2017.342.2384
8. Análisis bibliométrico de la investigación sobre tuberculosis en el Perú, periodo 1981-2010, An. Fac.
med. v.73 n.4 Lima oct./dic. 2012, http://www.scielo.org.pe/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1025-
55832012000400006