Bacteriófagos como alternativa a los
antimicrobianos
Seminarios Yachay Tech
31 de julio de 2015
Defunciones del Viernes 8 de agosto
de 1892 en Guayaquil
Ángela García, 18 días, fiebre
María Herrera, 7 meses, fiebre
Juan torla, 5 meses, fiebre
Carmelina Aboleda, 9 días, fiebre
Hermano Hilario, 19 años, fiebre
Manuela Reyes, 60 años, pulmonía
José M. Surita, 35 años, pulmonía
Lucas Llerena, 60 años, vejez
¿Cómo era el mundo preantibiótico?
Las defunciones de niños eran tan
frecuentes que parte del trabajo de los
fotógrafos de entonces era retratarlos
Felix d'Herelle descubrió en 1917 un
microbio invisible, antagónico del
bacilo de disentería"
Wollman 1883-1943
D'Herelle 1873-1949
Giorgi Eliava fundó en 1923 el primer
instituto dedicado a la terapia con fagos en
Tiblisi, Rep. de Georgia, 20 años más tarde
era asesinado por la KGB
Eliava 1892-1937
El descubrimiento de la penicilina eclipsó el desarrollo de
la fagoterapia
La era antibiótica
Los blancos para los antibióticos son
limitados
1
2
3
Cada vez hay menos antibióticos
aprobados por la FDA y la EMA
¿Por qué aparecen resistencias a
los antibióticos?
Mutación
Transferencia horizontal
El ADN cuando se transmite de generación en
generación acumula errores que pueden dar lugar
a mutaciones que confieran resistencia a los
antibióticos. Además las bacterias son capaces
de intercambiarse genes
Comparación de los antibióticos vendidos para
uso humano y para uso en granjas
Era post-antibiótica
El abuso de los antibióticos nos ha
llevado a la era postantibiótica
¿Cómo será el mundo sin
antibióticos?
Las cirugías volverán a ser operaciones de alto riesgo
Le diremos adios a los trasplantes de órganos.
El periodo de jubilación volverá a acortarse. Antes de los
antibióticos, una persona de 60 años que cogiese una neumonía
tenía más probabilidades de morir que de superarla.
Sin antibióticos la mortalidad asociada a los partos volvería a ser
elevada, así como los abortos.
La mortalidad de las personas encamadas se elevaría. Sin
antibióticos sería prácticamente imposible curar las úlceras de los
encamados, infecciones urinarias o de pulmón.
Enfermedades infantiles como la neumonía, escarlatina o fiebres
reumáticas volverían de nuevo a diezmar a los menores de dos
años.
¿Jugamos a la ruleta rusa? O
¿Cómo no aburrirte si estás
inmunodeprimido en un hospital?
16%
33%
En 2011 Escherichia coli enterohemorrágica (EHEC) que
produjo la muerte de al menos 32 personas en Alemania
y más de un millar de infectados
Otras opciones aparte de los
antibióticos
1. Higiene
2. Vacunas
3. Terapia con fagos
4. Enzibióticos
5. Bacteriocinas
6. Péptidos antimicrobianos MRSA in 2007.(www.earss.rivm.nl)
Desde 1923 hasta hoy los georgianos han
mantenido el Instituto Eliava a pesar del colapso
postsoviético y de las dos guerras civiles sufridas
4.5 veces menos población
4 veces menos territorio
2.5 veces menos PIB per cápita
Los bacteriófagos y los virus de mamífero tienen
formas distintas de entrar en la célula
Los fagos “inyectan” su ADN en unas
células que tienen una presión interna de
entre 5-25 atmósferas
Los fagos son específicos mientras
que los antibióticos son de amplio
espectro
Los fagos son específicos de un tipo
o de varios tipos de bacterias
Los antibióticos son de amplio
espectro, matan a todas las
bacterias
Los fagos son estructuras altamente complejas
comparadas con una molécula de antibiótico y
por esa razón su farmacocinética es tan
complicada
De media hay 50 millones de fagos en 1 ml de agua de
más. En muestras de suelo las cantidades son más
elevadas. Se calcula que existen 1031
fagos en el mundo
Genes para caracterizar patotipos de E. coli AB resist
Sta Elt Eae DaaC Vt1 Vt2 Agg Ipa-H Amp Nitrofuran Trimeto/Sulfam Cipro Levo
1 - - + - + - - - Enterohemorragica
2 - - + - + + - - Enterohemorragica
3 - - + - + - - - Enterohemorragica
4 - - + - + + - - Enterohemorragica
5 - - + - + + - - Enterohemorragica
6 - - + - + - - - Enterohemorragica +
7 - - + - + - - - Enterohemorragica +
8 - - + - - - - - EPEC
9 - - + - - - - - EPEC
10 - - + + - - - - Difuso-Adherente +
11 - - + - - - - - EPEC
12 - - + - - - - - EPEC
13 - - + - - - - - EPEC + + + +
14 - - + - - - - - EPEC + + + + +
15 - - + - - - - - EPEC +
16 - - + - - - - - EPEC
17 - - + - - - - - enterobacteria
18 - - + + - - - - Difuso-Adherente
19 - - + + - - - - Difuso-Adherente +
20 - - + - - - - - EPEC
21 - - + - - - - - EPEC +
22 - - + + - - - - Difuso-Adherente
23 - - + - - - - - EPEC
24 - - + - - - - - EPEC +
25 - - - - - - - - Enterobacteria
26 - - - + - - - - Difuso-Adherente
Aislamos 18 fagos distintos frente a 12 cepas
de E. Coli enteropatogénicas del Ecuador
1 2 3 4 5 6 10 14 15 21 22 25 26
4Q1 - + - +++ - - - + - ++
4Q2 - - +++ - - - - - -
4Q3 - +/- - +++ - - +/- - - +
4Q13 - + - +++ - - - - - +
5Q1 - + + +++ - - - - - +
5Q5 - + +/- +++ + +++ - - - ++ ++
5Q6 - +/- +++ ++ +++ - +++ - - ++
5Q7 - + - +++ - ++ - - - ++ +/-
5Q9 - ++ - +++ ++ +++ +++ - - -
5Q13 - - +/- +++ ++ +++ - + - +++ +
5Q15 +/- - - +++ - +++ - + - +++ +/-
5Q16 +/- - +/- +++ +++ ++ - - - +++ +/-
5Q18 - ++ +/- +++ + ++ +++ +++ - +++ ++
5Q19 - + + +++ - +++ ++ - ++ +
5Q20 + - - +++ - +++ - + - ++ +/-
5Q24 + ++ - +++ - ++ + - + -
6Q1 ++ - ++ +++ - - ++ - -
6Q7 +++ - ++ +++ - - +++ - -
Absorbancia de los cultivos de E. coli enteropatogénica #14 multirresistente
a los antibióticos, infectada con el fago 5Q18 (línea roja) o no (línea azul). El
cultivo infectado lo fue a los 150 min. (flecha) con una concentración de
fagos de 109 UFC/ml, este inóculo supone un MOI = 2,5. Los datos reflejan el
promedio de tres experimentos independientes, la barra de error representa
la desviación estándar de esos experimentos
Tiempo en minutos
Abs600nm
0 100 200 300 400 500 600
0
0.5
1
1.5
2
2.5
3
Reducción de las unidades formadoras de colonias de la
bacteria E. coli enteropatógena #14 multirresistente a
los antibióticos en salchicha tratadas con el fago 5Q18 y
con una concentración bactericida del 2% de ácido
láctico. Se observa una reducción en el número de
bacterias de 1.0 log10 con el fago ligeramente más
efectiva que la reducción observada por el ácido láctico,
un producto químico empleado en la industria cárnica.
Control Water Lactic acid 2% 5Q18
1E+4
1E+5
1E+6
Control Agua Ácido láctico Fago 5Q5 Fago 5Q13
100.0E+2
100.0E+3
100.0E+4
0 2 4 6 8 10 12
0
0.5
1
1.5
2
2.5
E. coli
5Q5
5Q13
1.0 log10 de reducción de E.
coli enterohemorrágica con
los fagos 5Q5 y 5Q13
Inhibición del crecimiento de
la cepa #5 de E. coli
enterohemorrágica a 25ºC en
medio líquido (LEM). Los
fagos fueron añadido a las
dos horas en una
concentración de 109
PFU/ml
Tiempo en horas
Densidadópticaa600nm
Las fotografías de microscopía electrónica de los fagos nos muestran
un fago de tallo largo no contráctil lo que nos permite clasificarlo
como perteneciente al orden Caudoviral familia Siphoviridae.
5Q5
5Q13
XbaI
El País ha publicado una entrevista al científico Peter
Lawrence que es oro puro
"Nos hemos vuelto
la gallina de los
huevos de oro. En
las universidades
británicas, se
espera de los
científicos que
traigan dinero a la
institución para
pagar al personal
administrativo".
“los administradores, los
gestores políticos, los
funcionarios adventicios
como los de recursos
humanos, relaciones
públicas y especialistas
bibliométricos, han ganado
seguridad, confianza, tiempo
y salarios, y han ganado
poder sobre los científicos”
“solicitar dinero se
ha convertido en la
principal ocupación
de los
investigadores”
“tienen que confeccionar
sus publicaciones, hacer
a medida su trabajo para
que los artículos encajen
en los parámetros
bibliométricos
adecuados”
“En una estancia posdoctoral
típica de tres años, los
científicos jóvenes tienen que
pasar la mitad de su tiempo
intentando negociar su futuro,
entonces ¿cuándo
investigan?”
Los fagos pueden mejorar la
seguridad de los alimentos
OmniLytics
Announces
USDA/FSIS
Allowance of
Bacteriophage
Treatment of
Salmonella on
Poultry
PhagoBioDerm: un producto para tratar
infecciones bacterianas multirresistentes en
quemaduras producido por el Instituto Eliava
Bacteriofagos en PhagoBioDerm™ ayudan a limpiar la herida de S. aureus
Multirresistente a antibióticos. Fuente: Intl. J. Dermatology, 2002, 41: 453-458
La composición es este producto es:
Ciprofloxacina (un antibiótico),
benzocaína (un anestésico), los fagos,
α-Quimotripsina (proteasa que
destruye el tejido necrótico) y por
último el polímero biodegradable.
Klebsiella convierte la melamina a ácido
cianúrico. De los 300.000 niños 6
murieron por fallo renal. En la biopsia se
encontró ácido cianúrico
las bacterias del género
bacteroides protegen a los
ratones contra las
consecuencias de la
acumulación de grasa
corporal.
Las bacterias del niño sano
eran capaces de procesar los
aminoácidos que contienen
sulfuro. Los niños con
Kwashiorkor carecían de estas
bacterias y sufrían de
malnutrición
Cuando aumentaban la
presencia de Akkermansia
municiphila en sus intestinos
se observaba una pérdida de
peso y un mejor control de la
insulina
En 2013 aparecieron
pruebas que relacionan la
bacteria intestinal con
Fusobacterium en la
estimulación de los
tumores colorectales
Prevotella copri se ha
asociado con la artritis
reumatoide. En ratones
que poseen
Lactobacillus johnsonii
en su flora intestinal
están mucho mejor
protegidos contra las
alergias y el asma.
Fischetti en 2001 demostró que las enzimas
líticas purificadas son agentes terapeuticos
eficaces para reducir la colonización de las
mucosas por neumococos en ratón
Enzibióticos son enzimas que actúan
como antibióticos
Se usan aplicados directamente como:
Espray
Lociones
Enjuague bucal
Tampones
Supositorios
Catéteres
Inhaladores
Vendas
Colirios
Cualquier tecnología siempre ha
tenido un uso militar
Lederberg ganó con 33
Años el premio Nóbel
Ken Alibek trabajó
En armas biológicas
En la URRS
bacteriasactuaciencia.blogspot.com.es/
Jordy Larco
Pablo Egas
Fernando Villavicencio
Liliana Ushiña
Dr. Gabriel Trueba

Fagos como alternativa a los antibióticos. Yachay Tech Seminars

  • 1.
    Bacteriófagos como alternativaa los antimicrobianos Seminarios Yachay Tech 31 de julio de 2015
  • 2.
    Defunciones del Viernes8 de agosto de 1892 en Guayaquil Ángela García, 18 días, fiebre María Herrera, 7 meses, fiebre Juan torla, 5 meses, fiebre Carmelina Aboleda, 9 días, fiebre Hermano Hilario, 19 años, fiebre Manuela Reyes, 60 años, pulmonía José M. Surita, 35 años, pulmonía Lucas Llerena, 60 años, vejez ¿Cómo era el mundo preantibiótico?
  • 3.
    Las defunciones deniños eran tan frecuentes que parte del trabajo de los fotógrafos de entonces era retratarlos
  • 5.
    Felix d'Herelle descubrióen 1917 un microbio invisible, antagónico del bacilo de disentería" Wollman 1883-1943 D'Herelle 1873-1949
  • 6.
    Giorgi Eliava fundóen 1923 el primer instituto dedicado a la terapia con fagos en Tiblisi, Rep. de Georgia, 20 años más tarde era asesinado por la KGB Eliava 1892-1937
  • 7.
    El descubrimiento dela penicilina eclipsó el desarrollo de la fagoterapia
  • 8.
  • 9.
    Los blancos paralos antibióticos son limitados 1 2 3
  • 10.
    Cada vez haymenos antibióticos aprobados por la FDA y la EMA
  • 11.
    ¿Por qué aparecenresistencias a los antibióticos? Mutación Transferencia horizontal
  • 12.
    El ADN cuandose transmite de generación en generación acumula errores que pueden dar lugar a mutaciones que confieran resistencia a los antibióticos. Además las bacterias son capaces de intercambiarse genes
  • 13.
    Comparación de losantibióticos vendidos para uso humano y para uso en granjas
  • 14.
  • 15.
    El abuso delos antibióticos nos ha llevado a la era postantibiótica
  • 16.
    ¿Cómo será elmundo sin antibióticos? Las cirugías volverán a ser operaciones de alto riesgo Le diremos adios a los trasplantes de órganos. El periodo de jubilación volverá a acortarse. Antes de los antibióticos, una persona de 60 años que cogiese una neumonía tenía más probabilidades de morir que de superarla. Sin antibióticos la mortalidad asociada a los partos volvería a ser elevada, así como los abortos. La mortalidad de las personas encamadas se elevaría. Sin antibióticos sería prácticamente imposible curar las úlceras de los encamados, infecciones urinarias o de pulmón. Enfermedades infantiles como la neumonía, escarlatina o fiebres reumáticas volverían de nuevo a diezmar a los menores de dos años.
  • 17.
    ¿Jugamos a laruleta rusa? O ¿Cómo no aburrirte si estás inmunodeprimido en un hospital? 16% 33%
  • 18.
    En 2011 Escherichiacoli enterohemorrágica (EHEC) que produjo la muerte de al menos 32 personas en Alemania y más de un millar de infectados
  • 19.
    Otras opciones apartede los antibióticos 1. Higiene 2. Vacunas 3. Terapia con fagos 4. Enzibióticos 5. Bacteriocinas 6. Péptidos antimicrobianos MRSA in 2007.(www.earss.rivm.nl)
  • 20.
    Desde 1923 hastahoy los georgianos han mantenido el Instituto Eliava a pesar del colapso postsoviético y de las dos guerras civiles sufridas 4.5 veces menos población 4 veces menos territorio 2.5 veces menos PIB per cápita
  • 21.
    Los bacteriófagos ylos virus de mamífero tienen formas distintas de entrar en la célula
  • 22.
    Los fagos “inyectan”su ADN en unas células que tienen una presión interna de entre 5-25 atmósferas
  • 23.
    Los fagos sonespecíficos mientras que los antibióticos son de amplio espectro Los fagos son específicos de un tipo o de varios tipos de bacterias Los antibióticos son de amplio espectro, matan a todas las bacterias
  • 24.
    Los fagos sonestructuras altamente complejas comparadas con una molécula de antibiótico y por esa razón su farmacocinética es tan complicada
  • 25.
    De media hay50 millones de fagos en 1 ml de agua de más. En muestras de suelo las cantidades son más elevadas. Se calcula que existen 1031 fagos en el mundo
  • 26.
    Genes para caracterizarpatotipos de E. coli AB resist Sta Elt Eae DaaC Vt1 Vt2 Agg Ipa-H Amp Nitrofuran Trimeto/Sulfam Cipro Levo 1 - - + - + - - - Enterohemorragica 2 - - + - + + - - Enterohemorragica 3 - - + - + - - - Enterohemorragica 4 - - + - + + - - Enterohemorragica 5 - - + - + + - - Enterohemorragica 6 - - + - + - - - Enterohemorragica + 7 - - + - + - - - Enterohemorragica + 8 - - + - - - - - EPEC 9 - - + - - - - - EPEC 10 - - + + - - - - Difuso-Adherente + 11 - - + - - - - - EPEC 12 - - + - - - - - EPEC 13 - - + - - - - - EPEC + + + + 14 - - + - - - - - EPEC + + + + + 15 - - + - - - - - EPEC + 16 - - + - - - - - EPEC 17 - - + - - - - - enterobacteria 18 - - + + - - - - Difuso-Adherente 19 - - + + - - - - Difuso-Adherente + 20 - - + - - - - - EPEC 21 - - + - - - - - EPEC + 22 - - + + - - - - Difuso-Adherente 23 - - + - - - - - EPEC 24 - - + - - - - - EPEC + 25 - - - - - - - - Enterobacteria 26 - - - + - - - - Difuso-Adherente
  • 27.
    Aislamos 18 fagosdistintos frente a 12 cepas de E. Coli enteropatogénicas del Ecuador 1 2 3 4 5 6 10 14 15 21 22 25 26 4Q1 - + - +++ - - - + - ++ 4Q2 - - +++ - - - - - - 4Q3 - +/- - +++ - - +/- - - + 4Q13 - + - +++ - - - - - + 5Q1 - + + +++ - - - - - + 5Q5 - + +/- +++ + +++ - - - ++ ++ 5Q6 - +/- +++ ++ +++ - +++ - - ++ 5Q7 - + - +++ - ++ - - - ++ +/- 5Q9 - ++ - +++ ++ +++ +++ - - - 5Q13 - - +/- +++ ++ +++ - + - +++ + 5Q15 +/- - - +++ - +++ - + - +++ +/- 5Q16 +/- - +/- +++ +++ ++ - - - +++ +/- 5Q18 - ++ +/- +++ + ++ +++ +++ - +++ ++ 5Q19 - + + +++ - +++ ++ - ++ + 5Q20 + - - +++ - +++ - + - ++ +/- 5Q24 + ++ - +++ - ++ + - + - 6Q1 ++ - ++ +++ - - ++ - - 6Q7 +++ - ++ +++ - - +++ - -
  • 28.
    Absorbancia de loscultivos de E. coli enteropatogénica #14 multirresistente a los antibióticos, infectada con el fago 5Q18 (línea roja) o no (línea azul). El cultivo infectado lo fue a los 150 min. (flecha) con una concentración de fagos de 109 UFC/ml, este inóculo supone un MOI = 2,5. Los datos reflejan el promedio de tres experimentos independientes, la barra de error representa la desviación estándar de esos experimentos Tiempo en minutos Abs600nm 0 100 200 300 400 500 600 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3
  • 29.
    Reducción de lasunidades formadoras de colonias de la bacteria E. coli enteropatógena #14 multirresistente a los antibióticos en salchicha tratadas con el fago 5Q18 y con una concentración bactericida del 2% de ácido láctico. Se observa una reducción en el número de bacterias de 1.0 log10 con el fago ligeramente más efectiva que la reducción observada por el ácido láctico, un producto químico empleado en la industria cárnica. Control Water Lactic acid 2% 5Q18 1E+4 1E+5 1E+6
  • 30.
    Control Agua Ácidoláctico Fago 5Q5 Fago 5Q13 100.0E+2 100.0E+3 100.0E+4 0 2 4 6 8 10 12 0 0.5 1 1.5 2 2.5 E. coli 5Q5 5Q13 1.0 log10 de reducción de E. coli enterohemorrágica con los fagos 5Q5 y 5Q13 Inhibición del crecimiento de la cepa #5 de E. coli enterohemorrágica a 25ºC en medio líquido (LEM). Los fagos fueron añadido a las dos horas en una concentración de 109 PFU/ml Tiempo en horas Densidadópticaa600nm
  • 31.
    Las fotografías demicroscopía electrónica de los fagos nos muestran un fago de tallo largo no contráctil lo que nos permite clasificarlo como perteneciente al orden Caudoviral familia Siphoviridae. 5Q5 5Q13 XbaI
  • 32.
    El País hapublicado una entrevista al científico Peter Lawrence que es oro puro "Nos hemos vuelto la gallina de los huevos de oro. En las universidades británicas, se espera de los científicos que traigan dinero a la institución para pagar al personal administrativo". “los administradores, los gestores políticos, los funcionarios adventicios como los de recursos humanos, relaciones públicas y especialistas bibliométricos, han ganado seguridad, confianza, tiempo y salarios, y han ganado poder sobre los científicos” “solicitar dinero se ha convertido en la principal ocupación de los investigadores” “tienen que confeccionar sus publicaciones, hacer a medida su trabajo para que los artículos encajen en los parámetros bibliométricos adecuados” “En una estancia posdoctoral típica de tres años, los científicos jóvenes tienen que pasar la mitad de su tiempo intentando negociar su futuro, entonces ¿cuándo investigan?”
  • 33.
    Los fagos puedenmejorar la seguridad de los alimentos OmniLytics Announces USDA/FSIS Allowance of Bacteriophage Treatment of Salmonella on Poultry
  • 34.
    PhagoBioDerm: un productopara tratar infecciones bacterianas multirresistentes en quemaduras producido por el Instituto Eliava Bacteriofagos en PhagoBioDerm™ ayudan a limpiar la herida de S. aureus Multirresistente a antibióticos. Fuente: Intl. J. Dermatology, 2002, 41: 453-458 La composición es este producto es: Ciprofloxacina (un antibiótico), benzocaína (un anestésico), los fagos, α-Quimotripsina (proteasa que destruye el tejido necrótico) y por último el polímero biodegradable.
  • 35.
    Klebsiella convierte lamelamina a ácido cianúrico. De los 300.000 niños 6 murieron por fallo renal. En la biopsia se encontró ácido cianúrico las bacterias del género bacteroides protegen a los ratones contra las consecuencias de la acumulación de grasa corporal. Las bacterias del niño sano eran capaces de procesar los aminoácidos que contienen sulfuro. Los niños con Kwashiorkor carecían de estas bacterias y sufrían de malnutrición Cuando aumentaban la presencia de Akkermansia municiphila en sus intestinos se observaba una pérdida de peso y un mejor control de la insulina En 2013 aparecieron pruebas que relacionan la bacteria intestinal con Fusobacterium en la estimulación de los tumores colorectales Prevotella copri se ha asociado con la artritis reumatoide. En ratones que poseen Lactobacillus johnsonii en su flora intestinal están mucho mejor protegidos contra las alergias y el asma.
  • 36.
    Fischetti en 2001demostró que las enzimas líticas purificadas son agentes terapeuticos eficaces para reducir la colonización de las mucosas por neumococos en ratón Enzibióticos son enzimas que actúan como antibióticos Se usan aplicados directamente como: Espray Lociones Enjuague bucal Tampones Supositorios Catéteres Inhaladores Vendas Colirios
  • 37.
    Cualquier tecnología siempreha tenido un uso militar Lederberg ganó con 33 Años el premio Nóbel Ken Alibek trabajó En armas biológicas En la URRS
  • 38.
    bacteriasactuaciencia.blogspot.com.es/ Jordy Larco Pablo Egas FernandoVillavicencio Liliana Ushiña Dr. Gabriel Trueba