Este documento describe una metodología para evaluar la tolerancia a la antracnosis causada por Colletotrichum acutatum en germoplasma de lulo (Solanum quitoense). La metodología involucra la preparación de un filtrado crudo del hongo y la exposición de tejido vegetal de lulo a este filtrado de diferentes maneras para inducir síntomas. Los resultados muestran que el filtrado reduce el desarrollo de raíces y hojas en explantes de lulo, y que el efecto es más severo en variedades susceptibles

1. METODOLOGÍA in vitro PARA LA EVALUACIÓN DE GERMOPLASMA DE LULO
Solanum quitoense LAM BAJO LA PRESIÓN DE TOXINAS DE
Colletothrichum acutatum
Pedro Pablo Parra G., Luis Armando Muñoz B., Maria Eugenia Buitrago G., Elizabeth Álvarez C. y Alonso González M.
Centro Internacional de Agricultura Tropical CIAT
Metodologías de adición del filtrado crudo (FC) al material vegetal
INTRODUCCIÓN
Preparación de medio de cultivo
• El lulo o naranjilla, S . quitoense, es una especie de la zona Andina cultivada en Adición de filtrados Adición de filtrados crudos
pequeñas parcelas (<1 ha) por más de 16.000 familias en Colombia y Ecuador. con diferentes diluciones de
crudos sobre tejido foliar a medio de cultivo
filtrado crudo
• El cultivo es afectado por numerosas plagas y enfermedades y no se han encontrado
fuentes de resistencia genética en la especie S. quitoense, lo cual se ha remediado con
la producción de híbridos interspecíficos. • Hojas de vitro plantas de • Siembra de ápices de 1.5 cm
60 días • Plantas de 4 semanas • Clones EC-39, EC-28 y PL-19
• En Colombia predomina el cultivo de la variedad Castilla (S. quitoense), mientras en • Herida de 1 mm • Adición 1 ml FC • Medio de cultivo con diluciones de
Ecuador predomina el cultivo de híbridos interspecíficos. • Adición 1 ml de FC FC
• El costo del manejo sanitario se estima en más d US$4 8 millones al año para C l bi
t d l j it i ti á de US$4.8 ill l ñ Colombia
y Ecuador (entre 5 y 16% de los costos de producción).
• La antracnosis del fruto, causada por Colletotrichum acutatum es una limitante que
reduce la productividad del cultivo. PL‐19
• La resistencia genética es la herramienta más económica y de menor impacto sobre el
ambiente y la salud del agricultor y su familia.
A
EC‐28
OBJETIVO: Desarrollar una B
metodología que permita la evaluación
EC‐39
de germoplasma de lulo para buscar
g p p
tolerancia a Colletotrichum spp.
C
Fig 2. Fig 3. Fig 4.
MATERIALES Y METODOS
• Los materiales usados en el desarrollo de esta metodología han sido evaluados en
condiciones de campo en el Departamento de Cauca, Antioquia y Caldas (Colombia), y
en condiciones de invernadero (CIAT). Control
• Se usaron dos clones tipo Castilla (EC-28 y EC-39), susceptible, y un clon del híbrido
inter-específico (PL-19), tolerante, producido por Corpoica.
3.0%
• Se obtuvo un filtrado crudo producido por una cepa de Colletotrichum acutatum Filtrado
Filtrado
altamente patogénica. El hongo se incubó durante una semana en medio líquido MS, Crudo
en oscuridad y sin agitación.
PL‐19 EC‐28 EC‐39
• Se evaluaron tres formas de exposición del tejido vegetal al filtrado crudo:
a) Sobre tejido foliar (Fig 2)
b) sobre medio de cultivo a plantas desarrolladas (Fig 3).
c) cuatro diluciones v/v de filtrado crudo y medio de cultivo (Fig 4).
Evaluación en campo y laboratorio
• Los ápices de los clones se sub-cultivaron in vitro en un medio MS con el filtrado crudo
y se evaluaron cuatro semanas después de siembra.
• Se evaluaron los síntomas en el área foliar y peso seco de raíces; se hizo registro
fotográfico semanal de las unidades experimentales.
RESULTADOS Y DISCUSION
• El protocolo establecido permite obtener filtrados crudos estériles que inducen síntomas
sobre hojas y ápices desarrollados in vitro para la evaluación de germoplasma de lulo
con posible tolerancia a Antracnosis. Fig. 1
• La adición de filtrados crudos sobre tejido foliar y medio de cultivo a plantas desarrolladas
inducen síntomas visibles pero difícilmente cuantificables (Figs 2, 3)
• El sub cultivo de ápices en medio A, con diluciones de filtrado crudo, permitió cuantificar
la disminución en el desarrollo de los explantes (Fig. 4)
PL‐ 19 EC‐ 28
CONCLUSIONES
• El filtrado crudo de C. acutatum induce necrosis en tejido foliar de vitro plantas de
lulo.
• Los filtrados crudos de C. acutatum reducen el desarrollo de raíces y hojas en
explantes.
• El efecto del filtrado es mas severo en los materiales de lulo Castilla (EC-28 y EC-
39) y menos severo en el híbrido inter-específico (PL-19) mas tolerante.
• El filtrado se debe usar a diluciones reducidas (3% o menos) para lograr diferencias
entre materiales
• Las evaluaciones realizadas con esta metodología concuerdan con los resultados
obtenidos a nivel de plantas en campo y frutos en laboratorio.
REFERENCIAS
• LEBEDA, A., et al, 2001. The role of enzymes in plant-fungal pathogen interactions. J. Plant
Diseases Protect. 108:89-111p.
Fig. 1. Serie de filtración para la obtención de filtrados crudos de C. acutatum estériles • SVABOVA, L., 2005. In vitro selection for improved plant resistance to toxin-producing pathogens.
En: J. Phytopathology. 153, 52-64
AGRADECIMIENTOS
Universidad Nacional de Colombia,
Universidad del Cauca, Universidad
Santa Rosa de Cabal, MADR y Corpoica.
Esta investigación fue financiada por
Fontagro.