Este informe de laboratorio describe los medios de cultivo y técnicas de siembra utilizadas para cultivar bacterias. Se explican los objetivos, procedimientos y resultados del cultivo de E. coli y Pseudomonas en varios medios como agar nutritivo, MacConkey, cetrimida y SIM. Los resultados muestran las diferencias morfológicas de las colonias bacterianas al crecer en diferentes medios.

1. 1
Universidad Politécnica Salesiana
Biotecnología - Tercer Nivel
Paul Villagrán
3.11.16
Microbiología (Grupo I)
Informe de laboratorio # 2
MEDIOS DE CULTIVO Y TÉCNICAS DE SIEMBRA
Un cultivo es un método para la multiplicación de
microorganismos, tales como lo son bacterias en el que se
prepara un medio óptimo para favorecer el proceso deseado.
Un medio de cultivo es una solución de varios nutrientes
requeridos por los microorganismos. Tales como: agua, carbono,
energía, nitrógeno, minerales, factores de crecimiento y
concentración de ion hidrógeno H+
OBJETIVOS:
1. Aplicar el método aséptico de siembra y comprender la
importancia del mismo.
2. Observar las diferencias morfológicas que existen entre las
colonias bacterianas de la misma especie, de diferentes
especies y sembradas en diferentes medios de cultivo.
3. Conocer las diferentes condiciones en las que se cultivan las
bacterias, dentro de esto, conocer los diferentes tipos de
medios de cultivos que se utilizarán en el transcurso del
curso y entender su aplicabilidad.
4. Obtener un cultivo puro de diferentes microorganismos para
el proceso de identificación de los mismos.1
PROCEDIMIENTO
1. Observe el diagrama en el que se describe el método aséptico
de transferencia de microorganismos.
1
Cultivo mixto: cultivo microbiano que contiene uno o más especies de
microorganismos.
Cultivo puro: cultivo microbiano con una sola especie microbiana.

2. 2
2. Utilizando este método realice la siembra desde los cultivos
de Pseudomona y E.coli como se describe a continuación.
3. Observe detalladamente los cultivos bacterianos que se les
proporcionaran, así como los medios estériles con los que va
a trabajar (MKL, Cetrimida).
4. Tomar la caja con el cultivo bacteriano que va a utilizar.
5. Marcar e identificar las cajas/tubos a los que va a
transferir, poner número de grupo, fecha y microorganismo
utilizado.
6. Tomar un hisopo estéril y realizar el inóculo primario, luego
con el asa de metal estéril realizar el inóculo secundario,
terciario y cuaternario.

3. 3
7. Esterilizar el asa luego de casa inóculo y proceder a
realizar la siembra según lo indicado en los diagramas
utilizando el método aséptico
E.coli en MKL
Pseudomona aureginosa en cetrimida

4. 4
8. Una vez finalizada la transferencia, esterilizar el asa y
colocarla en un lugar seguro.
9. Incubar a 37°C por 18-24 horas.
10. Asegúrate que las tapas de las cajas petri estén
hacia abajo.
11. Observar los resultados al día siguiente y graficar
en la tabla de resultados.
Patrones de crecimiento en los medios de cultivo:
Reconocer diferentes morfologías de crecimiento de las
bacterias en medios de cultivo es un paso usualmente crucial
en los procesos de identificación de microorganismos. Las
bacterias muestran a menudo distintas morfologías, color y
textura en medios de cultivo.
Las categorías básicas de crecimiento incluyen, forma de la
colonia, forma del margen, elevación, color y textura.
Las formas de las colonias pueden ser descritas como
circulares, irregulares o puntiformes.
El margen puede ser entera (liso, sin irregularidades),
ondular (ondulado), lobulada (lóbulos), filamentosa, o
rizoide (ramificado como raíces).
De acuerdo a la elevación de las colonias, se incluyen plana
y elevada, convexa, pulvinado (muy convexa), y umbonate
(elevada en el centro). La textura de la colonia puede ser
húmedo, mucoso, o seco. La producción de pigmentos es otra
característica útil y se puede combinar con propiedades
ópticas tales como opaco, translúcido, brillante o mate.

5. 5
Resultados:
Medios de
cultivo
E. coli Pseudomona
AGAR NUTRITIVO
Medio
preparado;
ámbar claro a
medio
ligeramente
opalescente.
 Forma: Puntiforme- Irregular
 Borde: Externo
 Elevación: Convexa
Color: Blanquecino, brillante
Textura: Lisa
Forma: Puntiforme- Irregular
 Borde: Externo
 Elevación: Convexa
Color: Translúcido
Textura: Continua

6. 6
MacConkey
Lactosa (MKL)
Medio
preparado: rojo
púrpura
Forma: Irregular
Color: Rojas con halo turbio
Textura:
 Borde: Externo
 Elevación: Convexa
Forma: Irregular
Aspecto húmedo.

7. 7
Cetrimida Agar
Medio
preparado:
ámbar claro,
opalescente con
precipitado.
 Crecimiento inhibido Forma: Irregular
Color: pigmentación verde azulada
alrededor de la colonia
Textura: Bacilo Recto
 Borde: Externo
 Elevación: Convexa

8. 8
SIM
Medio
preparado:
ámbar
Color: rojo
Movilidad: +
Indol: +
Producción de ácido sulfúrico: -
Textura: Turbia en el medio
Color: Naranja
Textura: Turbia en el medio

9. 9
Observaciones:
 En el cultivo de Pseudomona en (Mkl), no se observó crecimiento, este medio nos sirve para ver bacterias
entéricas2 que tienen la habilidad de fermentar lactosa y pueden ser detectadas utilizando el
carbohidrato lactosa y el indicador de pH es rojo neutro.
 En el medio de cultivo Cetrimida, no se observaron resultados en los cultivos de E.Coli, ya que este
medio es utilizado para el aislamiento selectivo de Pseudomonas aeruginosa y de otras especies del
mismo género.
 En los medios de cultivo SIM, tanto para E.Coli como para Pseudomona, se pueden verificar la movilidad,
producción de indol y de sulfuro de hidrógeno ya que este medio es útil para diferenciar miembros de
la familia Enterobacteriaceae
2
Las bacterias entéricas o Enterobacterias son microorganismos que habitan, generalmente, en el intestino de los animales y las
personas

10. 10
Resultados II:
MEDIO DE
CULTIVO
S.AUREUS S.EPIDERMIDIS
manitol salado
medio
preparado:
rojo
forma: líneas rectas
color: colonias blanquecinas
forma: lineas rectas
color: blanco, medio de cultivo rosáceo

11. 11
Observaciones:
El medio ‘’manitol salado’’ es un medio altamente selectivo debido
a su alta concentración salina. Los estafilococos coagulasa
positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio; las colonias
aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante como es el caso
de S. aureus. Los estafilococos coagulasa negativos, presentan
colonias rodeadas de una zona roja o púrpura como en el caso de
S. epidermidis.
PREGUNTAS:
1. Los medios de cultivo se clasifican de acuerdo a su
composición, ¿Cuál es la particularidad de cada uno de ellos?
Según su origen:
a) NATURALES: son los preparados a partir de sustancias naturales
de origen animal o vegetal como ser extractos de tejidos o
infusiones y cuya composición química no se conoce exactamente.
b) SINTÉTICOS: son los medios que contienen una composición
química definida cuali y cuantitativamente. Se utilizan para
obtener resultados reproducibles.
c) SEMISINTÉTICOS son los sintéticos a los que se les añaden
factores de crecimiento bajo una forma de un extracto orgánico
complejo, como por ejemplo extracto de levadura.
Según su consistencia
a) LÍQUIDOS: se denominan caldos y contienen los nutrientes en
solución acuosa.
b) SÓLIDOS: se preparan añadiendo un agar a un medio líquido
(caldo) a razón de 15g/litro. El agar es una sustancia inerte
polisacárida (hidrato de carbono) que se extrae de las algas.
Como esta sustancia no es digerida por las bacterias no constituye
ningún elemento nutritivo. Este conjunto convenientemente
esterilizado puede ser vertido en placas de Petri o en tubos de
ensayo y presentan la posibilidad de aislar y diferenciar
bacterias, "procesos que antes no eran posibles en medio líquido".
c) SEMISÓLIDOS: contienen 7,5 g de agar /litro de caldo. Se
utilizan para determinar la motilidad de las especies en estudio.
Según su composición: A causa de los requerimientos químicos del
mundo microbiano, a veces es necesario agregar o eliminar
componentes químicos del medio.

12. 12
a) COMUNES O UNIVERSALES: su finalidad es el crecimiento de la
mayor parte de los microorganismos poco existentes. Es el medio
más frecuentemente utilizado para mantener colonias microbianas.
Por ejemplo: agar común o caldo común.
b) ENRIQUECIDOS: están compuestos de un medio base como apoyo del
crecimiento al cual se le puede agregar un gran exceso de
nutrientes como suplementos nutritivos, por ejemplo: sangre,
suero, líquido ascítico, etc. Se utiliza para microorganismos que
tienen grandes exigencias nutricionales.
c) SELECTIVOS: son sólidos en los que la selectividad se consigue
alterando las condiciones físicas del medio o añadiendo o
suprimiendo componentes químicos específicos con el fin de
inhibir el crecimiento de especies químicas cuyo crecimiento no
interesa. Este tipo de medio sólo permite el crecimiento de un
grupo de microorganismos e inhibiendo el de otros. Se utiliza
para seleccionar y aislar microorganismos a partir de poblaciones
mixtas. Por ejemplo, Agar salado-manitol o Chapman (permite el
crecimiento de ciertos estafilococos). (2016). Biologia.edu.ar.
2. Escribe las especificaciones de los medios de cultivo
utilizados en esta práctica (composición, indicadores de pH,
si son específicos o no para grupos bacterianos y por qué).
(MacConkey Agar, Agar Nutritivo, Manitol Salado, SIM,
Cetrimida).
Agar MacConkey:
Composición:
Fórmula (g/l)
Peptona 17.0
Pluripeptona 3.0
Lactosa 10.0
Mezcla de sales
biliares
1.5
Cloruro de sodio 5.0
Agar 13.5
Rojo neutro 0.03
Cristal violeta 0.001

13. 13
pH final: 7,1 ±0,2
Indicadores de pH: Cristal violeta y rojo neutro
Rojo neutro: decolora en pH sobre 6.8 y se torna rosado a un pH
bajo el 6.8
Cristal violeta: Amarillo e pH por debajo de 1.6 y se torna violeta
azulado por encima de 1.6
Especificidad: Permite diferenciar bacterias que fermentan
lactosa (L+) de las no fermentadoras (L-) en muestras clínicas,
de agua y alimentos. Todas las especies de la familia
Enterobacteriaceae se desarrollan en el mismo. Contiene sales
biliares y cristal violeta, lo que inhibe el crecimiento de
bacterias Grampositivas, lo que convierte en un medio diferencial
poco selectivo.
Agar Nutritivo:
Composición:
Fórmula (g/l)
Pluripeptona 5.0
Extracto de carne 3.0
Cloruro de sodio 8.0
Agar 15.0
pH final: 7.3 ± 0.2
Indicadores de pH: Ninguno
Especificidad: Medio de cultivo nutritivo no específico, en el
cual la pluripeptona y el extracto de carne constituyen la fuente
de carbono, nitrógeno y aportan nutrientes para el desarrollo
bacteriano.
Manitol Salado:
Composición:
Fórmula (g/l)
Extracto de carne 1.0
Pluripeptona 10.0

14. 14
d-Manitol 10.0
Cloruro de sodio 75.0
Agar 15.0
Rojo de fenol 0.025
pH final: 7.4 ± 0.2
Indicadores de pH: Rojo fenol: amarillo bajo el pH 6.8 y rojo a
pH 7.4 a 8.4
Especificidad: Medio de cultivo selectivo y diferencial, utilizado
para el aislamiento y diferenciación de estafilococos.
Es recomendado para el aislamiento de estafilococos patogénicos a
partir de muestras clínicas, alimentos, productos cosméticos y
otros materiales de importancia sanitaria.
También, este medio puede utilizarse para el cultivo de especies
halófilas de Vibrio, si no se dispone de medios apropiados (TCBS
Medio, Medio Marino, etc.), aunque algunas especies pueden no
desarrollar.
SIM:
Composición:
Fórmula (en gramos por
litro)
Tripteína 20.0
Peptona 6.1
Sulfato de hierro y
amonio
0.2
Tiosulfato de sodio 0.2
Agar 3.5
pH final: 7.3 ± 0.2
Indicadores de pH: Las cepas productoras de sulfhídrico se
distinguen por la formación de un precipitado negro de sulfuro de
hierro a partir del tiosulfato siempre que el medio se mantenga a
un pH mayor a 7.2.

15. 15
Especificidad: Es un medio útil para diferenciar miembros de la
familia Enterobacteriaceae.
Cetrimida Agar:
Composición:
Fórmula (en gramos por litro)
Peptona de gelatina 20.0
Cloruro de magnesio 1.4
Sulfato de potasio 10.0
Agar 13.6
Cetrimida 0.3
pH final: 7.2 ± 0.2
Indicadores de pH: No contiene
Especificidad: Medio utilizado para el aislamiento selectivo de
Pseudomonas aeruginosa y de otras especies del género.
Madigan, Michael T. (2012)
Conclusiones:
1. De aplicó el método de siembra con la asepsia requerida
2. Se observó las diferencias morfológicas que existen entre las
colonias bacterianas de la misma especie, de diferentes
especies y sembradas en diferentes medios de cultivo.
3. Se reconoció las diferentes condiciones en las que se
cultivan las bacterias y los diferentes tipos de medios de
cultivos que se utilizaremos en el transcurso del curso, se
comprendió que ciertos medios de cultivo tienen especificad
para ciertos microorganismos
4. Se obtuvo un cultivo puro de diferentes microorganismos
(E.coli, Pseudomona para el proceso de identificación de
estos.

16. 16
Bibliografía:
- Madigan, Michael T. (2012). Brock biology of
microorganisms (13th ed.). San Francisco: Benjamin
Cummings.
- (2016). Biologia.edu.ar. Recogido el 3 de noviembre del
2016, desde
http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/tp4.pdf
- Anderson, Cindy (2013). Great Adventures In The Microbiology
Laboratory. Pearson. p. 175-176
- Leboffe, M and Pierce, B (2011). A Photographic Atlas for
the Microbiology Laboratory. Englewood-Colorado. Morton
Publishing. 4th edition.
- Merck. (2002). Microbiology Manual. Europa: Merck. 2th
Edition.
- Miyata, S., M. Casey, D. W. Frank, F. M. Ausubel, and E.
Drenkard.,2003, Use of the Galleria mellonella caterpillar
as a model host to study the role of the type III secretion
system in Pseudomonas aeruginosa pathogenesis. Infect.
- Prescott, Lansing M. Harley, John P. Klein, Donald A. 2013.
Microbiology. Mc Graw Hill Interamericana. Madrid. España