Los patógenos fúngicos son una causa importante de enfermedades invasivas fatales en pacientes inmunocomprometidos. Limitaciones en terapias antifúngicas: Toxicidad, espectro cerrado y emergencia de patógenos resistentes.

1. UNIVERSIDAD NACIONAL DEL ALTIPLANO
MÉTODOS EXTRACCIÓN DE
ARN DE Candida albicans.
PRESENTADO POR:
MEDINA HUMPIRI EDUARDO
JEANPIERO
PINO RAMOS RENATO ANTONIO
QUISPE PAMPA MARIA PAOLA
DOCENTE:

2. Los patógenos fúngicos son una causa importante de
enfermedades invasivas fatales en pacientes
inmunocomprometidos.
Limitaciones en terapias antifúngicas: Toxicidad,
espectro cerrado y emergencia de patógenos
resistentes.
INTRODUCCION

3. Género
CANDIDA
El género CANDIDA pertenece a la familia Cryptococcaceae dentro del
orden Deuteromycota.
Forman parte de la flora normal de la piel, tracto gastrointestinal,
genitourinario y respiratorio.

4. Levadura comensal del Tracto vaginal, gastrointestinal y bucal en los
humanos.
Agente patógeno oportunista generando lesiones leves hasta infeccion
invasiva y rápidamente fatal en pacientes con inmunidad deprimida

5. razón de la extracción de
arn de candida
Obtener una muestra de ARN de Candida albicans en
cantidad y calidad adecuada que permite realizar
estudios en biología molecular de este microorganismo
que nos ayudará a determinar los niveles de expresión
de los genes o cambios que presentan con relación a las
condiciones de crecimiento, que puedan favorecer a los
factores de virulencia de esta levadura.

6. Incubación
• 5 minutos
• - 80° C
Baño María
• 10 minutos
• 60° C
METODOLOGÍA
Candida albicans lISIS DE LA PARED CELULAR
• Choque térmico:

7. lISIS DE LA PARED CELULAR
METODOLOGÍA
Candida albicans
2. Sonicación
• 1 minutos
• 30 Hertz

8. METODOLOGÍA
Candida albicans lISIS DE LA PARED CELULAR
3. Lisis Enzimática
• EDTA
• Enzima liticasa
Incubación
• 4 horas
• 37° C

9. Reactivo Trizol
METODOLOGÍA
Es un reactivo a base de ácido-
guanidinio-fenol idealmente diseñado
para la extracción de ARN
EXTRACCIÓN DE ARN TOTAL
• FENOL CLOROFORMO
• ISOTIOCIANATO DE GUANIDINA

10. METODOLOGÍA
EXTRACCIÓN DE ARN TOTAL
Reactivo Trizol
Agua tratada
con DEPC
Agua libre de
ARNasas

11. • Homogenización
• Separación de fases
• Precipitación de ARN
• Lavado de ARN
• Redisolución de ARN
EXTRACCIÓN DE ARN TOTAL
Reactivo Trizol
METODOLOGÍA

12. Reactivo Trizol
750µl
15 - 30°C
Incubación
15 - 30°C
2 min
Glucógeno
3µl
30 min
2 a 8°C
9OOµl
Trisol
75Oµl
12000 rpm
30 min a 4°C
Incubación
10 min
55 - 60°C

13. CUANTIFICACION
DEL ARN TOTAL
La cuantificacion del ARN se realiza por
espectrofotometria. para lo cual se utilizan cubetas
donde se deposita la muestra, se hidrata con agua DECP
y se determina al absorbancia a 230, 260 y 280nm

15. Purificacion del
arn total
Se incuba los estractos con DNAsas por 10min a 30°C se
centrifuga a 13000 rpm por 2 min
Descartar sobrenadante y suspender en 500ul de
isopropanol y formamida

16. Visualizacion del arn
mediante gel de agarosa

17. Gracias
por su
atención