Para la evaluación de la viabilidad post-criopreservación, se deben recuperar los microorganismos desde el sistema de refrigeración, 48 horas posterior al proceso de criopreservación. Este paso es fundamental para el proceso de depósito de microorganismos en una colección de cultivos, ya que, si el microorganismo tolera el proceso de preservación, puede ser oficialmente depositado y registrado como parte de la colección, otorgándole un número definitivo de colección. De lo contrario, el microorganismo no es aceptado y el número de colección será asignado a otra muestra. Los conceptos y la metodología usada en el proceso de evaluación de la viabilidad microbiana se detallan en el capítulo

1. DOCENTE:
Dr. Hebert Hernan Soto Gonzales
CURSO:
Biotecnología
CICLO:
VII Ciclo
TEMA:
Preservación de
Microorganismos por
Liofilización
ESTUDIANTE:
Rosas Cohaila, Diego Alonso
Ilo-Perú
2022
UNIVERSIDAD NACIONAL
DE MOQUEGUA
ESCUELA PROFESIONAL
DE INGENIERIA AMBIENTAL

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ANTECEDENTES HISTÓRICOS
Un proceso rudimentario de liofilización tuvo su origen en
el imperio Inca, alrededor del año 200 a.C., en la zona del
altiplano andino a 4.000 msnm, posteriormente, los
vikingos utilizaron este proceso para la conservación de
pescado.
En el año 1911 surgen los primeros métodos de
liofilización para bacterias, empleando suero y leche como
agentes protectores. La técnica deliofilización se desarrolla
en forma industrial durante la Segunda Guerra Mundial y
fue aplicada, fundamentalmente, a la liofilización de
plasma humano y producción de penicilina.
INTRODUCCION
La preservación de microorganismos es una tarea fundamental en una colección de cultivos
microbianos. En ella se debe asegurar que la viabilidad y pureza de los microorganismos sea
mantenida durante décadas.
Uno de los principios básicos de la liofilización es la interrupción del crecimiento microbiano,
donde prevalece la viabilidad y estabilidad genética del cultivo por un período prolongado.
Este es un método de largo plazo, que se basa en eliminar el agua por sublimación y
posteriormente se realiza un vacío, de manera que se evita la contaminación de la cepa y la
variabilidad genética.
TÉCNICA DE LIOFILIZACIÓN
Se basa en paralizar el metabolismo
por deshidratación celular sometiendo
la muestra a congelación y
sublimación, las células son
protegidas con un lioprotector.
La disminución en el contenido de
humedad residual da lugar a un
material compacto que se disuelve
posteriormente con facilidad.

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Es un proceso en tres etapas:
1) Fase de solidificación: la mayor parte del agua que contiene el producto se congela en
forma de cristales de hielo (agua prácticamente pura) dentro del liofilizador o dentro
del mismo liofilizador.
2) Fase de deshidratación:
 Desecación primaria o sublimación: consiste en la sublimación de los cristales de
hielo de manera que sólo queda la fase amorfa con estructura porosa. Esta etapa se
realiza en condiciones por debajo del punto triple del agua (punto donde coexisten
agua, hielo y vapor).
 Desecación secundaria o desorción: el agua no congelada se traslada hacia la
superficie y sale fuera de la matriz vítrea. Para eliminar esta agua, se realiza una
evaporación bajo vacío.
3) Fase de rehidratación: consiste en la reconstitución del estado original por adición de
agua o una solución acuosa. Los productos liofilizados son fácilmente rehidratables
debido a que la estructura porosa facilita la penetración del agua.
Según Casp y Abril (1999) la liofilización presenta una serie de ventajas:
 No existe peligro de oxidación por la ausencia de aire durante el procesado.
 No hay agua libre, por lo tanto, no hay peligro de hidrólisis ni de crecimiento
microbiano.
 Al evaporarse el hielo, quedan poros que permiten una rehidratación o reconstitución
rápida. La humedad residual es baja.
 La duración de la conservación es larga.
Pero también presenta algunos inconvenientes:
 El coste de las instalaciones y los equipos es muy elevado. Estos traen altos costes de
energía (también alrededor de tres veces al de los otros métodos).
 Proceso lento y largo (un ciclo habitual puede ser de 4-8 horas para liofilizar 2 gramos
de producto).
MATERIALES Y EQUIPOS
-Viales de vidrio de 2ml -Tubos cónicos
-Ultracongelador -Crioprotector
- Liofilizador -Etiquetas
-Placas Petri -Ampollas

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METODOLOGIA
1. Sembrar el microorganismo en un medio de cultivo.
2. Dejar reposar los viales en refrigeración por 12 h para permitir la difusión del
crioprotector al interior de las células.
3. Colocar cada una de las muestras en un ultracongelador de rodillos con etanol a -50°C
(20 min).
4. Una vez congeladas la muestra, se conectan en las válvulas del liofilizador hasta su
secado (6-7 h).
5. Al concluir la desecación, se coloca un tapón de goma estéril a cada vial y se sella con
un arillo de aluminio. Después de siete días de almacenamiento, se verifica la ausencia
de contaminación y la conservación de las características propias
BIBLIOGRAFIA
• https://biblioteca.inia.cl/bitstream/handle/20.500.14001/6945/NR42412.pdf
• https://www.ub.edu/talq/es/node/261
• https://www.adiveter.com/ftp_public/A2190210.pdf