TECNICA DE CONCERVACION DE MICROORGANISMOS POR LIOFILIZACIÓN

1. TRABAJO:
DESCRIPCION DE LA TECNICA DE CONCERVACION DE
MICROORGANISMOS POR LIOFILIZACIÓN
ESTUDIANTE:
MAMANI IBAÑEZ, ERIKA SOLEDAD
CURSO:
BIOTECNOLOGIA
DOCENTE:
SOTO GONZALES, HEBERT HERNAN
Ilo – Moquegua
2022
Escuela Profesional de
Ingeniería Ambiental
Facultad de ingenierías:

2. TECNICA DE CONCERVACION DE
MICROORGANISMOS POR LIOFILIZACIÓN
T.A. Jennings (1993) define a la liofilización
como un proceso de estabilización en el cual el
material primero se congela y se concentra el
solvente, comúnmente el agua, reduciéndolo
mediante sublimación y desorción, a niveles
que no sostendrán más el crecimiento
biológico o las reacciones químicas. Consta de
tres fases: sobre congelación, desecación
primaria y desecación secundaria.
Los investigadores de INVAP2 en el proyecto
LIAL (2001) definen a la liofilización como una
forma de desecado en frío, que sirve para
conservar sin daño a los materiales biológicos.
El producto se conserva con muy bajo peso y
a temperatura ambiente, manteniendo
estables todas sus propiedades al
rehidratarse. J.de D. Alvarado (1996)
estableció que cuando se deshidrata y utiliza
congelación y vacío, el proceso se denomina
liofilización; cuando se trabaja en congelación
sin uso de vacío, se denomina liofilización
atmosférica.
HISTORIA
Un proceso rudimentario de liofilización tuvo su
origen en el imperio Inca, alrededor del año
200 a.C., en la zona del altiplano andino a
4.000 msnm, el cual era utilizado para la
fabricación del chuño (papa deshidratada) y
charqui (carne de llama deshidratada);
posteriormente, los vikingos utilizaron este
proceso para la conservación de pescado. El
proceso de liofilización fue re-inventado en
1906 por Arsene dArsonval y Frédéric Bordas,
mientras que en el año 1911 surgen los
primeros métodos de liofilización para
bacterias, empleando suero y leche como
agentes protectores. La técnica de liofilización
se desarrolla en forma industrial durante la
Segunda Guerra Mundial y fue aplicada,
fundamentalmente, a la liofilización de plasma
humano y producción de penicilina. La
preservación de microorganismos es una tarea
fundamental en una colección de cultivos
microbianos. En ella se debe asegurar que la
viabilidad y pureza de los microorganismos sea
mantenida durante décadas. Para cumplir con
este objetivo existen varias técnicas de
preservación, siendo la liofilización un método
que cumple con los requisitos exigidos por la
Federación Mundial de Colecciones de Cultivo
(WFCC).
 La técnica de liofilización y su
aplicación para preservar
microorganismos
La liofilización consiste en la eliminación del
agua presente en una sustancia congelada, a
través de la sublimación del hielo; es decir, el
agua en estado sólido pasa a estado gaseoso
directamente, sin pasar por estado líquido.
Para lograr la sublimación del agua congelada,
la temperatura y la presión parcial del vapor de
agua deben ser inferiores a la del punto triple
del agua, es decir menor que 0,0099 °C y
menor que 0,006 atm (610,5 Pa) y, cuando la
muestra se calienta, el hielo se sublima
directamente a vapor sin pasar por estado
líquido.
El proceso de liofilización tiene varias ventajas
por sobre la crio preservación. Por ejemplo,
tiene un bajo costo de mantenimiento debido a
que los microorganismos liofilizados son
preservados en viales o ampollas de vidrio, los
que a su vez son almacenados en gavetas,
prescindiendo de suministro de energía
eléctrica para su mantención.
 Equipamiento necesario para la
liofilización
Un liofilizador posee un sistema de vacío,
generado a través de una bomba de aceite que

3. se encuentra anexa al equipo principal. La
bomba de aceite está conectada a una trampa
para evitar el paso del solvente desde el
liofilizador hacia el interior de la bomba.
 Insumos, accesorios y otros equipos
requeridos
Para preservar microorganismos por medio de
liofilización se requieren viales de vidrio de 2
mL, que necesitan de una tapa de goma para
cerrarlos Posterior al proceso de liofilización,
los viales son sellados con una tapa metálica
para evitar la entrada de aire al material
biológico contenido dentro del vial, lo cual se
realiza con un alicate llamado crimpador
manual de viales. Las muestras requieren ser
congeladas antes de introducirlas en el
liofilizador, por lo que se requiere de un
congelador que alcance temperaturas de -20
°C.
Este tipo de muebles son actualmente
utilizados para almacenar las muestras
liofilizadas.
 Etapas fundamentales del proceso
de liofilización
El proceso de liofilización comienza con la
preparación de una mezcla compuesta por el
inóculo del microorganismo y la sustancia
lioprotectora disuelta en la solución. Luego,
esta mezcla es congelada y posteriormente
transferida al equipo de liofilización. Dentro del
equipo ocurre el secado de la muestra por
sublimación del agua congelada y, cuando el
proceso concluye, la muestra es sellada con el
tapón de goma, al vacío.
 Procedimientos para la preservación
de microorganismos por liofilización
Etapa 1. Inspección primaria del cultivo
microbiano

4. Etapa 2. Procesamiento primario de la muestra
Etapa 3. Formulación de la muestra para la
liofilización
Etapa 4. Pre congelado y liofilización de las
muestras
Etapa 5. Evaluación de viabilidad de la
muestra post-liofilización
 Almacenamiento del material
liofilizado
Si los microorganismos toleran el proceso de
liofilización, los viales son almacenados en
gavetas metálicas resistentes, previamente
individualizadas con el número de gaveta,
número de cajón y, finalmente, la ubicación en
cada compartimento de éste. En el caso de las
gavetas, cada gaveta posee 6 cajones, cada
cajón está dividido en 6 compartimentos, cada
uno con capacidad para 42 viales, siendo en
total 252 puestos por cajón y 1.512 puestos por
gaveta. Para la conformación de una colección
microbiana, es importante calcular el número
máximo de cepas que pueden ser
almacenadas en el espacio disponible.